液相色谱仪“堵”的三大原因及选购指南

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液相色谱仪常见的故障一是堵，二是漏。下面我们来谈一下“堵”的情况

“堵”的表现现象就是柱压异常上升，直接原因就是流路不畅。堵塞的紧要位置就是在色谱柱的前端，紧要原因就是流动相里有杂质，杂质的紧要来源就是细菌。

“堵”的原因之一：配制流动相时细菌污染

首先，我们要认得到，一般的国产甲醇其实不需要额外过滤处理，直接使用没有问题。即使是有些固态微粒杂质，也能在液相流路系统最前端的过滤头上排出，真正简单引起问题的，是水中的细菌。

新制备的纯水在室内放置几天就会长菌，而这些细菌虽然肉眼不可见，却足以堵塞柱填料颗粒的空隙，造成柱子很快报废。这就是在配制流动相时造成的细菌污染的原因，解决它的方法很简单，就是确保水的牢靠性。这里有两种方式推举：

（1）较为理想的方式当然是购买试验室专用纯水机，既便利又牢靠，质量也放心。唯一的缺点就是价格不菲。

（2）成箱购买市售品牌纯洁水，如，500mL一支的怡宝或娃哈哈，这些水的质量足以应付液相色谱的要求。先随机抽取一支做一下细菌平板试验，待菌落数合格方可使用。这样每次只要单独开一支即可，也很便利。每次成本2元左右。

※这里特别指出一个细节：在绝大多数书本上，凡谈到配制流动相都会谈到最后有一个过滤的步骤。但是从我们长期使用的实际效果来说，只要能保证水的质量，这一步完全可以也应当去除。

原因有以下三点：

（1）流动相过滤在理论上有好处，但是，实际操作时由于不可能做到专瓶专用，反而简单造成的交叉污染，对于配比多而杂的流动相影响更大。

（2）流动相过滤在经济成本上不划算。买一套过滤装置要6000多元，且过滤器公认是比较简单损坏的设备。紧要是过滤片的成本太高，一片就要几十元。按一般液相柱的正常使用寿命计算，过滤片的成本会远远高于色谱柱的成本。

（3）流动相过滤对于工作效率成本不划算。使用溶剂过滤器有一个预清洗、装备、使用、用后清洗，晾干的过程，至少也有一个小时的时间。这个成本也不能忽视。

（4）在实际工作未发觉流动相不过滤会对柱寿命有任何影响。我们起码有6年时间没有做过流动相过滤的工作，但是和国内同行相比较，在同等使用强度下我们的柱寿命是比较长的。

“堵”的原因之二：使用流动相时的细菌污染。

指的是：

流动相刚开始没有长菌，在使用时却产生了细菌污染。这紧要是在使用多元液相色谱仪时的一种不良使用习惯造成的。

举简单的例子：

50％的甲醇水流动相，有两种使用方式。一种方式是在上机前就配好混合在一起，另一种方式是在流路A放纯甲醇，流路B放纯水。

从单纯试验效果来说，后一种有明显的优点：首先是简单，不需要试验者另个计算配比混合，其次就是比例精准，能得到保留时间重复性极好的试验效果。

但是，它有一个致命的缺陷，就是纯水在流动相瓶中几天时间就会长细菌（很多情况下不仅仅用纯水作流动相，而是用缓冲盐溶液，本身就是优质肥料，细菌长得更快速），一旦有细菌柱子就坏得很快。所以这种方式要求操作人员每次试验都要用新制备的纯水，更要求在每次试验后把水相换掉，换成甲醇冲洗干净，这一点在实际工作中很多人意识不强，就是意识到了但多次使用中总有一两次会遗漏，但是往往这一两次就足以产生致命的影响。由于液相色谱柱的堵塞是不可逆的。

所以，宁可牺牲小小的保留时间的重复性，也不要用纯水溶液作为流动相的一组。从实际试验效果来说，我建议用10％的甲醇水代替纯水溶液（以前我做过不同比例甲醇水的细菌总数试验，在5％就基本可以抑菌，在10％及以上就可以完全杀菌了），这样可以有效排出长细菌的隐患，既可作流动相，也可冲柱。就算是在配制流动相时会计算得麻烦一些，但是一次麻烦，终身受益。

“堵”的原因之三：不适当操作。

常见问题的有以下几种：

（1）在更换零件时选择的型号有误，接口不是很匹配，在拧紧的时候产生变形而使得管路堵塞。

（2）样品处理液净化得不干净，长期会在六通阀和柱之间形成堵塞不畅。

（3）在使用手动六通阀时，有些人可能由于手劲小的原因，转动的不到位，于是造成流路形成了死堵，压力快速升超群过警戒值。

（4）在使用金属管路作出废液管时，应当注意可以废液瓶中先放一些水，并把废液管的出口端放在液面下。假如位于在液相上且试验使用较高浓度的缓冲盐溶液，在停机时可能在出口端结晶成块并造成堵塞。这种情况不常见，但却的确发生过。

“堵”的原因讲了不少，现介绍查堵的方法。

在发生“堵”的现象后，就需要找出原因，紧要是什么位置发生了“堵”。注意，绝大多数情况下，整个系统只会有一