T-YNRZ 011-2024 咖啡生豆氨基酸总量测定分光光度法

ICS67.140.20CCSB35TheDeterminationofTotalAminoAcidsinCoffeebeansIT/YNRZ011—2024前言 2规范性引用文件 3术语和定义 4原理 5仪器和器皿 6试剂和溶液 7分析步骤 28结果计算 29检测报告 3T/YNRZ011—2024本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起草。本文件的某些内容可能涉及专利，本文件的发布机构不承担识别专利的责任。本文件由云南省德宏热带农业科学研究所提出。本文件由云南省热带作物学会归口。本文件起草单位：云南省德宏热带农业科学研究所、大理大学。本文件主要起草人：陈玉芹、赵成法、李庆聪、尹红星、戴余波、王应清、刘小琼、胡永亮、黄家卫。1T/YNRZ011—2024咖啡生豆氨基酸总量测定分光光度法本文件规定了咖啡生豆中氨基酸总量测定的术语和定义，原理、仪器和器皿，试剂和溶液、分析步骤，结果计算和检测报告的方法。本文件适用于咖啡生豆中氨基酸总量的测定。2规范性引用文件下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB5009.124食品中氨基酸的测定GB/T18007咖啡及其制品术语NY/T1518袋装生咖啡取样3术语和定义下列术语和定义适用于本文件。3.1咖啡生豆咖啡生豆即未烘焙过的咖啡豆，按GB/T18007的5.6规定执行3.2茚三酮比色法按GB5009.124规定执行4原理氨基酸在pH8.0的条件下与茚三酮反应，形成紫色络合物，用分光光度法在570nm的波长下测定其含量。5仪器和器皿5.1分析天平：感量0.0001g。5.2可见光分光光度仪。5.3安瓿瓶。5.4陶瓷蒸发皿。5.5比色管：磨口，50mL。5.6比色杯：1cm。5.7容量瓶：25mL、50mL、100mL、1000mL。5.8酒精喷灯。5.9研磨机或组织粉碎机。6试剂和溶液除非另有说明，本方法所用试剂均为分析纯（AR），水为蒸馏水。6.1试剂2T/YNRZ011—20246.1.1亮氨酸：纯度≥98%。6.1.2浓盐酸（HCl）：质量分数≥36%。6.1.3磷酸氢二钠（Na2HPO4•12H2O）。6.1.4磷酸二氢钾（KH2PO4）。6.1.5茚三酮：纯度≥95%。6.1.6氯化亚锡（SnCl2•2H2O）。6.2溶液配制6.2.16mol/L盐酸溶液：取500mL浓盐酸（6.1.2）加水稀释至1000mL，混匀。6.2.2pH8.0磷酸盐缓冲液配制6.2.2.11/15mol/L磷酸氢二钠：称取11.9g十二水磷酸氢二钠（Na2HPO4•12H2O加水溶解后定容至1000mL。6.2.2.21/15mol/L磷酸二氢钾：称取经110℃烘干2小时的磷酸二氢钾（KH2PO4）0.908g，加水溶解后定容至100mL，摇匀备用。6.2.2.3取1/15mol/L磷酸氢二钠溶液（6.2.2.1）950mL和1/15mol/L磷酸二氢钾溶液（6.2.2.2）50mL，混匀，该混合溶液pH为8.0。6.2.32%茚三酮溶液配制称取茚三酮（纯度≥95%）2g，加50mL水和80mg氯化亚锡（SnCl2•2H2O）搅拌均匀。分次加少量水溶解，放在暗处，静置一昼夜，过滤后加水定容至100mL容量瓶中，摇匀备用。6.2.4标准溶液配制6.2.4.1亮氨酸10mg/mL标准储备液：精确称量亮氨酸（纯度≥98%）0.25g，用蒸馏水溶解后，定量转入25mL容量瓶中，加水至标线，摇匀，此时标准储备液1mL含有10mg的亮氨酸。6.2.4.2亮氨酸标准系列工作溶液：精确移取0.50mL、1.00mL、1.50mL、2.00mL、2.50mL、3.00mL标准储备液（6.2.4.1），分别加水定容至50mL容量瓶中，摇匀。该系列标准工作液1mL分别含有0.10mg、0.20mg、0.30mg、0.40mg、0.50mg、0.60mg亮氨酸。7分析步骤7.1样品制备取样按照NY/T1518的规定执行，样品制备按照GB5009.124-2016中5.1的规定。7.2样品试液制备称取试样100mg～200mg（0.1mg），于10mL安瓿瓶中，准确加入10mL6mol/L盐酸溶液，用酒精喷灯封口，封口后的安瓿瓶放入110℃±1恒温箱内水解24h后，取出冷却至室温。打开安瓿瓶将水解液全部转移至陶瓷蒸发皿中，70℃水浴蒸干，加水溶解后过滤至容量瓶中用水定容至100mL，制成待测液，备用。7.3测定准确吸取待测液（7.2）1mL，注入50mL比色管中，加0.5mLpH8.0磷酸缓冲液（6.2.2）和0.5mL2%茚三酮溶液（6.2.3），混合均匀，在沸水浴中加热15min，立即冷却后加水定容至50mL。放置10min后，1cm比色杯，在570nm处，以试剂空白溶液作参比，测定吸光度(A)。7.4亮氨酸标准曲线的制作分别准确吸取1mL亮氨酸系列标准工作液（6.2.4.2）于一组50mL比色管中，按7.3的操作测定吸光度(A)。将测得的吸光度作为y坐标，对应的亮氨酸含量作为x坐标，绘制标准曲线。7.5空白试验除不加试样外，均按上述测定步骤进行。8结果计算3T/YNRZ011—20248.1计算方法咖啡生豆中氨基酸总量以干基质量分数（%）表示，按式（1）计算：式中：C—根据7.4测定的吸光度从标准曲线上查得的亮氨酸的毫克数，单位为毫克（mgV1—试液总量，单位为毫升（mL）；V2—测试用试液量，单位为毫升(mL)；m—试样重量，单位为克（gω—试样干物质含量（质量分数%）。取两次测