TQGCML 4275-2024 肉松食品中单核细胞增生李斯特氏菌的测定

ICS07.100.30CCSC53团 体 标 准T/QGCML4275—2024肉松食品中单核细胞增生李斯特氏菌的测定DeterminationofListeriamonocytogenesinmeatfloppings2024-05-21发布 2024-06-05实施全国城市工业品贸易中心联合会  发布T/QGCML4275T/QGCML4275—2024PAGE\*ROMANPAGE\*ROMANII目 次前言 II范围 1规范性引用文件 1术语和定义 1设备和材料 1培养基和试剂 1检验方法 2操作步骤 2结果报告 3前 言本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则 第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起草。请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。本文件由运城市综合检验检测中心提出。本文件由全国城市工业品贸易中心联合会归口。本文件主要起草人：韩珍珍、窦梦璇、曹本男、王彬、王彪、师娟、薄涛、李宣英。本文件为首次发布。T/QGCML4275T/QGCML4275—2024PAGEPAGE1肉松食品中单核细胞增生李斯特氏菌的测定范围本文件规定了肉松食品中单核细胞增生李斯特氏菌测定的设备和材料、培养基和试剂、检验方法、操作步骤和结果报告。本文件适用于肉松食品中单核细胞增生李斯特氏菌的测定。规范性引用文件（包括所有的修改单适用于本文件。GB4789.30—2016 食品安全国家标准 食品微生物学检验 单核细胞增生李斯特氏菌检验术语和定义本文件没有需要界定的术语和定义。设备和材料167除微生物实验室常规灭菌及培养设备外，其他设备和材料如下：生物安全柜；生化培养箱；均质器；显微镜带照相系统，10～100（油镜）；浊度仪；全自动微生物鉴定及药敏分析系统；单核细胞增生李斯特氏菌（ATCC19114）；金黄色葡萄球菌（ATCC6538）；马红球菌（ATCC6939）；英诺克李斯特氏菌（ATCC33090）；伊氏李斯特氏菌（ATCC19119）；斯氏李斯特氏菌（ATCC35967）。培养基和试剂测定过程中使用的培养基和试剂如下：LBLB、L；PALCAM琼脂；5～8％羊血琼脂；单核细胞增生李斯特氏菌生化鉴定试剂盒；李斯特氏菌显色培养基；GP检验方法GB4789.30—2016n=501～52个平行，步骤依次为增菌、分离、初筛、鉴定和计数。检测前应对实验室的环境及关键培养基及菌种进行验证，确保试验准确。操作步骤增菌以无菌操作取样品25g（m）放入含有225mLLB1增菌液的均质袋中，在拍击式均质器上连续1min～2min225mLL28000r/in～10000r/in均质1min～2min。于（30±1）℃培养（24±1）h，移取0.1mL，转种于10mLLB2增菌液内，于（30±1）℃培养（24±1）h。分离取LB2PACAM361℃24h～48hPALCAM初筛3～5（可以根据经验排除部分（24±1）h，同时在TSA-YE平板上划线，于（36±1）℃培养18h～24h，然后选择木糖阴性、鼠李糖阳性的纯培养物继续进行鉴定。鉴定溶血试验20～25（（英诺克李斯特氏菌24h～48h，于明亮处观察，单核细胞增生李斯特氏菌呈现窄清晰明亮的424h～48h协同溶血试验1mm～2mm，同时接种单核细胞增生李斯特氏菌、英诺克李斯特氏菌、伊氏李斯特氏菌和斯氏李斯特氏菌，于（36±1）24h～48h。2mmβ5mm～10mmβ424h～48h再观察。注：5％～8％的单核细胞增生李斯特氏菌在马红球菌一端有溶血增强现象。生化试剂盒及全自动生化鉴定仪鉴定从营养琼脂平板上挑取目标菌落，先利用浊度仪制成0.5McF浓度的菌悬液，再用GP鉴定卡参照操作说明进行操作，采用全自动微生物鉴定