第1章 蛋白质结构与功能课件

蛋白质的结构与功能第一章StructureandFunctionofProtein第1章蛋白质结构与功能第1章蛋白质结构与功能一、什么是蛋白质?蛋白质(protein)是由许多氨基酸(aminoacids)通过肽键(peptidebond)相连形成的高分子含氮化合物。第1章蛋白质结构与功能二、蛋白质的生物学重要性1.蛋白质是生物体重要组成成分分布广：所有器官、组织都含有蛋白质；细胞的各个部分都含有蛋白质。含量高：蛋白质是细胞内最丰富的有机分子，占人体干重的45％，某些组织含量更高，例如脾、肺及横纹肌等高达80％。第1章蛋白质结构与功能2.蛋白质具有重要的生物学功能3.氧化供能1.催化功能-酶2.调节功能-激素、基因调控因子3.转运功能-膜转运蛋白、血红/血清蛋白4.贮存功能-乳、蛋、谷蛋白5.运动功能-鞭毛、肌肉蛋白6.结构成分-皮、毛、骨、牙、细胞骨架7.支架作用-接头蛋白8.防御功能-免疫球蛋白9.异常功能第1章蛋白质结构与功能第1章蛋白质结构与功能蛋白质的分子组成

TheMolecularComponent

ofProtein第一节第1章蛋白质结构与功能

组成蛋白质的元素主要有C、H、O、N和S。

有些蛋白质含有少量磷或金属元素铁、铜、锌、锰、钴、钼，个别蛋白质还含有碘

。第1章蛋白质结构与功能

各种蛋白质的含氮量很接近，平均为16％。由于体内的含氮物质以蛋白质为主，因此，只要测定生物样品中的含氮量，就可以根据以下公式推算出蛋白质的大致含量：100克样品中蛋白质的含量(g%)=每克样品含氮克数×6.25×1001/16%

蛋白质元素组成的特点第1章蛋白质结构与功能第1章蛋白质结构与功能一、氨基酸

——组成蛋白质的基本单位存在自然界中的氨基酸有300余种，但组成人体蛋白质的氨基酸仅有20种，且均属L-氨基酸（甘氨酸除外）。第1章蛋白质结构与功能H甘氨酸CH3丙氨酸L-氨基酸的通式R第1章蛋白质结构与功能手性化合物是指分子量、分子结构相同，但左右排列相反，如实物与其镜中的映体。LevorotatoryDextorotatory,第1章蛋白质结构与功能----C-C-C-C-COOHγβα----C-C-C-C(NH2)-COOHα-氨基酸----C-C-C(NH2)-C-COOHβ-氨基酸----C-C(NH2)-C-C-COOHγ-氨基酸什么是α-氨基酸？第1章蛋白质结构与功能非极性疏水性氨基酸极性中性氨基酸酸性氨基酸碱性氨基酸（一）氨基酸的分类*20种氨基酸的英文名称、缩写符号及分类如下:第1章蛋白质结构与功能甘氨酸

glycine

Gly

G

5.97丙氨酸

alanineAlaA

6.00缬氨酸

valineValV

5.96亮氨酸

leucineLeuL

5.98

异亮氨酸

isoleucineIleI

6.02

苯丙氨酸

phenylalaninePheF

5.48脯氨酸

prolineProP

6.30非极性疏水性氨基酸第1章蛋白质结构与功能色氨酸

tryptophanTryW

5.89丝氨酸

serineSerS

5.68酪氨酸

tyrosineTryY

5.66

半胱氨酸

cysteineCysC

5.07

蛋氨酸

methionine

MetM

5.74天冬酰胺

asparagineAsnN

5.41

谷氨酰胺

glutamineGlnQ

5.65

苏氨酸

threonineThrT5.602.极性中性氨基酸第1章蛋白质结构与功能天冬氨酸

asparticacidAspD

2.97谷氨酸

glutamicacidGluE

3.22赖氨酸

lysineLysK

9.74精氨酸

arginineArgR

10.76组氨酸

histidineHisH

7.593.酸性氨基酸4.碱性氨基酸第1章蛋白质结构与功能几种特殊氨基酸

脯氨酸（亚氨基酸）第1章蛋白质结构与功能

半胱氨酸+胱氨酸二硫键-HH第1章蛋白质结构与功能（二）氨基酸的理化性质1.两性解离及等电点氨基酸是两性电解质，其解离程度取决于所处溶液的酸碱度。等电点(isoelectricpoint,pI)

