羊地方性流产诊断技术-编制说明

注：提交时黑色和蓝色字均不可删减。没有的应写“无”。

一、工作简况

（一）任务来源

本项目由农业农村部畜牧兽医局提出，农业农村部列为2022年国家标准制

修订项目计划，任务编号20220275-T-326。

羊地方性流产又称羊衣原体病，是由流产衣原体引起的一种传染病，以发热、

流产、死产和产下生命力不强的弱羔为主要特征。人可能通过接触感染性流产物

或分娩物或在实验室处理衣原体培养物时不小心受到感染，从而导致亚临床感染，

甚至发生急性流感样疾病。怀孕后期羊的地方性流产已在世界上许多养羊地区引

起严重的繁殖损失。

WOAH将该病列为法定报告疫病，我国将其列为三类动物疫病。我国还没

有羊地方性流产诊断技术的相关标准。本标准的制定，将规范羊地方性流产的诊

断，及时确诊羊地方性流产，提出人间流产衣原体的预警，抵制境外势力生物武

器的袭击，保障我国的国防安全。

（二）起草单位和主要起草人及其所做的工作

中国动物卫生与流行病学中心接到此任务后，成立了项目组并开展国家标准

的制定工作，在项目实施过程中，山东省滨州畜牧兽医研究院、安徽科技学院、

广西壮族自治区动物疫病预防控制中心作为合作单位参与了标准的制定任务。参

与制定本标准的人员如下：

孙翔翔中国动物卫生与流行病学中心项目主持、标准起草；

孙淑芳中国动物卫生与流行病学中心技术指导、征求意见；

孙明军中国动物卫生与流行病学中心样品检测、方法复核；

樊晓旭中国动物卫生与流行病学中心样品检测、方法复核；

刘蒙达中国动物卫生与流行病学中心方法复核、征求意见；

张皓博中国动物卫生与流行病学中心方法复核、征求意见；

焉鑫中国动物卫生与流行病学中心方法复核、征求意见；

1

田莉莉中国动物卫生与流行病学中心方法复核、征求意见；

孙世雄中国动物卫生与流行病学中心方法复核、征求意见；

王金良山东省滨州畜牧兽医研究院方法复核、征求意见；

张训海安徽科技学院方法复核、征求意见；

熊毅广西壮族自治区动物疫病预防控制中心方法复核、征求意见；

何奇松广西壮族自治区动物疫病预防控制中心方法复核、征求意见；

邵卫星中国动物卫生与流行病学中心技术指导；

范伟兴中国动物卫生与流行病学中心技术指导。

（三）主要工作过程

1.起草阶段

标准起草阶段得到了国家重点研发计划“重大动物源性病原体传入风险

评估和预警技术研究(2017YFC1200500)”的支持，项目组在前期查阅资料的

基础之上，启动本标准的起草工作。编写过程中主要参考了世界动物卫生组

织（WOAH）发布的《陆生动物诊断试验和疫苗手册》关于羊地方性流产

（ManualofDiagnosticTestsandVaccineforTerrestrialAnimals，part3section

3.8chapter3.8.5ENZOOTICABORTIONOFEWES(OVINE

CHLAMYDIOSIS)(INFECTIONWITHCHLAMYDIOSISABORTUS）和中

国农业科学院兰州兽医研究所发布的《动物衣原体病诊断技术》（N/T

562-2015）等国内外相关标准和技术法规。

起草人与德国细菌感染和人兽共患病研究所衣原体病实验室负责人联

系，就羊地方性流产的诊断技术征求意见，得到的反馈是德国的技术与

WOAH推荐的诊断技术基本一致，在实验室中目前应用最多的方法是荧光

定量PCR方法和ELISA方法。结合国际专家的意见，同时综合考虑WOAH

手册规定和我国的实际情况，最终在标准的起草过程中，加入了常规PCR、

荧光定量PCR和ELISA等方法。

起草标准的同时，项目组就羊地方性流产试验方法的适用性在实验室内

进行了重复性试验，先后进行了常规PCR、荧光定量PCR和ELISA等诊断

方法的验证工作，证实了这些试验方法的准确性与可靠性。

2.征求意见阶段

2

在上述资料收集分析、试验研究、验证试验的基础上形成了标准征求意

见稿。并于2020年在国内单位征求意见。征求意见的单位包括中国动物卫

生与流行病学中心、北京市农林科学院畜牧兽医研究所、中国动物疫病预防

控制中心和安徽科技学院等4家单位，这些单位包括了科研院所、大专院校

和疫病控制机构等有关方面。4家单位返回意见的有4家单位，4家单位对

征求意见稿共提出27条修改建议。这些修改建议主要集中在以下几个方面：:

