《微生物基》课件-单元三 真核微生物的构造和形态观察

微生物学基础单元三真核微生物的构造和形态观察项目一酵母菌的构造和形态观察一、酵母菌的形态和结构

1真核微生物的概述凡是细胞核具有核膜、能进行有丝分裂、细胞质中存在线粒体或同时存在叶绿体等细胞器的微小生物，都称为真核微生物。一、酵母菌的形态和结构

1真核微生物的概述真菌属于真核微生物,其细胞结构由细胞壁、细胞膜、细胞质、细胞核、细胞器（线粒体、内质网、核糖体）等组成。一、酵母菌的形态和结构

２酵母菌概述个体一般以单细胞状态存在；多数出芽繁殖，也有的裂殖；能发酵糖类产能，喜在含糖量较高、酸度较大的环境中生长；细胞壁常含有甘露聚糖；一、酵母菌的形态和结构

３酵母菌形态酵母菌是一群单细胞的真核微生物；其形态因种而异.通常为圆形、卵圆形或椭圆形；也有特殊形态，如柠檬形、三角形、藕节状、腊肠形，假菌丝等。一、酵母菌的形态和结构

４酵母菌假菌丝酵母菌在一定条件下培养，产生的芽体与母细胞不分离形成的特殊形态。一、酵母菌的形态和结构

５酵母菌大小酵母菌比细菌粗约10倍，其直径一般为１—5μm，长度为5—30μm，最长可达100μm；酵母的大小、形态与菌龄、环境有关。一般成熟的细胞大于幼龄的细胞，液体培养的细胞大于固体培养的细胞。有些种的细胞大小、形态极不均匀，而有些种的酵母则较为均匀。一、酵母菌的形态和结构

６酵母菌细胞结构概述：一般具有细胞壁、细胞膜、细胞核、液泡、线粒体、内质网、微体、微丝、及内含物等，有的菌体还有出芽痕、诞生痕。一、酵母菌的形态和结构

６酵母菌细胞结构细胞壁结构：酵母细胞壁呈“三明治”结构，葡聚糖（维持细胞壁强度）和甘露聚糖都是复杂的分枝状聚合物，还含有少量的几丁质、脂类和无机盐。外层：主要为甘露聚糖

内层：主要为葡聚糖

中间层：主要是蛋白质细胞壁一、酵母菌的形态和结构

６酵母菌细胞结构细胞膜上出芽痕和诞生痕：酵母出芽繁殖时，子细胞与母细胞分离，在子、母细胞壁上都会留下痕迹。在母细胞的细胞壁上称出芽痕，子细胞细胞壁上的位点称诞生痕。由于多重出芽，致使酵母细胞表面有多个小突起。根据酵母细胞表面留下芽痕的数目，可估计该细胞的菌龄。一、酵母菌的形态和结构

６酵母菌细胞结构细胞膜：酵母细胞膜是双磷脂层构造，其间镶嵌着蛋白质和甾醇；酵母菌的细胞膜与原核生物的基本相同。但有的酵母菌如酿酒酵母中含有固醇类（甾醇）,这在原核生物是罕见的，甾醇类物质可增加膜的硬度；酵母细胞膜的功能：调节细胞外溶质运送到细胞内的渗透屏障；细胞壁等大分子的生物合成和装配基地；部分酶的合成和作用场所。一、酵母菌的形态和结构

６酵母菌细胞结构细胞核：酵母具有由多孔核膜包裹着的细胞核，核膜是一种双层单位膜，上面有大量的核孔（核膜包裹，轮廓分明）；核膜：核孔40～70nm，透性比任何生物膜都大；核内有染色体和核仁（rRNA含量很高，合成核糖体的场所）。细胞核的功能:携带遗传信息，控制细胞的增殖和代谢。一、酵母菌的形态和结构

６酵母菌细胞结构细胞质：细胞质主要是溶胶状物质,内含各种功能不同的结构——细胞器：核糖核糖体、线粒体、内质网、液泡、高尔基体等。核糖体：酵母菌的核糖体为80S，由60S和40S大小亚基构成，合成蛋白质的场所。线粒体：双层单位膜包围的细胞器；含环状DNA，可自主复制；是进行氧化磷酸化的细胞器，产能和储能中心。一、酵母菌的形态和结构

６酵母菌细胞结构细胞质：细胞质内细胞器：内质网、液泡、高尔基体。内质网：分布在整个细胞中的由膜构成的管道和网状结构；核糖体附着其上；起物质传递的作用。液泡：单层膜包裹的囊泡物，含水、有机酸、盐类、和水解酶类，调节渗透压并作为营养物和水解酶的储藏库。高尔基体：一种内膜结构，由扁平双层膜和小泡所构成，膜都是光滑的；为细胞提供一个内部的运输系统。二、酵母菌的繁殖方式和生活史

１酵母菌繁殖方式繁殖方式二、酵母菌的繁殖方式和生活史

１酵母菌繁殖方式无性繁殖：芽殖（各属酵母菌都存在），无性繁殖的主要方式，一个酵母能形成的芽数是有限的（平均24个）；出芽方式：多边出芽、两端出芽、三边出芽、单边出芽；环境适宜时，可出现假菌丝；二、酵母菌的繁殖方式和生活史

１酵母菌繁殖方式无性繁殖：芽殖过程：母细胞形成小突起（A—D）

核裂（E—G）原生质分配（H—I）新膜形成（J—K）形成新细胞壁（L）成熟后，芽细胞和母细胞分离：在母细胞上留下一个芽痕；在芽细胞上留下一个诞生痕。二、酵母菌的繁殖方式和生活史