在某一pH的溶液中，氨基酸解离成阳离子和阴离子的趋势及程度相等，成为兼性离子，呈电中性。此时溶液的pH值称为该氨基酸的等电点。第1章蛋白质结构与功能pH=pI+OH-pH>pI+H+pH<pI氨基酸的兼性离子阳离子阴离子第1章蛋白质结构与功能第1章蛋白质结构与功能2.紫外吸收色氨酸、酪氨酸的最大吸收峰在280nm

附近。大多数蛋白质含有这两种氨基酸残基，所以测定蛋白质溶液280nm的光吸收值是分析溶液中蛋白质含量的快速简便的方法。芳香族氨基酸的紫外吸收第1章蛋白质结构与功能3.茚三酮反应氨基酸与茚三酮水合物共热，可生成蓝紫色化合物，其最大吸收峰在570nm处。由于此吸收峰值与氨基酸的含量存在正比关系，因此可作为氨基酸定量分析方法。第1章蛋白质结构与功能二、肽*肽键(peptidebond)是由一个氨基酸的

-羧基与另一个氨基酸的

-氨基脱水缩合而形成的化学键。（一）肽(peptide)第1章蛋白质结构与功能+-HOH甘氨酰甘氨酸肽键第1章蛋白质结构与功能第1章蛋白质结构与功能第1章蛋白质结构与功能*肽是由氨基酸通过肽键缩合而形成的化合物。*两分子氨基酸缩合形成二肽，三分子氨基酸缩合则形成三肽……*

肽链中的氨基酸分子因为脱水缩合而基团不全，被称为氨基酸残基(residue)。*由十个以内氨基酸相连而成的肽称为寡肽(oligopeptide)，由更多的氨基酸相连形成的肽称多肽(polypeptide)。第1章蛋白质结构与功能第1章蛋白质结构与功能N末端：多肽链中有自由氨基的一端C末端：多肽链中有自由羧基的一端多肽链有两端*多肽链(polypeptidechain)是指许多氨基酸之间以肽键连接而成的一种结构。第1章蛋白质结构与功能第1章蛋白质结构与功能N末端C末端牛核糖核酸酶第1章蛋白质结构与功能（二）几种生物活性肽1.谷胱甘肽(glutathione,GSH)第1章蛋白质结构与功能GSH过氧化物酶H2O22GSH2H2OGSSG

GSH还原酶NADPH+H+NADP+第1章蛋白质结构与功能谷胱甘肽能帮助保持正常的免疫系统的功能，并具有抗氧化作用和整合解毒作用，半胱氨酸上的巯基为其活性基团（故常简写为G-SH），易与某些药物（如扑热息痛）、毒素（如自由基、碘乙酸、芥子气，铅、汞、砷等重金属）等结合，而具有整合解毒作用。谷胱甘肽具有广谱解毒作用，不仅可用于药物，更可作为功能性食品的基料，在延缓衰老、增强免疫力、抗肿瘤等功能性食品广泛应用。谷胱甘肽广泛存在于动、植物中，在生物体内有着重要的作用。在面包酵母、小麦胚芽和动物肝脏中的含量很高，达100～1000mg/100g，在人体血液中含26～34mg/100g，鸡血中含58～73mg/100g，猪血中含10～15mg/100g，在西红柿、菠萝、黄瓜中含量也较高（12～33mg/100g），而在甘薯、绿豆芽、洋葱、香菇中含量较低（0.06～0.7mg/100g）。第1章蛋白质结构与功能

