第2章 细胞生物学技术课件

第2章细胞生物学技术2.1细胞形态结构的观察方法2.1.1光学显微镜技术显微镜和显微镜的分辨能力肉眼：0.2mm;光镜：0.2µm;电镜：0.2nm0.61λ分辨率DN.sinα/2=λ:

光源波长;α:物镜镜口角;N:介质折射率第2章细胞生物学技术显微镜成像原理第2章细胞生物学技术普通复式光学显微镜（lightmicroscope）双目显微镜第2章细胞生物学技术正置显微镜倒置显微镜第2章细胞生物学技术相差显微镜（phase-contrastmicroscope）（光程差或相位差转变为振幅差，相差板）微分干涉显微镜（differential-interferencemicroscope）（厚度差转变为明暗差；增加样品反差，立体感强）第2章细胞生物学技术荧光显微镜（fluorescencemicroscope）第2章细胞生物学技术荧光显微镜及其照片第2章细胞生物学技术黏着斑蛋白细胞骨架第2章细胞生物学技术激光共聚焦原理激光共聚焦显微镜（laserscanningconfocalmicroscope）第2章细胞生物学技术激光共聚焦显微镜及其显微图像第2章细胞生物学技术黏着斑蛋白细胞骨架（应力纤维）共定位分析第2章细胞生物学技术暗视野成像原理显微镜的暗视野功能第2章细胞生物学技术(A)明视野显微术；(B)相差显微术；(C)微分干涉显微术；(D)暗视野显微术第2章细胞生物学技术荧光漂白恢复技术（fluorescencerecoveryafterphotobleaching,FRAP）第2章细胞生物学技术荧光共振能量转移技术（fluorescenceresonanceenergytransfer,FRET）第2章细胞生物学技术1）电镜基本知识和结构（波长小于0.1nm）2）样品制备（超薄切片，负染色，冰冻蚀刻，三维重构，扫描）3）电镜种类扫描电子显微镜透射电子显微镜扫描隧道显微镜和原子力显微镜2.1.2电子显微镜技术第2章细胞生物学技术透射电镜及其图像第2章细胞生物学技术透射电镜照片第2章细胞生物学技术免疫电镜照片第2章细胞生物学技术扫描电镜及其图像第2章细胞生物学技术扫描电镜照片第2章细胞生物学技术冰冻蚀刻技术第2章细胞生物学技术冰冻蚀刻电镜技术照片第2章细胞生物学技术负染色电镜技术照片第2章细胞生物学技术2.2.1高速、超速和梯度密度离心分离各种细胞器、生物大分子及其复合物2.2细胞组分的分析方法第2章细胞生物学技术差速离心密度梯度离心第2章细胞生物学技术差速离心过程第2章细胞生物学技术2.2.2细胞内核酸、蛋白质、酶、糖类、脂类的显色DNA：福尔根（Feulgen）反应－－紫红色多糖类：PAS反应－－黄色脂肪：苏丹III－－红色蛋白质：米伦（Millon）－－红色2.2.3特异抗原的定性与定位免疫荧光免疫电镜免疫沉淀Westernblotting第2章细胞生物学技术2.2.5特异核酸标记技术InsituhybridizationNorthernblot(RNA);Southernblot(DNA)2.2.4放射性标记生物大分子的合成和动态3H（DNA合成）35S（蛋白质合成）14C（碳水化合物合成）32P（核酸合成）定性、定位、半定量研究（标记，自显影）32P（14天）,14C（5760年）,3H（12年）,35S（87天）,131I（8）第2章细胞生物学技术原位杂交技术第2章细胞生物学技术2.2.6定量细胞化学技术2.2.7细胞内大分子的分离与分析柱层析、分子筛、免疫吸附、免疫沉淀等方法分离蛋白质组分及复合物（交联和变性）显微分光光度术（紫外显微分光光度仪、可见光显微分光光度染色）流式细胞仪第2章细胞生物学技术蛋白质电泳分析第2章细胞生物学技术流式细胞术第2章细胞生物学技术2.3细胞培养、细胞工程与显微操作技术2.3.1细胞培养

1）植物细胞（单倍体细胞培养，原生质体培养，体细胞培养）

2）动物细胞（原代细胞培养，永生细胞系）

3）非细胞体系（DNA复制，RNA转录，蛋白质合成，高尔基体的膜泡运输，细胞核装配等）细胞提取物，细胞核提取物第2章细胞生物学技术植物组织培养动物细胞培养细胞的克隆第2章细胞生物学技术2.3.2细胞工程1）细胞融合与杂交植物细胞先去壁；融合方式：仙台病毒或聚乙二醇介导，电融合等同核融合细胞，异核融合细胞，染色体丢失

2）单克隆抗体技术2.3.3显微操作技术1975年英国科学家MilsteinandKohler,1984年获诺贝尔奖B淋巴细胞+小鼠骨髓瘤转移细胞核、细胞器、基因等2.3.4转基因、基因沉默、基因敲除、模式生物等第2章细胞生物学技术转基因技术第2章细胞生物学技术显微操作仪第2章细胞生物学技术显微操作示意图第2章细胞生物学技术第2章细胞生物学技术MarioCapecchi(Late1980s)(UniversityofUtah)embryonicstemcellsininnercellmassastargetcells1/104cellsundergoaprocessofhomologousrecombination.基因敲除技术第2章细胞生物学技术2.4细胞生物学研究的模式生物病毒（转基因载体）细菌（大肠杆菌作为基因工程菌株）酵母（真核表达载体，基因功能分析）线虫（1000个左右细胞构成）黏菌（同步化材料）蛙（卵细胞大，易操作）果蝇（遗传背景清楚，表型易掌握）斑马鱼（胚胎发育研究的好材料）小鼠（与人更接近）第2章细胞生物学技术学生报告题目：

1，转基因技术及其应用；2，细胞工程技术在生产实践中的应用；3，基因敲除技术及其应用；4，模式生物线虫及其在细胞生物学研究中的应用；5，模式生物斑马鱼及其在细胞生物学研究中的应用；

按学号分组，按组确定题目，每个组确定一名组长并委派一个报告人。每个组