１酵母菌繁殖方式无性繁殖：裂殖（少数酵母菌存在），借细胞横分裂法繁殖,与细菌类似，如裂殖酵母；裂殖过程:细胞伸长，核分裂为二，然后细胞中央出现隔膜，将细胞横分为两个相等大小的、各具有一个核的子细胞。二、酵母菌的繁殖方式和生活史

１酵母菌繁殖方式无性繁殖：产无性孢子节孢子：真菌的菌丝产生横隔膜,然后断裂产生,也称粉孢子；掷孢子：孢子成熟后，以喷射机制将孢子射出；厚垣孢子：在菌丝的顶端或中间长出,部分原生质浓缩变圆,类脂物质密集,长出厚壁。二、酵母菌的繁殖方式和生活史

１酵母菌繁殖方式有性繁殖：酵母菌以形成子囊和子囊孢子的方式进行有性繁殖；过程：两个性别不同的单倍体细胞靠近，相互接触；接触处细胞壁消失，融合并形成一个通道，质配；核配形成双倍体细胞——接合子；或以二倍体方式进行营养细胞生长繁殖，独立生活；或进行减数分裂，形成4个或8个子囊孢子，而原有的营养细胞就成为子囊。子囊孢子萌发形成单倍体营养细胞。酵母的二倍体营养体细胞减数分裂后产生四个单倍体的核原细胞发育成子囊，四个子囊孢子将来发育成单倍体营养体细胞二、酵母菌的繁殖方式和生活史

２酵母菌的生活史生活史：上代个体经一系列生长、发育阶段而产生下一代个体的全部过程。各种酵母的生活史可分为三种类型：单倍体型双倍体型单双倍体型二、酵母菌的繁殖方式和生活史

２酵母菌的生活史生活史：单倍体型以八孢裂殖酵母为代表：营养细胞是单倍体；无性繁殖以裂殖方式进行；双倍体细胞不能独立生活，故双倍体阶段短，一经生成立即减数分裂。二、酵母菌的繁殖方式和生活史

２酵母菌的生活史生活史：双倍体型以路德类酵母为代表：营养体为双倍体，不断进行芽殖，双倍体营养阶段长，单倍体的子囊孢子在子囊内发生接合。单倍体阶段仅以子囊孢子形式存在，故不能独立生活。二、酵母菌的繁殖方式和生活史

２酵母菌的生活史生活史：单双倍体型以啤酒酵母为代表：单倍体营养细胞和双倍体营养细胞均可进行芽殖；营养体既可以单倍体形式也可以双倍体形式存在；在特定条件下进行有性生殖；单倍体和双倍体两个阶段同等重要,形成世代交替。三、酵母菌的菌落特征

１固体培养特征菌落特征：菌落大而厚，圆形，光滑湿润，粘性，颜色单调，常见白色、土黄色、红色；易挑取。三、酵母菌的菌落特征

２液体培养特征菌落特征：在液体培养基上，不同的酵母菌生长的情况不同；好气性生长的酵母可在培养基表面上形成菌膜，其厚度因种而异；有的酵母菌在生长过程中始终沉淀在培养基底部；有的酵母菌在培养基中均匀生长，使培养基呈浑浊状态。四、常见酵母菌

１酵母菌种类与分布酵母菌种类较多，目前已知有500多种；分布广，在水果、蔬菜、花蜜和植物叶子表面以及果园的土壤里；在牛奶、动物的排泄物以及空气中也有酵母存在；大多数腐生，少数寄生；与人类关系密切，人类的第一种“家养微生物”。四、常见酵母菌

２工业上常用的酵母菌啤酒酵母：按细胞长与宽的比例，分为三组：第一组长宽比例1~2，细胞多为圆形、卵圆形，用于生产啤酒、白酒和酒精以及面包；第二组长宽比例为2，细胞多为卵形或长卵形，包括啤酒酵母的一些变种，如葡萄酒酵母等菌种，用于生产葡萄酒、果酒；第三组长宽比例大于2，细胞为长圆形，耐高渗透压，发酵甘蔗糖蜜生产酒精。汉逊酵母：为圆形、椭圆形、卵圆形、腊肠形不等，多边芽殖；能产生乙酸乙酯，增加产品香味，可用于酿酒和食品工业。假丝酵母：细胞圆形、卵形或长形，多边芽殖，能形成假菌丝，能利用造纸工业中的亚硫酸废液、糖蜜、马铃薯淀粉和木材水解液等。因此能利用假丝酵母来处理工业和农副产品加工业的废弃物，生产可食用的蛋白质。白地霉：长筒形、方形，也有椭圆形，白地霉菌体的蛋白质营养价值很高，可供食用和饲料用。啤酒酵母四、常见酵母菌

3酵母菌的应用酵母菌是人类应用比较早的微生物。在食品方面——酿酒、制作面包、生产调味品等。在医药方面——生产酵母片、核糖核酸、核黄素、细胞色素C、B族维生素、乳糖酶、脂肪酶、氨基酸等。在化工方面——使石油脱腊、以石油为原料生产柠檬酸等。在农业方面——生产饲料（例如SCP）。在生物工程方面——作为基因工程的受体菌。四、常见酵母菌

4酵母菌的危害发酵工业的污染菌,影响发酵的产量和质量;酵母菌是一种发酵菌,使用量超标会引起食品的过度发酵导致腐败变质,促进细菌的生长;病原菌,会引起皮肤、粘膜、呼吸道、消化道等多种疾病,如白假丝酵母,即白色念珠菌。项目一酵母菌的构造和形态观察一、酵母菌的形态和结构