体内许多激素属寡肽或多肽

神经肽(neuropeptide)2.多肽类激素及神经肽第1章蛋白质结构与功能蛋白质的分子结构

TheMolecularStructureofProtein

第二节第1章蛋白质结构与功能蛋白质的分子结构包括

一级结构(primarystructure)二级结构(secondarystructure)三级结构(tertiarystructure)四级结构(quaternarystructure)高级结构第1章蛋白质结构与功能第1章蛋白质结构与功能定义蛋白质的一级结构指多肽链中氨基酸的排列顺序。一、蛋白质的一级结构主要的化学键肽键，有些蛋白质还包括二硫键。第1章蛋白质结构与功能一级结构是蛋白质空间构象和特异生物学功能的基础。胰岛素的一级结构及不同动物胰岛素在A链中的差异第1章蛋白质结构与功能肽键----C-C-C-C-COOHγβα第1章蛋白质结构与功能肽键和肽单元肽单元两个肽单元肽键中的4个原子及相邻的2个α-C原子重复形成的长链结构

----C-C-C-C-COOHγβα第1章蛋白质结构与功能①肽键中C-N键有部分双键性质

——不能自由旋转②组成肽键原子处于同一平面（肽平面）③键长及键角一定④大多数情况以反式结构存在第1章蛋白质结构与功能第1章蛋白质结构与功能化学中的顺式与反式 2-丁烯CH3CH=CHCH3顺反异构体顺-2-丁烯反-2-丁烯第1章蛋白质结构与功能定义顺反异构是构型异构的一种形式双键碳原子上所连的原子或基团中两个相同者的位置来决定异构体的类型。同侧：顺式异构(cis-isomerism)

异侧：反式异构(trans-isomerism)第1章蛋白质结构与功能顺反异构体的不同点沸点：4℃沸点：1℃燃烧热：2536KJ/mol燃烧热：2532KJ/mol极性不同稳定性不同第1章蛋白质结构与功能几个顺反异构的典型例子人工合成的雌激素物质由于羟基距离的不同，反式已烯雌酚的活性强于顺式已烯雌酚顺-己烯雌酚反-己烯雌酚雌二醇第1章蛋白质结构与功能马来酸有毒，富马酸无毒都是化工原料，但富马酸有一定的医药作用马来酸富马酸第1章蛋白质结构与功能顺铂可抑制癌细胞的DNA复制过程，有较强的广谱抗癌作用。临床用于卵巢癌、前列腺癌、睾丸癌、肺癌、鼻咽癌等多种癌症治疗反铂不仅不能治疗癌症,肾毒性也比顺铂大.顺铂反铂第1章蛋白质结构与功能二、蛋白质的二级结构蛋白质分子中某一段肽链的局部空间结构，即该段肽链主链骨架原子的相对空间位置，并不涉及氨基酸残基侧链的构象

。定义

主要的化学键：

氢键

第1章蛋白质结构与功能

蛋白质二级结构的主要形式

-螺旋(

-helix)

-折叠(

-pleatedsheet)

-转角(

-turn)

无规卷曲(randomcoil)

第1章蛋白质结构与功能（二）

-螺旋螺距0.54nm每圈含3.6个AA残基

每个AA残基占0.15nm

绕轴旋转100°链内形成氢键与轴平行多为右手螺旋第1章蛋白质结构与功能第1章蛋白质结构与功能具有7个跨膜肽段的膜蛋白多肽链来回跨膜折叠7个α螺旋段反平行装配如细菌紫膜质第1章蛋白质结构与功能胞外结构域第1章蛋白质结构与功能大纤维鳞状细胞皮层细胞微纤维微原纤维初原纤维

α螺旋第1章蛋白质结构与功能（三）

-折叠由两/多条几乎完全伸展的肽链平行排列，通过链间的氢键交联而形成。肽链主链呈锯齿状折叠构象。第1章蛋白质结构与功能第1章蛋白质结构与功能第1章蛋白质结构与功能β桶型膜蛋白—膜孔蛋白以大β折叠片形式横跨膜如膜孔蛋白第1章蛋白质结构与功能（四）

