TNAIA 0287-2024 枸杞中6种黄酮类物质含量的测定 液相色谱-质谱质谱法

ICS65.020.01CCSA017

T/NAIA团 体 标 准T/NAIA0287-2024枸杞中6种黄酮类物质含量的测定液相色谱-质谱/质谱法DeterminationofflavanoidsinwolfberryLiquidchromatography-massspectrometry2024-05-10发布 2024-05-30实施宁夏化学分析测试协会 发布T/NAIA0287-2024T/NAIA0287-2024II前言本文件按照GB/T1.1-2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起草。本文件由宁夏化学分析测试协会提出并归口。化学分析测试协会。翔、开建荣、张学玲、张小飞。本文件为首次发布。T/NAIA0287-2024T/NAIA0287-2024PAGEPAGE1枸杞中6种黄酮类物质含量的测定液相色谱-质谱/质谱法范围本文件规定了枸杞中黄酮类物质的液相色谱-质谱/质谱测定方法。-7-O-ft奈酚-3-O-甲氧基ft奈酚-3-O-芸香糖苷和水仙苷的液相色谱-质谱/质谱法测定。1.00mg/kg，异槲皮苷和槲皮素-7-O-葡萄糖0.010mg/kg，ft奈酚-3-O-6-甲氧基ft奈酚-3-O-芸香糖苷和水仙苷的方法定量限均为0.050mg/kg。规范性引用文件（有的修改单）适用于本文件。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法术语和定义本文件没有需要规定的术语和定义。原理70%甲醇溶液提取，涡旋超声，微孔滤膜过滤，用液相色谱-质谱/质谱仪检测和确证，外标法定量。试剂与材料除非另有规定外，所有试剂均为分析纯，水符合GB/T6682中规定的一级水。乙腈（CH3CN）：色谱纯。甲醇（CH3OH）：色谱纯。甲酸（CH2O2）：色谱纯。 芦丁（rutin，CAS153-18-4）、异槲皮苷（isoquercitrin，CAS482-35-9）、槲皮素-7-O-葡萄糖苷（quercetin-7-O-glucoside，CAS491-50-9）、ft奈酚-3-O-芸香糖苷（kaempferol-3-O-rutinoside，CAS17650-84-9）、6-甲氧基ft奈酚-3-O-芸香糖苷（6-methoxykaemphenol-3-O-rutinoside，CAS号403861-33-6）和水仙苷（narcissin，CAS号604-80-8）。标准溶液配制标准储备溶液：分别准确称取适量的芦丁、异槲皮苷、槲皮素-7-O-葡萄糖苷、ft奈酚-3-O-芸香糖苷、6-甲氧基ft奈酚-3-O-芸香糖苷和水仙苷标准品（0.011000mg/L的标准储备溶液，-18下保存。10mg/L标准中间溶液，-18℃下保存。标准工作溶液（0.01mg/L~30mg/L）用甲醇定容至刻度。70%甲醇溶液（体积分数）：70mL100mL。0.1%甲酸溶液（体积分数）：1mL1000mL。滤膜：0.22μm，有机相。离心管：50mL，塑料。仪器与设备液相色谱-质谱/质谱仪：配有电喷雾离子源（ESI）。6.2 0.01g0.0001g。高速万能粉碎机：10000r/min。超声波清洗机。离心机：4000r/min。涡旋混合器。分析步骤试样的制备-18℃（可加少量的液氮（30gs），分别置于样品瓶中，-18冷冻备用。试样的提取鲜果称取试样2g（精确至0.0001g）于50mL离心管，加入20mL70%甲醇溶液（5.6），充分振摇混匀，超声提取30min，放入离心机，4000r/min离心5min，上清液过0.22μm滤膜，待测定。干果称取试样1g（精确至0.0001g）于50mL离心管，加入20mL70%甲醇溶液（5.6），充分振摇混匀，超声提取30min，放入离心机，4000r/min离心5min，上清液过0.22μm滤膜，待测定。测定液相色谱参考条件a）色谱柱：C18柱，150mm×2.1mm（i.d），1.8μm，或性能相当者；b）柱温：40℃；流速：0.3mL/min；流动相：A0.1%甲酸溶液（5.7），Be）进样量：2.0μL。表1流动相及其梯度条件（VA+VB）时间(min)流速(mL/min)VA(%)VB(%)0.000.390101.000.3901014.000.3109016.000.3109018.000.3901020.000.39010质谱参考条件a）离子源类型：电喷雾离子源；b）扫描方式：选择离子监测模式；c）电喷雾电压：3.5kV；d）毛细管传输温度：300℃e）碰撞压力：1.5mTorr；f）鞘气：30arb；g）辅气：10arb。表2黄酮类物质的选择离子监测分析参数名称保留时间/min定性离子对/m/z定量离子对/m/z碰撞能量/eV芦丁rutin4.73609.14/271.071609.14/300.042609.14/300.042-43.25-26.61异槲皮苷isoquercitrin4.91462.98/301.042462.98/301.042-21.474.9槲皮素-7-O-葡萄糖苷quercetin-7-O-glucoside4.90463.21/151.071463.21/301.113463.21/301.113-38.11-22.78ft奈酚-3-O-芸香糖苷5.17593.27/255.042593.27/285.042-54.24kaempferol-3-O-rutinoside593.27/285.042-29.856-甲氧基ft奈酚-3-O-芸香糖苷6-methoxykaemphenol-3-O-rutinoside5.25623.3/271.042623.3/315.113623.3/315.113-53.82-27.83水仙苷narcissin5.25623.21/300.042623.21/315.042623.21/315.042-43.42-43.42定性测定苷、槲皮素-7-O-葡萄糖苷、ft奈酚-3-O-芸香糖苷、6-甲氧基ft奈酚-3-O-芸香糖苷和水仙苷4.73、4.91、4.90、5.17、5.25、5.25minA1品中存在对应的被测物。表3定性确证相对离子丰度的最大允许偏差相对离子丰度>50%20%至50%10%至20%≤10%允许的相对偏差±20%±25%±30%±50%定量测定采用外标-校准曲线法定量测定。保证所测样品中组分的响应值均在仪器的线性范围内。空白试验除不加入试样外，其他过程与试样处理相同。结果计算和表达试样中芦丁、异槲皮苷、槲皮素-7-O-葡萄糖苷、ft奈酚-3-O-芸香糖苷、6-甲氧基ft奈酚-3-O-芸香糖苷和水仙苷的含量以质量分数计，数值以毫克每千克（mg/kg）计，按式（1）计算：1000

……（1）式中：

m 1000——试样中被测物残留量的数值，单位为毫克每千克（mg/kg）；——试样溶液中被测物的含量，单位为毫克每升（mg/L）；V——试样中加入的提取溶液体积，单位为毫升（mL）；m——试样质量的数值，单位为克（g）。注：测定结果用平行测定的算术平均值表示，保留三位有效数字。精密度在重复性条件下，获得的两次独立测定结果的绝对差值不超过算术平均值的10%。色谱图各目标化合物的选择离子监测（SRM）色谱图参见图A。附录A（资料性）黄酮类物质的选择离子监测（SRM）质量色谱图黄酮类物质的选择离子监测（SRM）质量色谱图见图A。

160000

140000120000100000800006000040000

200004.904.90

04.4 4.6 4.8 5.0 5.2 5.4 5.6

响应值

5.17响应值4.735.17响应值4.73

6000040000 2000004.44.64.85.05.25.45.65.86.06.2

ft奈酚-3-O-芸香糖苷

t,minrutin

t,min5.25350000响应值5.25

5.25350000响应值5.25300000

3000002500