1真核微生物的概述凡是细胞核具有核膜、能进行有丝分裂、细胞质中存在线粒体或同时存在叶绿体等细胞器的微小生物，都称为真核微生物。一、酵母菌的形态和结构

1真核微生物的概述真菌属于真核微生物,其细胞结构由细胞壁、细胞膜、细胞质、细胞核、细胞器（线粒体、内质网、核糖体）等组成。一、酵母菌的形态和结构

２酵母菌概述个体一般以单细胞状态存在；多数出芽繁殖，也有的裂殖；能发酵糖类产能，喜在含糖量较高、酸度较大的环境中生长；细胞壁常含有甘露聚糖；一、酵母菌的形态和结构

３酵母菌形态酵母菌是一群单细胞的真核微生物；其形态因种而异.通常为圆形、卵圆形或椭圆形；也有特殊形态，如柠檬形、三角形、藕节状、腊肠形，假菌丝等。一、酵母菌的形态和结构

４酵母菌假菌丝酵母菌在一定条件下培养，产生的芽体与母细胞不分离形成的特殊形态。一、酵母菌的形态和结构

５酵母菌大小酵母菌比细菌粗约10倍，其直径一般为１—5μm，长度为5—30μm，最长可达100μm；酵母的大小、形态与菌龄、环境有关。一般成熟的细胞大于幼龄的细胞，液体培养的细胞大于固体培养的细胞。有些种的细胞大小、形态极不均匀，而有些种的酵母则较为均匀。一、酵母菌的形态和结构

６酵母菌细胞结构概述：一般具有细胞壁、细胞膜、细胞核、液泡、线粒体、内质网、微体、微丝、及内含物等，有的菌体还有出芽痕、诞生痕。一、酵母菌的形态和结构

６酵母菌细胞结构细胞壁结构：酵母细胞壁呈“三明治”结构，葡聚糖（维持细胞壁强度）和甘露聚糖都是复杂的分枝状聚合物，还含有少量的几丁质、脂类和无机盐。外层：主要为甘露聚糖

内层：主要为葡聚糖

中间层：主要是蛋白质细胞壁一、酵母菌的形态和结构

６酵母菌细胞结构细胞膜上出芽痕和诞生痕：酵母出芽繁殖时，子细胞与母细胞分离，在子、母细胞壁上都会留下痕迹。在母细胞的细胞壁上称出芽痕，子细胞细胞壁上的位点称诞生痕。由于多重出芽，致使酵母细胞表面有多个小突起。根据酵母细胞表面留下芽痕的数目，可估计该细胞的菌龄。一、酵母菌的形态和结构

６酵母菌细胞结构细胞膜：酵母细胞膜是双磷脂层构造，其间镶嵌着蛋白质和甾醇；酵母菌的细胞膜与原核生物的基本相同。但有的酵母菌如酿酒酵母中含有固醇类（甾醇）,这在原核生物是罕见的，甾醇类物质可增加膜的硬度；酵母细胞膜的功能：调节细胞外溶质运送到细胞内的渗透屏障；细胞壁等大分子的生物合成和装配基地；部分酶的合成和作用场所。一、酵母菌的形态和结构

６酵母菌细胞结构细胞核：酵母具有由多孔核膜包裹着的细胞核，核膜是一种双层单位膜，上面有大量的核孔（核膜包裹，轮廓分明）；核膜：核孔40～70nm，透性比任何生物膜都大；核内有染色体和核仁（rRNA含量很高，合成核糖体的场所）。细胞核的功能:携带遗传信息，控制细胞的增殖和代谢。一、酵母菌的形态和结构

６酵母菌细胞结构细胞质：细胞质主要是溶胶状物质,内含各种功能不同的结构——细胞器：核糖核糖体、线粒体、内质网、液泡、高尔基体等。核糖体：酵母菌的核糖体为80S，由60S和40S大小亚基构成，合成蛋白质的场所。线粒体：双层单位膜包围的细胞器；含环状DNA，可自主复制；是进行氧化磷酸化的细胞器，产能和储能中心。一、酵母菌的形态和结构

６酵母菌细胞结构细胞质：细胞质内细胞器：内质网、液泡、高尔基体。内质网：分布在整个细胞中的由膜构成的管道和网状结构；核糖体附着其上；起物质传递的作用。液泡：单层膜包裹的囊泡物，含水、有机酸、盐类、和水解酶类，调节渗透压并作为营养物和水解酶的储藏库。高尔基体：一种内膜结构，由扁平双层膜和小泡所构成，膜都是光滑的；为细胞提供一个内部的运输系统。二、酵母菌的繁殖方式和生活史

１酵母菌繁殖方式繁殖方式二、酵母菌的繁殖方式和生活史

１酵母菌繁殖方式无性繁殖：芽殖（各属酵母菌都存在），无性繁殖的主要方式，一个酵母能形成的芽数是有限的（平均24个）；出芽方式：多边出芽、两端出芽、三边出芽、单边出芽；环境适宜时，可出现假菌丝；二、酵母菌的繁殖方式和生活史

１酵母菌繁殖方式无性繁殖：芽殖过程：母细胞形成小突起（A—D）

核裂（E—G）原生质分配（H—I）新膜形成（J—K）形成新细胞壁（L）成熟后，芽细胞和母细胞分离：在母细胞上留下一个芽痕；在芽细胞上留下一个诞生痕。二、酵母菌的繁殖方式和生活史

１酵母菌繁殖方式无性繁殖：裂殖（少数酵母菌存在），借细胞横分裂法繁殖,与细菌类似，如裂殖酵母；裂殖过程:细胞伸长，核分裂为二，然后细胞中央出现隔膜，将细胞横分为两个相等大小的、各具有一个核的子细胞。二、酵母菌的繁殖方式和生活史

１酵母菌繁殖方式无性繁殖：产无性孢子节孢子：真菌的菌丝产生横隔膜,然后断裂产生,也称粉孢子；掷孢子：孢子成熟后，以喷射机制将孢子射出；厚垣孢子：在菌丝的顶端或中间长出,部分原生质浓缩变圆,类脂物质密集,长出厚壁。二、酵母菌的繁殖方式和生活史