-转角和无规卷曲

-转角肽链主链骨架180°的回折结构特点：由4个连续的AA残基组成第一个残基C=O第四个残基NH第1章蛋白质结构与功能第1章蛋白质结构与功能

——泛指不能归入明确的二级结构如折叠片和螺旋的多肽片断。无规卷曲（randomcoil）第1章蛋白质结构与功能富含金属或二硫键（小的不规则）蛋白质

铁氧还原蛋白第1章蛋白质结构与功能（五）模体在许多蛋白质分子中，可发现二个或三个具有二级结构的肽段，在空间上相互接近，形成一个特殊的空间构象，被称为模体(motif)。第1章蛋白质结构与功能钙结合蛋白中结合钙离子的模体

锌指结构

第1章蛋白质结构与功能（六）氨基酸残基的侧链对二级结构形成的影响蛋白质二级结构是以一级结构为基础的。一段肽链其氨基酸残基的侧链适合形成

-螺旋或β-折叠，它就会出现相应的二级结构。第1章蛋白质结构与功能一段肽链有多个酸性氨基酸残基相邻，则在pH7.0时这些残基的游离羧基都带负电荷，彼此相斥，妨碍α-螺旋的形成。同样，多个碱性氨基酸残基在一肽段内，由于正电荷相斥，也妨碍α-螺旋的形成。天冬酰胺、亮氨酸的侧链很大，也会影响α-螺旋形成。脯氨酸的结构不利于形成α-螺旋。形成β-折叠的肽段要求氨基酸残基的侧链较小，才能容许两条肽段彼此靠近。第1章蛋白质结构与功能三、蛋白质的三级结构疏水键、离子键、氢键和VanderWaals力等。主要的化学键整条肽链中全部氨基酸残基的相对空间位置。即肽链中所有原子在三维空间的排布位置。（一）定义第1章蛋白质结构与功能第1章蛋白质结构与功能

肌红蛋白(Mb)N端C端第1章蛋白质结构与功能纤连蛋白分子的结构域（二）结构域大分子蛋白质的三级结构常可分割成一个或数个球状或纤维状的区域，折叠得较为紧密，各行使其功能，称为结构域(domain)。第1章蛋白质结构与功能Ⅳ型胶原酶的结构域动态图第1章蛋白质结构与功能第1章蛋白质结构与功能（三）分子伴侣分子伴侣(chaperon)通过提供一个保护环境从而加速蛋白质折叠成天然构象或形成四级结构。分子伴侣可逆地与未折叠肽段的疏水部分结合随后松开，如此重复进行可防止错误的聚集发生，使肽链正确折叠。分子伴侣也可与错误聚集的肽段结合，使之解聚后，再诱导其正确折叠。第1章蛋白质结构与功能亚基之间的结合力主要是疏水作用，其次是氢键和离子键。四、蛋白质的四级结构蛋白质分子中各亚基的空间排布及亚基接触部位的布局和相互作用，称为蛋白质的四级结构。有些蛋白质分子含有二条或多条多肽链，每一条多肽链都有完整的三级结构，称为蛋白质的亚基(subunit)。第1章蛋白质结构与功能血红蛋白的四级结构

血红蛋白具有4个亚基组成的四级结构。Hb各亚基的三级结构与Mb极为相似。Hb亚基之间通过8对盐键，使4个亚基紧密结合而形成亲水的球状蛋白。第1章蛋白质结构与功能第1章蛋白质结构与功能血红蛋白的一、二、三、四级结构第1章蛋白质结构与功能五、蛋白质的分类（1）、依据外形分类球状蛋白质：globularprotein

