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第第页离子交换色谱柱的原理和再生方法色谱柱工作原理离子交换色谱柱是指离子交换色谱中的固定相中的一些带电荷的基团，这些带电基团通过静电相互作用与带相反电荷的离子结合。假如流动相中存在其他带相反电荷的离子，依照质量作用定律，这些离子将与结合在固定相上的反离子进行交换。

离子交换色谱柱基本原理：

离子交换色谱是蛋白纯化技术中常用的一种纯化方法，其原理是指被分别物质所带的电荷可与离子交换剂所带的相反电荷结合，这种带电分子与固定相之间的结合作用是可逆的，在更改pH或者用渐渐加添离子强度的缓冲液洗脱时，离子交换剂上结合的物质可与洗脱液中的离子发生交换而被洗脱到溶液中。由于不同物质的电荷不同，其与离子交换剂的结合本领也不同，所以被洗脱到溶液中的次序也不同，从而被分别出来。

离子交换色谱柱的再生方法有两种：

（1）先用25ml蒸馏水通过柱子以除去缓冲盐类，再用25ml甲醇冲洗，以除去由于调配效应而残存在骨架中的杂质，再用25ml蒸馏水除去不溶于甲醇的残存盐类，最后用缓冲液平衡。

（2）先用0.1mol/L的柠檬酸洗涤，然后用水洗涤（不要用碱性溶液，以防硅胶基质溶解），最后用缓冲液平衡。液相色谱柱安装后的使用

色谱柱在使用前，可以进行柱的性能测试，并将结果保存起来，作为今后评价柱性能变化的参考。但要注意：柱性能可能由于所使用的样品、流动相、柱温等条件的差异而有所不同；另外，在做柱性能测试时是依照色谱柱出厂报告中的条件进行（出厂测试所使用的条件是较佳条件），只有这样，测得的结果才有可比性。

1、样品的前处理：

a、可以使用流动相溶解样品。

b、使用予处理柱除去样品中的强极性或与柱填料产生不可逆吸附的杂质。使用0.45？m的过滤膜过滤除去微粒杂质。

2、流动相的配制：

液相色谱是样品组分在柱填料与流动相之间质量交换而达到分别的目的，因此要求流动相具备以下的特点：

a、流动相对样品具有确定的溶解本领，保证样品组分不会沉淀在柱中（或长时间保留在柱中）。

b、流动相具有确定惰性，与样品不产生化学反应（特别情况除外）。

c、流动相的黏度要尽量小，以便在使用较长的分析柱时能得到好的分别效果；同时降低柱压降，延长液体泵的使用寿命（可运用提高温度的方法降低流动相的黏度）。

d、流动相的物化性质要与使用的检测器相适应。如使用UV检测器，可以使用对紫外吸取较低的溶剂配制。

e、流动相沸点不要太低，否则简单产生气泡，导致试验无法进行。

f、在流动相配制好后，确定要进行脱气。除去溶解在流动相中的微量气体既有利于检测，还可以防止流动相中的微量氧与样品发生作用。

3、流动相流速的选择：

因柱效是柱中流动相线性流速的函数，使用不同的流速可得到不同的柱效。对于一根特定的色谱柱，要努力探求较佳柱效，可以使用较佳流速。对内径为4.6mm的色谱柱，流速一般选择1ml/min，对于内径为4.0mm柱，流速0.8ml/min为佳。

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