１酵母菌繁殖方式有性繁殖：酵母菌以形成子囊和子囊孢子的方式进行有性繁殖；过程：两个性别不同的单倍体细胞靠近，相互接触；接触处细胞壁消失，融合并形成一个通道，质配；核配形成双倍体细胞——接合子；或以二倍体方式进行营养细胞生长繁殖，独立生活；或进行减数分裂，形成4个或8个子囊孢子，而原有的营养细胞就成为子囊。子囊孢子萌发形成单倍体营养细胞。酵母的二倍体营养体细胞减数分裂后产生四个单倍体的核原细胞发育成子囊，四个子囊孢子将来发育成单倍体营养体细胞二、酵母菌的繁殖方式和生活史

２酵母菌的生活史生活史：上代个体经一系列生长、发育阶段而产生下一代个体的全部过程。各种酵母的生活史可分为三种类型：单倍体型双倍体型单双倍体型二、酵母菌的繁殖方式和生活史

２酵母菌的生活史生活史：单倍体型以八孢裂殖酵母为代表：营养细胞是单倍体；无性繁殖以裂殖方式进行；双倍体细胞不能独立生活，故双倍体阶段短，一经生成立即减数分裂。二、酵母菌的繁殖方式和生活史

２酵母菌的生活史生活史：双倍体型以路德类酵母为代表：营养体为双倍体，不断进行芽殖，双倍体营养阶段长，单倍体的子囊孢子在子囊内发生接合。单倍体阶段仅以子囊孢子形式存在，故不能独立生活。二、酵母菌的繁殖方式和生活史

２酵母菌的生活史生活史：单双倍体型以啤酒酵母为代表：单倍体营养细胞和双倍体营养细胞均可进行芽殖；营养体既可以单倍体形式也可以双倍体形式存在；在特定条件下进行有性生殖；单倍体和双倍体两个阶段同等重要,形成世代交替。三、酵母菌的菌落特征

１固体培养特征菌落特征：菌落大而厚，圆形，光滑湿润，粘性，颜色单调，常见白色、土黄色、红色；易挑取。三、酵母菌的菌落特征

２液体培养特征菌落特征：在液体培养基上，不同的酵母菌生长的情况不同；好气性生长的酵母可在培养基表面上形成菌膜，其厚度因种而异；有的酵母菌在生长过程中始终沉淀在培养基底部；有的酵母菌在培养基中均匀生长，使培养基呈浑浊状态。四、常见酵母菌

１酵母菌种类与分布酵母菌种类较多，目前已知有500多种；分布广，在水果、蔬菜、花蜜和植物叶子表面以及果园的土壤里；在牛奶、动物的排泄物以及空气中也有酵母存在；大多数腐生，少数寄生；与人类关系密切，人类的第一种“家养微生物”。四、常见酵母菌

２工业上常用的酵母菌啤酒酵母：按细胞长与宽的比例，分为三组：第一组长宽比例1~2，细胞多为圆形、卵圆形，用于生产啤酒、白酒和酒精以及面包；第二组长宽比例为2，细胞多为卵形或长卵形，包括啤酒酵母的一些变种，如葡萄酒酵母等菌种，用于生产葡萄酒、果酒；第三组长宽比例大于2，细胞为长圆形，耐高渗透压，发酵甘蔗糖蜜生产酒精。汉逊酵母：为圆形、椭圆形、卵圆形、腊肠形不等，多边芽殖；能产生乙酸乙酯，增加产品香味，可用于酿酒和食品工业。假丝酵母：细胞圆形、卵形或长形，多边芽殖，能形成假菌丝，能利用造纸工业中的亚硫酸废液、糖蜜、马铃薯淀粉和木材水解液等。因此能利用假丝酵母来处理工业和农副产品加工业的废弃物，生产可食用的蛋白质。白地霉：长筒形、方形，也有椭圆形，白地霉菌体的蛋白质营养价值很高，可供食用和饲料用。啤酒酵母四、常见酵母菌

3酵母菌的应用酵母菌是人类应用比较早的微生物。在食品方面——酿酒、制作面包、生产调味品等。在医药方面——生产酵母片、核糖核酸、核黄素、细胞色素C、B族维生素、乳糖酶、脂肪酶、氨基酸等。在化工方面——使石油脱腊、以石油为原料生产柠檬酸等。在农业方面——生产饲料（例如SCP）。在生物工程方面——作为基因工程的受体菌。四、常见酵母菌

4酵母菌的危害发酵工业的污染菌,影响发酵的产量和质量;酵母菌是一种发酵菌,使用量超标会引起食品的过度发酵导致腐败变质,促进细菌的生长;病原菌,会引起皮肤、粘膜、呼吸道、消化道等多种疾病,如白假丝酵母,即白色念珠菌。项目一酵母菌的构造和形态观察五、项目实训：酵母菌死活细胞的染色鉴别

1实验目的通过观察了解酵母细胞的形态结构；掌握鉴别酵母细胞死活的染色方法。五、项目实训：酵母菌死活细胞的染色鉴别

２基本原理酵母菌细胞较大，不必染色即可用显微镜观察其形态；用美兰染色液可对酵母细胞进行死活染色鉴别。美兰是一种弱氧化剂，氧化态呈蓝色，还原态呈无色。活的酵母细胞，因新陈代谢的不断进行，具有一定的还原能力，能将进入细胞的美兰还原，而细胞不被染色。因此，用美兰对酵母细胞染色一定时间后，无色的为活细胞，呈蓝色的则为死亡细胞；需要注意的是，一个活酵母菌的还原能力是一定的，必须严格控制染料的浓度和染色时间。五、项目实训：酵母菌死活细胞的染色鉴别