纤维状蛋白质：fibrousprotein

膜蛋白质：membraneprotein

第1章蛋白质结构与功能简单蛋白

simpleprotein

单纯蛋白，仅由氨基酸组成结合蛋白

conjugatedprotein由简单蛋白与其它非蛋白成分结合而成（2）、依据蛋白质的组成分类第1章蛋白质结构与功能简

单

蛋

白清蛋白和球蛋白albuminandglobulin

广泛存在于动物组织谷蛋白和醇溶谷蛋白glutelinandprolamin

植物蛋白，不溶于水，易溶于稀酸/碱精蛋白和组蛋白碱性蛋白存在于细胞核硬蛋白

第1章蛋白质结构与功能结

合

蛋

白色蛋白：简单蛋白+色素物质糖蛋白：简单蛋白+糖类物质脂蛋白：简单蛋白+脂类结合核蛋白：简单蛋白+核酸第1章蛋白质结构与功能蛋白质结构与功能的关系TheRelationofStructureandFunctionofProtein第三节第1章蛋白质结构与功能（一）一级结构是空间构象的基础一、蛋白质一级结构与功能的关系牛核糖核酸酶的一级结构二硫键第1章蛋白质结构与功能

天然状态，有催化活性尿素、β-巯基乙醇

去除尿素、β-巯基乙醇非折叠状态，无活性第1章蛋白质结构与功能第1章蛋白质结构与功能（二）一级结构相似的蛋白质具有相似的高级结构与功能一级结构相似的多肽或蛋白质，其空间构象以及功能也相似。第1章蛋白质结构与功能────────────────────────

氨基酸残基序号胰岛素───────────────

A5A6A10B30────────────────────────

人ThrSerIleThr

猪ThrSerIleAla

狗ThrSerIleAla

兔ThrGlyIleSer

牛AlaGlyValAla

羊AlaSerValAla

马ThrSerIleAla────────────────────────第1章蛋白质结构与功能促肾上腺皮质激素(ACTH)和促黑激素(α-MSH,β-MSH)共有一段相同的氨基酸序列，因此，ACTH也可促进皮下黑色素生成但作用较弱。第1章蛋白质结构与功能

(三)氨基酸序列提供重要的生物化学信息一些广泛存在于生物界的蛋白质如细胞色素c(cytochromec)，比较它们的一级结构，可以帮助了解物种进化间的关系。第1章蛋白质结构与功能从细胞色素c的一级结构看生物进化

物种进化过程中越接近的生物，细胞色素的一级结构越相似第1章蛋白质结构与功能（四）一级结构与功能的关系例：镰刀形红细胞贫血N-val·his·leu·thr·pro·glu·glu·····C(146)HbSβ肽链HbAβ肽链N-val·his·leu·thr·pro·val

·glu·····C(146)

这种由蛋白质分子发生变异所导致的疾病，称为“分子病”。缬第1章蛋白质结构与功能镰刀状贫血病—血液中大量出现镰刀红细胞，患者因此缺氧窒息正常细胞镰刀形细胞它是最早认识的一种分子病死亡率极高由于遗传基因突变导致血红蛋白分子结构突变第1章蛋白质结构与功能（一）肌红蛋白与血红蛋白的结构二、蛋白质空间结构与功能的关系第1章蛋白质结构与功能Hb与Mb一样能可逆地与O2结合，Hb与O2结合后称为氧合Hb。氧合Hb占总Hb的百分数（称百分饱和度）随O2浓度变化而改变。（二）血红蛋白的构象变化与结合氧第1章蛋白质结构与功能肌红蛋白(Mb)和血红蛋白(Hb)的氧解离曲线氧饱和度氧分压第1章蛋白质结构与功能(R)relaxedstate(T)tensestate

血中氧分子的运送Lung氧分子HemoglobinMyoglobinMuscle静脉动脉环境氧高时Hb快速吸收氧分子环境氧低时Hb迅速释放氧分子释放氧分子后Hb变回

Tstate任何一个亚基接受氧分子后，会增进其它亚基吸附氧分子的能力第1章蛋白质结构与功能TstateRstate第1章蛋白质结构与功能*协同效应(cooperativity)

一个寡聚体蛋白质的一个亚基与其配体结合后，能影响此寡聚体中另一个亚基与配体结合能力的现象，称为协同效应。如果是促进作用则称为正协同效应(positivecooperativity)如果是抑制作用则称为负协同效应

