DB45-T 2732-2023 猪链球菌2型抗体的检测 酶联免疫吸附法_第1页
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文档简介

45法I本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定本文件起草单位：广西壮族自治区动物疫病预防控谢守玉、冯淑萍、屈素洁、龙凤、陆文俊、陈芳芳、张灿星、1猪链球菌2型抗体的检测酶联免疫吸附法本文件规定了猪链球菌2型抗体的酶联免疫吸附法检测的原理、试剂、器材、试验样品准备、操作本文件适用于广西壮族自治区行政区域内猪链球菌2型抗体的检测和猪只接种猪链球菌2型疫苗后简称ELISA，是一种酶联免疫技术。将已知的抗原或抗体吸附在固相载体，加入待测的标本，通过抗体与微孔壁上的抗原形成抗原-抗体复合——血清稀释液；2——振荡器；——离心机；——封板膜；——一次性采血器，最大量程5mL或10mL。采血方式为前腔静脉或耳静脉无菌采血。将生猪保定好后，用碘酊消毒采血部位，再用全血。室温下倾斜静置2h，待血清自然析血清样品若在分离后一周内完成检测，可置于2℃~8℃条件下短期保存；若超过一周后检测，应用恒温箱加冰袋或干冰密封等方式冷藏运输，运输时间应尽量缩短，确保血清样品有效。将10×浓缩洗涤液恢复至室温，摇匀，然后用蒸馏水或去离子水进行1:10稀释，将pH调节至7.4。3123456789APBPCNDNEBFBGH48.5.3若采用商品化试剂盒，应根据说明书进行操作及结果判定。9.1所有操作应严格遵守实验室生物安全相关规定。9.310×浓缩洗涤液在低温保存时可能会产生白色结晶，应9.4酶标记物溶液和终止液对呼吸道、眼睛及皮肤有刺激作用，使用过程中应戴口罩、护目镜、手套9.5酶标记物溶液应避光保存，避免与氧化剂接触9.6所有试剂均应按照相关要求进行保存，使用前恢复至室温。应板平放于湿盒内或覆盖封板膜后直接平放于温箱中，不宜采用密5A.1磷酸盐缓冲液取氯化钠8.0g，磷酸二氢钾0.2g，磷酸氢二钠2.9g，氯化钾0.2g，加蒸馏水溶解，调节溶液pH至8.0后用蒸馏水定容至1000mL。室温保存。A.2样品稀释液取甘油40.0mL，酪蛋白20.0g，硫柳汞钠0.1g，吐温-201.0mL，加入956mL磷酸盐缓冲液使其溶取氯化钠8.0g，磷酸二氢钾0.2g，磷酸氢二钠2.9g，氯化钾0.2g，吐温-205.0mL，硫柳汞0加80mL蒸馏水溶解，用1mol/L盐酸调节溶液pH至7.4后用蒸馏水定容至100mL。室温保存。取四甲基联苯胺0.2g，二甲基亚砜8.0mL，加蒸馏水溶解并定容至1000mL。室温保存。盐酸调节溶液pH至5.0后用蒸馏水定容至100

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