３操作步骤一般形态观察：取洁净的载玻片一块，用滴管取酵母菌悬滴于载玻片中央，取盖玻片一块，小心地将盖玻片一端与菌液接触，然后缓慢地将盖玻片放下，以避免产生气泡（酵母菌水浸标本片）；先用低倍镜观察，再用高倍镜观察，观察时注意酵母细胞的形状及出芽情况。五、项目实训：酵母菌死活细胞的染色鉴别

３操作步骤死活酵母细胞的染色鉴别：取0.1％美兰液一滴，滴在一块洁净的载玻片中央，加一滴酵母菌悬液，混合均匀，染色3～5分钟后加盖玻片制成水浸标本片，镜检；注意区分死细胞（蓝色）与活细胞（不着色）；死亡率计算：在一个视野里计数死细胞和活细胞，共计数５～６个视野。

五、项目实训：酵母菌死活细胞的染色鉴别

３操作步骤假丝酵母的观察：将假丝酵母划线接种在麦芽汁或豆芽汁平板上，在划线部分加无菌盖玻片，28～30℃培养3d。将假丝酵母的平板放在显微镜下，用高倍镜观察假丝酵母的形状和大小。五、项目实训：酵母菌死活细胞的染色鉴别

３操作步骤子囊孢子的观察：活化酿酒酵母：将酿酒酵母接种在麦芽汁或豆芽汁液体培养基中，28～30℃培养24h，如此连续转接2～3次；移接产孢培养基：将活化的酿酒酵母转接到醋酸钠斜面培养基上，30℃培养4～5d；制片：挑取少许菌苔于载玻片中央的无菌水滴中，经涂片以及热固定后，加数滴孔雀绿染色2min后水洗，用吸水纸吸干残余的水；镜检：在高倍镜下观察子囊孢子的形状和每个子囊内的孢子数。项目一酵母菌的构造和形态观察六、项目实训：酵母菌大小的测定

1实验目的学习测微尺（镜台测微尺、目镜测微尺）的使用方法；掌握酵母菌菌体大小的测量方法。六、项目实训：酵母菌大小的测定

２基本原理镜台测微尺：一张中央部分刻有精确等分线的载玻片，刻度的总长是1mm，被等分为100格，每格0.01mm（即10μm）。六、项目实训：酵母菌大小的测定

２基本原理目镜测微尺：一块可以放入目镜的圆形小玻片，其中央有精确的等分刻度，有等分为50小格和100小格的两种。在测量时将目镜测微尺放在目镜的隔板上，即可来测量经显微镜放大后的细胞物象；每一格实际代表的长度随目镜和物镜的放大倍数而改变，因此在测量微生物大小前必须用镜台测微尺进行校正。六、项目实训：酵母菌大小的测定

３操作步骤镜台测微尺的安装：把镜台测微尺放在显微镜载物台上，刻度朝上；目镜测微尺的安装：把目镜上的透镜旋开，把目镜测微尺放在目镜的光阑上，刻度朝下，然后再把透镜装回，最后把目镜套入镜筒内。六、项目实训：酵母菌大小的测定

３操作步骤目镜测微尺的标定：使目镜测微尺与镜台测微尺的刻度相平行。两尺在某一区域内两线完全重合，然后分别数出两重合线之间镜台测微尺和目镜测微尺所占格数；用同法分别标定高倍镜、油镜下的目镜测微尺各格的长度。六、项目实训：酵母菌大小的测定

３操作步骤制片：按照一般酵母菌形态观察制水浸片；菌体大小的测量：在目镜下找到目的物，用目镜测微尺先量菌的宽度格数；然后量长度格数。例如，目镜测微尺在油镜下标定的结果为每格相当于1.3μm，测量结果菌体长度为目镜测微尺的2格，宽度为1.2格，则菌体的实际长度＝2×1.3μm=2.6μm，实际宽度=1.2×1.3μm=1.56(μm)。测量酵母菌大小时，通常要在同一玻片上测量10~20个菌体，求出平均值。项目一酵母菌的构造和形态观察七、项目实训：酵母菌数目的测定

1实验目的学习血球计数板计数原理；掌握使用血球计数板进行微生物计数的方法。七、项目实训：酵母菌数目的测定

２基本原理血球计数板的构造：A、盖玻片B、载玻片：玻片中有四条下凹的槽，三个平台，中间的平台较宽，中间又被一短横槽隔为两半，每半边上面,刻有一个方格网（共两个）。宽平台上刻有两个方格网七、项目实训：酵母菌数目的测定

２基本原理载玻片宽平台上刻有两个方格网，方格网的构造：9个大格，中间大格用来计算

七、项目实训：酵母菌数目的测定

２基本原理中间大方格（计数室Ｅ）放大后构造：即E格用来计算，E格（放大后两种形态计）一种是25X16形式：25中格，每一个中格又可以放大，由16个小格组成一种是16X25形成：16中格，每一个中格又可以放大，由25个小格组成

七、项目实训：酵母菌数目的测定

２基本原理总结：即9大格拿一大格计数（Ｅ格）；这一大格有25中格（每个中格有16小格）或者16中格（每个中格有25小格）；所以一大格有400小格。七、项目实训：酵母菌数目的测定

３取样方法两种取样方法：第一种：在80小格中取样，五点取样，即五个中格，每个中格16个小格（共80小格）；第二种：在100小格中取样，四点取样，即四个中格，每个中格25个小格（共100小格）；16X5=8025X4=100七、项目实训：酵母菌数目的测定