(negativecooperativity)第1章蛋白质结构与功能血红素与氧结合后，铁原子半径变小，就能进入卟啉环的小孔中，继而引起肽链位置的变动。第1章蛋白质结构与功能第1章蛋白质结构与功能变构效应(allostericeffect)蛋白质空间结构的改变伴随其功能的变化，称为变构效应。第1章蛋白质结构与功能（三）蛋白质构象改变与疾病蛋白质构象疾病：若蛋白质的折叠发生错误，尽管其一级结构不变，但蛋白质的构象发生改变，仍可影响其功能，严重时可导致疾病发生。第1章蛋白质结构与功能蛋白质构象改变导致疾病的机理：有些蛋白质错误折叠后相互聚集，常形成抗蛋白水解酶的淀粉样纤维沉淀，产生毒性而致病，表现为蛋白质淀粉样纤维沉淀的病理改变。这类疾病包括：人纹状体脊髓变性病、老年痴呆症、亨停顿舞蹈病、疯牛病等。第1章蛋白质结构与功能疯牛病中的蛋白质构象改变疯牛病是由朊病毒蛋白(prionprotein,PrP)引起的一组人和动物神经退行性病变。正常的PrP富含α-螺旋，称为PrPc。PrPc在某种未知蛋白质的作用下可转变成全为β-折叠的PrPsc，从而致病。PrPcα-螺旋PrPscβ-折叠正常疯牛病第1章蛋白质结构与功能正常的Prion蛋白含有大量的α螺旋病变的Prion蛋白含有更多的β折叠第1章蛋白质结构与功能第四节蛋白质的理化性质与分离纯化ThePhysicalandChemicalCharactersandSeparationandPurificationofProtein第1章蛋白质结构与功能（一）蛋白质的两性电离一、理化性质蛋白质分子除两端的氨基和羧基可解离外，氨基酸残基侧链中某些基团，在一定的溶液pH条件下都可解离成带负电荷或正电荷的基团。*蛋白质的等电点(isoelectricpoint,pI)当蛋白质溶液处于某一pH时，蛋白质解离成正、负离子的趋势相等，即成为兼性离子，净电荷为零，此时溶液的pH称为蛋白质的等电点。第1章蛋白质结构与功能（二）蛋白质的胶体性质蛋白质属于生物大分子之一，分子量可自1万至100万之巨，其分子的直径可达1～100nm，为胶粒范围之内。*蛋白质胶体稳定的因素颗粒表面电荷水化膜胶体是一种均匀混合物第1章蛋白质结构与功能+++++++带正电荷的蛋白质－－－－－－－－带负电荷的蛋白质在等电点的蛋白质水化膜++++++++带正电荷的蛋白质－－－－－－－－带负电荷的蛋白质不稳定的蛋白质颗粒酸碱酸碱酸碱脱水作用脱水作用脱水作用溶液中蛋白质的聚沉第1章蛋白质结构与功能（三）蛋白质的变性、沉淀和凝固*蛋白质的变性(denaturation)在某些物理和化学因素作用下，其特定的空间构象被破坏，也即有序的空间结构变成无序的空间结构，从而导致其理化性质改变和生物活性的丧失。第1章蛋白质结构与功能

造成变性的因素如加热、乙醇等有机溶剂、强酸、强碱、重金属离子及生物碱试剂等。

变性的本质——

破坏非共价键和二硫键，不改变蛋白质的一级结构。第1章蛋白质结构与功能

应用举例临床医学上，变性因素常被应用来消毒及灭菌。此外,防止蛋白质变性也是有效保存蛋白质制剂（如疫苗等）的必要条件。

第1章蛋白质结构与功能若蛋白质变性程度较轻，去除变性因素后，蛋白质仍可恢复或部分恢复其原有的构象和功能，称为复性(renaturation)。第1章蛋白质结构与功能

