超低温冷冻保存种质

关于超低温冷冻保存种质种质保存是指利用天然或人工创造的适宜环境保存种质资源，使个体中所含有的遗传物质保持其完整性，有高的活力，能通过繁殖将其遗传特性传递下去。第2页,共32页，星期六，2024年，5月按保存类型分类

按保存类型分类可分为两种类型非原生境保存

原生境保存第3页,共32页，星期六，2024年，5月亚马逊热带雨林第4页,共32页，星期六，2024年，5月第5页,共32页，星期六，2024年，5月第6页,共32页，星期六，2024年，5月第7页,共32页，星期六，2024年，5月离体保存种植保存种子保存超低温冷冻保存常用的种质保存方法第8页,共32页，星期六，2024年，5月抑制外植体生长的离体保存方法降低温度：抑制生长最常见的方法。降低环境中的氧含量：低气压处理、低氧分压处理使用生长延缓剂：多效唑、矮壮素其他方法：第9页,共32页，星期六，2024年，5月种子保存优点：占用空间少，保存期较长，易干燥，易包装和运输。缺点：不适用于无性繁殖的植物种类，随着时间的延长，种子的生活力逐渐下降，同时易受到病虫害的侵袭。第10页,共32页，星期六，2024年，5月种植保存自然保护区，植物园，森林公园缺点：占地多，需要大量的人力物力，费用高，易受到自然灾害的影响第11页,共32页，星期六，2024年，5月离体保存优点：占用空间少，无病虫害以及自然灾害的影响，不受季节限制。短时间可实现大量植物的增殖，无病毒。缺点：连续不断的继代培养可能会引起染色体和基因型的变异。第12页,共32页，星期六，2024年，5月种质资源超低温保存是将植物的细胞或组织经过防冻处理后,在液氮超低温-196℃下保存的方法。第13页,共32页，星期六，2024年，5月超低温冰箱第14页,共32页，星期六，2024年，5月离体植物材料的超低温冰冻保存技术植物材料的选取材料的预处理冰冻保护剂预处理降温冷冻操作化冻操作化冻材料的活力检测第15页,共32页，星期六，2024年，5月材料的选择常用于离体超低温保存的常用植物材料

愈伤组织、悬浮细胞、原生质体花粉和花粉胚茎尖、胚、幼龄植株第16页,共32页，星期六，2024年，5月材料的低温预处理材料的预处理材料的预培养第17页,共32页，星期六，2024年，5月冰冻保护剂预处理常用的冷冻防护剂：多为小分子中性物质，在溶液中易结合水分子发生水合作用，使溶液粘性增加，弱化水的结晶过程，达到保护的目的。第18页,共32页，星期六，2024年，5月

所使用的冷冻保护剂应具有以下特性：

◆分子质量较小

◆易于与溶剂混合

◆快速渗入细胞

◆无毒或毒性小

◆易洗脱

常用的是DMSO。第19页,共32页，星期六，2024年，5月保护剂预处理配制保护剂时，应该将其溶解在培养基里，或者是溶解在有糖或无糖的水中。保护剂应当缓慢加入。使用复合冰冻保护剂比单独使用更为有效。第20页,共32页，星期六，2024年，5月降温冰冻操作快速冷冻法慢速冷冻法预冷冻法干燥冷冻法包埋脱水法玻璃化法第21页,共32页，星期六，2024年，5月1、快速冷冻法指将植物材料从0℃或者其他预处理温度直接投入液氮中保存的方法，降温速度1000℃/min。2、慢速冷冻法将处于0℃或其他预处理温度的材料以1—2℃/min的降温速度从起始温度降到-100℃，稳定1h后，投入到液氮保存或以此降温速度连续降温至-196℃的方法。

第22页,共32页，星期六，2024年，5月c、预冷冻法

指将植物保存材料放入液氮前，需经过短暂时间的低温锻炼的方法。d、干燥冷冻法

将材料置于27—29℃烘箱内降低植物含水量，再投入液氮中保存的方法。

第23页,共32页，星期六，2024年，5月(e包埋冻存法第24页,共32页，星期六，2024年，5月f玻璃化法玻璃化冻存：采用添加高浓度抗冻剂,使细胞内水分固化形成玻璃态的超低温贮存方法。特点设备简单操作方便冻存效果好第25页,共32页，星期六，2024年，5月化冻操作a、快速解冻法指将液氮中保存的材料直接投入到37—40℃温水浴中进行解冻的方法。解冻的升温速度为500—750℃/min。b、慢速解冻法将液氮中保存的材料先置于0℃低温下解冻，再逐渐升至室温下进行解冻的方法。第26页,共32页，星期六，2024年，5月化冻材料的活力检测检验化冻后材料的生活力和存活率的最根本方法是再培养。FDA、TTC等染色的方法进行快速检测，只能作为生活力的预测指标第27页,共32页，星期六，2024年，5月第28页,共32页，星期六，2024年，5月1973年科学家首次成功地超低温保存了胡萝卜悬浮细胞。1993年，英国国家种质库采用超低温保存离体的苹果种质进行再培养成功。

超低温保存技术的发展第29页,共32页，星期六，2024年，5月超低温保存种质技术的应用前景悬浮细胞和愈伤组织的保存生长点冷冻保存胚状体（体细胞胚、花粉胚）冷冻保存原生质体冷冻保存第30页,共32页，星期六，2024年，5月小结生物细胞的低温