4计算方法计算1ml培养液有多少酵母菌数：以25中格X16小格的为计算方法五点取样，即五个中格，每个中格16个小格（共80小格）；如果算出80小格共有总数A个，则每一个小格有酵母菌数为：G=A/80；则一个大格有400小格，所以一个大格有酵母菌数为：400G；而每一个大格的体积为：大格的长和宽各为１mm，深度为0.1mm，故其体积为0.1mm3，合1X10-4mL。七、项目实训：酵母菌数目的测定

4计算方法计算1ml培养液有多少酵母菌数：如果是25X16400GX104=400X（A/80）X104＝50000A如果是16X25400X（A/100）X104＝40000A若该1ml培养液是原菌液稀释Ｂ倍数后获得的，则1ml原菌液中的酵母菌数为：

50000AXB=50000AB

或40000AXB=40000AB七、项目实训：酵母菌数目的测定

５操作步骤菌悬液制备：以无菌生理盐水将酵母菌制成适当浓度的菌悬液，（以每小方格内含有5-10个酵母细胞为宜，一般稀释100倍即可）；寻找计数室：加样前，在显微镜下先用低倍镜找到计数室；加样品：用滴管吸取一滴置于盖玻片的边缘，让菌悬液缓缓渗入计数室；计数：

静置5min，使酵母菌全部沉降到血球计数室内，先在低倍镜下找到计数室，再换成高倍镜观察并计数。七、项目实训：酵母菌数目的测定

６实验注意事项如果一个小方格内酵母菌过多，难以数清，应当采取进一步稀释的措施；对于压在小方格界线上的酵母菌，只计数相邻两边及其顶角的酵母细胞数（下图中红点都要计算）；血球计数板使用后，取下盖玻片，用自来水冲洗，切勿用硬物洗刷或抹擦，以免损坏网格刻度；计数板冲洗后，还要通过镜检观察每小格内是否残留菌体或其他沉淀物，若不干净，重复清洗。项目二霉菌的构造和形态观察一、霉菌的形态和结构

1霉菌的概述霉菌（mold）和酵母同属于真菌；为丝状真菌的统称，凡是在营养基质上能形成绒毛状、网状或絮状菌丝体的真菌（除少数外），统称为霉菌（会引起物品霉变的真菌）；按Smith分类系统，霉菌分属于真菌界的藻状菌纲、子囊菌纲和半知菌类。一、霉菌的形态和结构

２霉菌的基本形态霉菌的菌体由分枝或不分枝的菌丝构成，菌丝是真菌营养体的基本单位；菌丝是中空管状结构，直径一般3～10μm，有分枝，有隔膜或无隔膜；许多菌丝分枝连接，相互交织在一起所构成的形态称菌丝体。一、霉菌的形态和结构

３霉菌菌丝类型按形态分：无隔菌丝、有隔菌丝

无隔菌丝：为长管状单细胞，细胞质内含多个核，其生长表现为菌丝的延长和细胞核的增多。这是低等真菌（鞭毛菌亚门和接合菌亚门）所具有的菌丝类型；

有隔菌丝：菌丝中有隔膜，被隔膜隔开的一段菌丝就是一个细胞，菌丝由多个细胞组成，每个细胞内有一至多个核。隔膜上有单孔或多孔，细胞质和细胞核可自由流通，每个细胞功能相同。这是高等真菌（子囊菌亚门、担子菌亚门和半知菌亚门）所具有的类型。一、霉菌的形态和结构

３霉菌菌丝类型按分化程度分:营养菌丝（基内菌丝）、气生菌丝营养菌丝：伸入到培养基内部，以吸收养分为主的菌丝；气生菌丝：向空中生长的菌丝，气生菌丝发育到一定阶段可分化成繁殖菌丝。一、霉菌的形态和结构

４霉菌菌丝的细胞结构由细胞壁、细胞膜、细胞质、细胞核、线粒体、核糖体、内质网及各种内含物（肝糖、脂肪滴、异染粒等）等组成；幼龄菌往往液泡小而少，老龄菌具有较大的液泡。一、霉菌的形态和结构

４霉菌菌丝的细胞结构细胞壁：除少数低等水生霉菌细胞壁含纤维素外,大部分霉菌细胞壁主要由几丁质组成；几丁质是由数百个N-乙酰葡萄糖胺分子以β-1，4糖苷键连接而成的。几丁质和纤维素分别构成高等和低等霉菌细胞壁的网状结构—微纤丝。微纤丝使细胞壁具有坚韧的机械性能；另一类成分为无定型物质，蛋白质、甘露聚糖和葡聚糖，它们填充于上述纤维状物质构成的网内或网外，充实细胞壁的结构；霉菌的细胞膜、细胞核、线粒体、核糖体等结构与其他真核生物（如酵母）基本相同。二、霉菌的繁殖方式和生活史

１霉菌的繁殖方式霉菌的繁殖方式概述二、霉菌的繁殖方式和生活史

２霉菌的无性繁殖霉菌的无性繁殖：不经过两个性细胞的结合，只是由营养细胞分裂或分化而形成同种新个体的过程；主要通过产生以下四种类型的无性孢子（孢囊孢子、分生孢子、节孢子、厚垣孢子）来实现。二、霉菌的繁殖方式和生活史

２霉菌的无性繁殖孢囊孢子：生于孢子囊内，又叫内生孢子；由气生菌丝顶端膨大形成特殊囊状结构—孢子囊，孢子囊逐渐长大，在囊中形成许多核，每一个核外包以原生质并产生细胞壁，形成孢囊孢子；带有孢子囊的梗称孢子囊梗，孢子囊梗伸入到孢子囊中的部分叫囊轴或中轴；孢子囊成熟后释放出孢子。例藻状菌纲毛霉目及水霉目一些属以这种方式繁殖；二、霉菌的繁殖方式和生活史