天然状态，有催化活性尿素、β-巯基乙醇

去除尿素、β-巯基乙醇非折叠状态，无活性第1章蛋白质结构与功能*蛋白质沉淀在一定条件下，蛋白疏水侧链暴露在外，肽链融会相互缠绕继而聚集，因而从溶液中析出。变性的蛋白质易于沉淀，有时蛋白质发生沉淀，但并不变性。*蛋白质的凝固作用(proteincoagulation)蛋白质变性后的絮状物加热可变成比较坚固的凝块，此凝块不易再溶于强酸和强碱中。

第1章蛋白质结构与功能（四）蛋白质的紫外吸收由于蛋白质分子中含有共轭双键的酪氨酸和色氨酸，因此在280nm波长处有特征性吸收峰。蛋白质的OD280与其浓度呈正比关系，因此可作蛋白质定量测定。第1章蛋白质结构与功能（五）蛋白质的呈色反应⒈茚三酮反应(ninhydrinreaction)

蛋白质经水解后产生的氨基酸也可发生茚三酮反应。⒉双缩脲反应(biuretreaction)蛋白质和多肽分子中肽键在稀碱溶液中与硫酸铜共热，呈现紫色或红色，此反应称为双缩脲反应，双缩脲反应可用来检测蛋白质水解程度。第1章蛋白质结构与功能二、蛋白质的分离和纯化（一）透析及超滤法*透析(dialysis)利用透析袋把大分子蛋白质与小分子化合物分开的方法。*超滤法

应用正压或离心力使蛋白质溶液透过有一定截留分子量的超滤膜，达到浓缩蛋白质溶液的目的。第1章蛋白质结构与功能血液透析小分子溶出小分子被带出透析机透析液加压血液第1章蛋白质结构与功能（二）丙酮沉淀、盐析及免疫沉淀*使用丙酮沉淀时，必须在0～4℃低温下进行，丙酮用量一般10倍于蛋白质溶液体积。蛋白质被丙酮沉淀后，应立即分离。除了丙酮以外，也可用乙醇沉淀。*盐析(saltprecipitation)是将硫酸铵、硫酸钠或氯化钠等加入蛋白质溶液，使蛋白质表面电荷被中和以及水化膜被破坏，导致蛋白质沉淀。第1章蛋白质结构与功能盐析向蛋白质溶液中加入大量硫酸铵后蛋白质会沉淀析出原因？蛋白质脱去水化层而聚集沉淀盐析（（NH4）2SO4）第1章蛋白质结构与功能*

免疫沉淀法：将某一纯化蛋白质免疫动物可获得抗该蛋白的特异抗体。利用特异抗体识别相应的抗原蛋白，并形成抗原抗体复合物的性质，可从蛋白质混合溶液中分离获得抗原蛋白。第1章蛋白质结构与功能第1章蛋白质结构与功能（三）电泳蛋白质在高于或低于其pI的溶液中为带电的颗粒，在电场中能向正极或负极移动。这种通过蛋白质在电场中泳动而达到分离各种蛋白质的技术,称为电泳(elctrophoresis)

。根据支撑物的不同，可分为薄膜电泳、凝胶电泳等。

第1章蛋白质结构与功能几种重要的蛋白质电泳*SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳，常用于蛋白质分子量的测定。*等电聚焦电泳，通过蛋白质等电点的差异而分离蛋白质的电泳方法。*双向凝胶电泳是蛋白质组学研究的重要技术。第1章蛋白质结构与功能聚丙烯酰胺凝胶电泳第1章蛋白质结构与功能等电聚焦电泳等电聚焦电泳第1章蛋白质结构与功能双向电泳双向凝胶电泳第1章蛋白质结构与功能（四）层析层析(chromatography)分离蛋白质的原理待分离蛋白质溶液（流动相）经过一个固态物质（固定相）时，根据溶液中待分离的蛋白质颗粒大小、电荷多少及亲和力等，使待分离的蛋白质组分在两相中反复分配，并以不同速度流经固定相而达到分离蛋白质的目的。第1章蛋白质结构与功能蛋白质分离常用的层析方法*离子交换层析：利用各蛋白质的电荷量及性质不同进行分离。*凝胶过滤(gelfiltra