水中氟化物快速检测酶标仪法

4水中氟化物快速检测酶标仪法本文件规定了测定水中无机氟化物的酶标仪法。本文件适用于地表水、地下水、生活饮用水和水质工程以及实验室中的无机氟化物含量的测定。2规范性引用文件下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法3术语和定义本文件没有需要界定的术语和定义。4原理氟离子在缓冲溶液中与氟试剂及硝酸镧反应生成蓝色三元络合物，络合物在650nm波长处的吸光度值与氟离子浓度成正比，通过酶标仪定量测定水样中的氟离子浓度。5仪器设备5.1酶标仪。5.2pH计。5.3可调微量移液器。5.496孔板。6试剂6.1试剂要求：本文件使用的试剂纯度除氟化钠为优级纯外，其他试剂均为分析纯。实验用水为去离子水，应符合GB/T6682中规定的二级水。6.2盐酸（HCl）。6.3氢氧化钠（NaOH）。6.4丙酮（CH3COCH3）。6.5乙酰丙酮（CH3COCH2COCH3）。6.6冰乙酸（CH3COOH）。6.7乙酸钠（CH3COONa）。6.8硝酸镧[La(NO3)3·6H2O]。6.9茜素络合指示剂（C19H15NO8）。6.10氟化钠（NaF）。7溶液配制7.1盐酸溶液（1mol/L）4吸取8.4mL盐酸于100mL容量瓶中，加水定容至刻度。7.2氢氧化钠溶液（1mol/L）称取4.0g氢氧化钠，加水溶解后，定容至100mL。7.3乙酸钠缓冲溶液称取3.5g乙酸钠，溶解于80mL水中，加入7.5mL冰乙酸，用冰乙酸或者氢氧化钠溶液（7.2）调节溶液pH至4.1，加水定容至100mL。7.4乙酸钠溶液（1mol/L）称取8.2g乙酸钠，加水溶解后，定容至100mL。7.5硝酸镧溶液（0.05mol/L）称取2.215g硝酸镧，滴加少量的盐酸溶液（7.1）使其完全溶解，用乙酸钠溶液（7.4）调节pH至4.1，加水定容至100mL。7.6氟试剂溶液称取1.927g茜素络合指示剂于100mL烧杯中，加入5mL水，再滴加少量的氢氧化钠溶液（7.2）使茜素络合指示剂完全溶解，待其溶解后加入0.625g乙酸钠，使用盐酸溶液（7.1）调节pH值至5.0，加水定容至100mL。氟试剂溶液在使用前先摇匀，再用离心机10000r/min，离心10min,取上清液使用。7.7氟化物标准使用液[ρ（F-）=2.00mg/L]称取经105℃干燥2h的氟化钠0.4420g，加水溶解后，定容至100mL。亦可使用国家认证并授予标准物质证书的氟标准溶液配制。8样本使用无氟具塞聚乙烯管采集水样1mL。若不能及时分析，0℃~4℃冷藏、避光保存,14天内完成测9分析步骤9.1检测液的配制精确量取7.0mL丙酮、2.0mL乙酰丙酮、2.0mL氟试剂溶液（7.6）和2.0mL乙酸钠缓冲溶液（7.3混合均匀。再加入2.0mL硝酸镧（7.5）溶液，混合均匀，静置30分钟以上备用。9.2氟化物标准系列的配制在96孔板中选择8个加样孔作为主孔，将这8个主孔分别标注为A～H。在H孔中加入0.20mL氟化物标准使用液（7.7在A-G孔各加入0.10mL的水，然后从H孔准确抽取0.10mL液体，将其放入G孔中充分混合，再从G孔中准确抽取0.10mL液体放入F孔中，充分混合，以此类推，直到在B孔中准确抽取0.10mL液体弃掉，使得最后各主孔中的液体均为0.10mL。此系列氟离子浓度分别为：A孔0mg/L，B孔0.03125mg/L，C孔0.0625mg/L，D孔0.125mg/L，E孔0.25mg/L，F孔0.5mg/L，G孔1.0mg/L，H孔2.0mg/L。9.3加待检测水样96孔板中的剩余位置作为加样孔，分别加入0.10mL待检测水样。9.4酶标仪检测4分别向各加样孔中加入0.15mL制备好的检测液，轻微震荡混匀，5min以后将96孔板放入酶标仪，10min内在650nm波长处完成吸光度检测。利用已知氟化物标准系列浓度和相对应的吸光度值绘制标准曲线，根据标准曲线计算水样中氟离子浓度。10结果计算10.1计算标准曲线回归方程以氟化物标准系列溶液各个浓度为横坐标，以吸光度（A）为纵坐标绘制标准曲线，并按式（1）计算标准曲线回归方程。A=a+b×ρ…………………（1）A—吸光度；a—标准曲线回归方程的截距；b—标准曲线回归方程的斜率；ρ—标准曲线系列溶液中氟（F-）的质量浓度，mg/L。10.2计算样品中氟化物的浓度用标准曲线计算样品中氟化物浓度，按式（2）进行计算。ρx=（A-a）/b…………………（2）A—吸光度；a—标准曲线回归方程的截距；b—标准曲线回归方程的斜率；ρx—样品中氟（F-）的质量浓度，mg/L。11方法特性11.1精密度3个实验室对含氟量0.05mg/L～2.04mg/L的不同浓度水平的水氟样品进行了精密度考察，实验室内相对标准偏差在0.24%～7.26%之间。11.2准确度3个实验室对含氟量0.05mg/L～2.04mg/L的不同浓度水平的水氟样品进行了加标回收率考察，加入氟标准浓度为0.05mg/L～1.00mg/L，回收率范围为97.10%～103.33%。12质量保证和质量控制12.1涉及标准曲线A～H孔的制作，稀释过程中每孔都需要充分吹打混匀后再移液到下一个孔。12.2在制备检测液之前，使用者需要根据待检测样本的数量计算本次实验检测液的用量。推荐实验人员按照检测液需求量的120%制备检测液，防止实