２霉菌的无性繁殖孢囊孢子：生于孢子囊内，又叫内生孢子；根霉的孢子囊和孢囊孢子二、霉菌的繁殖方式和生活史

２霉菌的无性繁殖分生孢子：是霉菌中常见的一类无性孢子,生于细胞外,所以又叫外生孢子.是大多数子囊菌纲及全部半知菌的无性繁殖方式.分生孢子是由菌丝顶端细胞，或由分生孢子梗顶端细胞经过分割或缩缢而形成的单个或成簇的孢子；以曲霉属为例：分生孢子梗的顶端膨大成球形的顶囊，孢子着生于顶囊的小梗之上。二、霉菌的繁殖方式和生活史

２霉菌的无性繁殖分生孢子：以青霉属为例：分生孢子着生在帚状的多分支的小梗上。二、霉菌的繁殖方式和生活史

２霉菌的无性繁殖分生孢子：二、霉菌的繁殖方式和生活史

２霉菌的无性繁殖节孢子（又称粉孢子）：它是由菌丝断裂形成的外生孢子，当菌丝长到一定阶段，出现许多横膈膜，然后从横膈膜处断裂，产生许多孢子；孢子是成串的短柱状、筒状或两端钝圆的细胞。以白地霉为例：二、霉菌的繁殖方式和生活史

２霉菌的无性繁殖厚垣孢子：具有很厚的壁，又叫厚壁孢子；菌丝顶端或中间的个别细胞膨大、原生质浓缩、变圆，然后细胞壁加厚形成圆形、纺锤形或长方形的厚壁孢子；厚垣孢子也是霉菌的休眠体，对热、干燥等不良环境抵抗力很强。二、霉菌的繁殖方式和生活史

３霉菌的有性繁殖有性繁殖：经过两个性细胞结合而产生新个体的过程（卵孢子、接合孢子、子囊孢子、担孢子）；三个阶段：质配：两个性细胞的核共存于一个细胞中，形成双核细胞，每个核的染色体数目都是单倍的（即n+n）；核配：形成二倍体接合子，核的染色体数目是双倍的（即2n）；减数分裂：形成单倍体有性孢子。核的染色体数目是单倍的（即n）。二、霉菌的繁殖方式和生活史

３霉菌的有性繁殖大多数霉菌是单倍体，二倍体仅限于接合子；在霉菌中，有性繁殖不如无性繁殖普遍，有性繁殖往往在自然条件下较多，在一般培养基上不常出现；不同的霉菌有性繁殖的方式不同，多数霉菌是由菌丝分化形成特殊的性细胞（器官）——配子囊或由配子囊产生的配子（雄器和雌器）相互交配，形成有性孢子；常见的有性孢子有卵孢子、接合孢子、子囊孢子和担孢子。二、霉菌的繁殖方式和生活史

３霉菌的有性繁殖卵孢子：由大小不同的配子囊结合后发育而成。繁殖过程：小型的配子囊称雄器，大型的配子囊称藏卵器，藏卵器内有一个或数个称为卵球的原生质团，它相当于高等生物的卵。当雄器与藏卵器配合时，雄器中的细胞质和细胞核通过受精管进入藏卵器，并与卵球结合，受精卵球生出外壁，发育成卵孢子。二、霉菌的繁殖方式和生活史

３霉菌的有性繁殖接合孢子：是由菌丝生出的结构基本相似、形态相同或略有不同两个配子囊接合而成；接合孢子的形态：厚壁、粗糙、黑壳；接合过程：两个相邻的菌丝相遇，各自向对方生出极短的侧枝，称原配子囊。原配子囊接触后，顶端各自膨大并形成横隔，分隔形成两个配子囊细胞，配子囊下的部分称配子囊柄。然后相接触的两个配子囊之间的横隔消失，发生质配、核配，同时外部形成厚壁，即成接合孢子。二、霉菌的繁殖方式和生活史

３霉菌的有性繁殖接合孢子的接合过程：二、霉菌的繁殖方式和生活史

３霉菌的有性繁殖接合孢子的接合过程分类：同宗配合：菌体自身可孕，当同一菌体的两根菌丝甚至同一菌丝的分枝相互接触时，便可产生接合孢子；异宗配合：菌体自身不孕，需要借助别的可亲和菌体的不同交配型来进行有性生殖，即它需要两种不同菌系的菌丝相遇才能形成接合孢子。这两种不同菌系的菌体在形态、大小上一般无区别，但生理上有差别，常用“+”和“-”来表示。如果一种菌系或配子囊为“+”，那么凡是能与之接合而形成接合孢子的另一菌系或配子囊为“-”。二、霉菌的繁殖方式和生活史

３霉菌的有性繁殖子囊孢子：在子囊内形成的有性孢子，子囊菌纲的主要特征；子囊：两性细胞接触以后形成的囊状结构。子囊有球形、棒形、圆筒形、长方形等，因种而异；子囊内孢子通常是1—8个，子囊孢子的形状、大小、颜色也各不相同；不同的子囊菌形成子囊的方式不同，最简单的是两个营养细胞结合形成子囊，细胞核分裂形成子核，每一子核形成一个子囊孢子。二、霉菌的繁殖方式和生活史

３霉菌的有性繁殖子囊孢子的形成：霉菌不同性别的菌丝，分化出雄器（小）和产囊器（大），两个性器官接触后，雄器的内含物通过受精丝进入产囊器，进行质配；质配后，产囊器生出许多短菌丝（称产囊丝），产囊丝顶端的细胞是双核的，在顶端细胞内发生核配，成子囊母细胞（2n）；再经有丝分裂和减数分裂产生1-8个子囊孢子。子囊果：在子囊和子囊孢子发育过程中，雄器和雌器下面的细胞生出许多菌丝，形成保护组织，整个结构成为一子实体。这种有性的子实体称为子囊果，子囊包在其中。子囊果三种类型：完全封闭式称闭囊壳;有孔口的称子囊壳;开口呈盘状的称子囊盘。二、霉菌的繁殖方式和生活史

３霉菌的有性繁殖担孢子：是大型子实体真菌一担子菌(蘑菇、木耳等)产生的特有的性孢子，经两性细胞核配合后产生的外生孢子，着生在担子上而得名。二、霉菌的繁殖方式和生活史

４霉菌的生活史包括霉菌的无性世代和有性世代；无性世代：霉菌的菌丝体在相宜的条件下产生无性孢子，无性孢子又萌发成菌丝体的整个过程；有性世代：在霉菌的生长后期，菌丝形成配子囊，发生质配、核配形成双倍体的细胞，接着发生减数分裂，形成单倍体有性孢子的整个过程。三、霉菌的菌落特征

１固体培养特征菌落特征：霉菌的菌落大、疏松、干燥、不透明，有的呈绒毛状或絮状或网状等，菌体可沿培养基表面蔓延生长；由于不同的真菌孢子含有不同的色素，所以菌落可呈现红、黄、绿、青绿、青灰、黑、白、灰等多种颜色。青霉三、霉菌的菌落特征

１固体培养特征菌落特征毛霉三、霉菌的菌落特征

２液体培养特征菌落特征如果是静止培养，霉菌往往在表面上生长，液面上形成菌膜；如果是震荡培养，菌丝有时相互缠绕在一起形成菌丝球，菌丝球可能均匀地悬浮在培养液中或沉于培养液底部。四、常见霉菌

１霉菌分布在自然界分布相当广泛，无所不在,只要存在有机物就有它们的踪迹。而且种类和数量惊人；在自然界中，霉菌是各种复杂有机物，尤其是数量最大的纤维素、半纤维素和木质素的主要分解菌；一般情况下，霉菌在潮湿的环境下易于生长，特别是偏酸性的基质当中。四、常见霉菌

２常用霉菌－根霉分布：分布于土壤、空气中，常见于淀粉食品上，可引起霉腐变质和水果、蔬菜的腐烂，接合菌纲毛霉目；形态特征：菌丝为白色、无隔多核的单细胞真菌，多呈絮状，主要区别在于根霉有假根和匍匐枝，与假根相对处向上生出孢囊梗，孢子囊梗与囊轴相连处有囊托，无囊领；繁殖：无性繁殖产孢囊孢子，有性繁殖产生接合孢子。根霉的孢子囊和孢囊孢子多为黑色或褐色，有的颜色较浅；应用：对酿酒业有特殊作用，（因为酵母菌不能直接利用淀粉，而根霉能产很强的淀粉酶）在酿酒工业上常用做糖化菌；能产生乳酸、延胡索酸等有机酸。四、常见霉菌

３常用霉菌－毛霉分布：广泛分布于土壤、空气中，也常见于水果、蔬菜、各类淀粉食物、谷物上，引起霉腐变质，接合菌纲毛霉目；形态特征：低等真菌，菌丝发达、繁密，为白色、无隔多核菌丝，为单细胞真菌，菌落蔓延性强，多呈棉絮状；繁殖：无性繁殖产孢囊孢子，孢子囊黑色或褐色，孢囊孢子大部分无色或浅兰色，有性繁殖产生接合孢子；应用：能产生蛋白酶，具有很强的蛋白质分解能力，多用于制作腐乳、豆豉；可产生淀粉酶，把淀粉转化为糖；在工业上常用作糖化菌，还能产生柠檬酸、草酸等有机酸，有的也可用于甾体转化。四、常见霉菌

４常用霉菌－曲霉分布：广泛分布于土壤、空气和谷物上，可引起食物、谷物和果蔬的霉腐变质，有的可产生致癌性的黄曲霉毒素，多数属于子囊菌亚门，少数属于半知菌亚门；形态特征：菌丝发达多分枝，有隔多核的多细胞真菌，分生孢子梗由特化了的厚壁而膨大的菌丝细胞（足细胞）上垂直生出；分生孢子头状如“菊花”；繁殖：无性繁殖产分生孢子；少数种可形成子囊孢子；应用：制酱、酿酒、制醋的主要菌种；生产酶制剂（蛋白酶、淀粉酶、果胶酶）的菌种；生产有机酸（如柠檬酸、葡萄糖酸等）的菌种。四、常见霉菌

５常用霉菌－青霉分布：广泛分布于土壤、空气和谷物上，可引起食物、谷物和果蔬霉腐变质的主要菌，半知菌类，少数属于半知菌亚门；形态特征：与曲霉类似，菌丝也是由有隔多核的多细胞构成，但青霉无足细胞，分生孢子梗从基内菌丝或气生菌丝上生出，有横隔，顶端生有扫帚状的分生孢子头，多呈蓝绿色，扫帚枝有单轮、双轮和多轮，对称或不对称；繁殖：无性繁殖产分生孢子；少数种可形成子囊孢子；应用：是生产抗生素的重要菌种，如产黄青霉和点青霉都能生产青霉素；生产有机酸，如葡萄糖酸、柠檬酸。四、常见霉菌

６与人类的关系：有利方面食品制造方面，如酒类、酿制酱、酱油、干酪等；工业上生产有机酸（如柠檬酸、葡萄糖酸）、酶制剂（如淀粉酶、蛋白酶）、抗生素（如青霉素、头孢霉素）、维生素、生物碱、真菌多糖、植物生长刺激素（如赤霉素）、甾体激素类药物；在生物防治、污水处理和生物测定等方面都有应用；在