一是格式方面的建议，如数字与单位之间的空格不规范等，起草者对这类建

议全部接受，并利用国家标准化委员会提供的软件重新对标准征求意见稿进

行修改，彻底消除标准文本格式不规范的问题；二是文字方面的建议，这类

建议起草者大部分接受，使本标准的文字叙述更为准确和通俗易懂。

3.审查阶段（此次不写本部分）

4.报批阶段（此次不写本部分）

二、标准编制原则和确定标准主要内容的依据

（一）标准的编写原则

主要阐述标准制定或修订过程遵循的基本原则。

本标准按照标准编制的有关要求，通过对大量临床样品的检测应用，对

标准所述方法进行充分验证，对试验数据进行科学的统计分析，同时征求国

内各行业相关专家意见，力求所修定的标准符合以下原则：（1）科学严谨、

符合行业实情和要求，比较成熟，便于应用；（2）可操作性强，检测结果易

判断，检测效率较高；（3）易于实现标准化和规范化，便于推广。（4）制定

的国家标准既与国际接轨，又符合我国农业发展的实际情况。不强调所有检

测方法一定是最先进的技术和最先进的方法。

（二）提出本标准主要内容的依据

主要内容包括技术指标、参数、公式、性能要求、试验方法、检验规则等。

依据包括试验和统计数据。尤其注意本条不要写成任务来源。

本标准的提出是由于国际上拥有羊地方性流产诊断技术，我国农业发展

现行的标准缺乏相关内容。参考WOAH发布的《陆生动物诊断试验和疫苗

手册》和德国衣原体病参考实验室操作SOP，中国动物卫生与流行病学中心

提出制定本标准。

3

聚合酶链式反应（PCR）方法。由于PCR方法具有较高的敏感性和特

异性，利用PCR扩增衣原体DNA，是检测生物样品中衣原体的一种方法。

根据培养特性、流行病学特征和毒力，可将衣原体分为13个种，分别为流

产衣原体、鹦鹉热衣原体、家畜衣原体、豚鼠衣原体、沙眼衣原体、肺炎衣

原体、猫属衣原体、鼠衣原体、鸡衣原体、猪衣原体和鸟衣原体等，其中能

引起羊地方性流产的主要是流产衣原体。该PCR主要应用CH1和CH2等2

条引物，其靶基因是衣原体外膜蛋白pmp基因特异性引物，能鉴定出流产

衣原体、鹦鹉热衣原体和家畜衣原体。经94℃5min的初变性，经94℃30

sec、50℃60sec、72℃30sec的30个循环，经72℃2min延伸后，所有

流产衣原体成员可扩增出约300bp片段。

荧光定量PCR方法。荧光定量PCR方法由于其高特异性、快速、高通

量和易于标准化，已成为诊断实验室的首选方法荧光定量PCR是流产衣原

体定性的重要方法。该荧光定量PCR方法目标基因是流产衣原体外膜蛋白

ompA基因，引物为Cb上游和Cb下游，探针为Cb探针，经50℃2min

的去污染、95℃2min的初变性，经95℃15sec、60℃30sec的45个循

环，阳性样品可见有正弦曲线形成。

ELISA方法。基于LPS或EB抗原的ELISA不能区分感染家畜衣原体

和流产衣原体的动物，但也是羊地方性流产更敏感的初步筛查工具，而基于

合成的MOMP肽、重组的MOMP的ELISA可用来特异性地检测抗流产衣

原体抗体。该ELISA方法，用纯化的流产衣原体Momp抗原包被酶标板，

制成固相抗原，与样品中的流产衣原体抗体结合，洗涤后与辣根过氧化物酶

标记的抗原结核，形成抗原-抗体-酶标抗原复合物，加入底物和终止液后，

阳性样品可见颜色反应。

（三）新旧标准对比（适用于修订标准的情况）

三、主要试验或验证的分析、综述报告，技术经济论证，预期的

经济效果

（一）主要试验或验证的分析

本次制定的羊地方性流产诊断技术的标准主要有两大类，一类是基于病原的

4

分子生物学检测方法，另一类是基于抗原-抗体反应的免疫学方法。其中病原诊

断技术方面，聚合酶链式反应（PCR）和荧光定量PCR是除了病原分离以外，

应用最广泛的方法，具有敏感性和特异性的特点，尤其适合低微含量样品的快速

检测；免疫学方法可以通过抗体的检测，监测病毒感染情况以及疾病在种群中的

流行趋势。

1.基于病原的分子生物学检测方法的建立

1.1主要试剂及耗材血液全核酸提取试剂含(HighPurePCRTemplate

PreparationKit，Roche公司，美国)；核酸提取试剂盒(QIAampDNAMini

Kit,Qiagen公司，美国)；探针（上海生工生物工程股份有限公司）；异丙醇（国

药）；SuperRealPreMix(Probe)(天根生化科技（北京）有限公司)；2×PromixTaq

（带染料）(Takara)；4SGreenNucleicAcidStain（上海生工生物工程股份有限公

司）；2000bpDNAMarker(Takara)；

1.2仪器设备水浴锅、PCR仪、荧光定量PCR仪、移液器、离心机。

1.3DNA流产衣原体DNA由德国耶拿细菌感染和人兽共患病研究所提供

1.4引物由北京睿博兴科生物有限公司合成，经薄层层析纯化。

表1合成的引物序列

名称5'-3'序列片段长度（bp）特异性靶基因

CH1ATGTCCAAACTCATCAGACGAG

300衣原体科Pmp

CH2CCTTCTTTAAGAGGTTTTACC

Cb-上游GCAACTGACACTAAGTCGGCTACA

ACAAGCATGTTCAATCGATAAGAG

Cb-下游

A82流产衣原体ompA

FAM-TAAATACCACGAATGGCAAGT

Cb-探针

TGGTTTAGCG-TAMRA

1.5PCR反应

PCR反应体系如下：

2×PromixTaq（带染料）12.5μl

DNA5μl

上下游引物（10pmol/μl）各1μl

ddH2O5.5μl

5

总反应体系25μl

在PCR管中加入各组分，盖紧盖子，漩涡混匀，短暂离心。然后将PCR管

放入PCR仪中，按下列反应条件进行：

94℃5min

94℃30s

50℃60s30个循环

72℃30s

72℃2min

1.6荧光PCR反应体系

荧光PCR反应体系在PCR管中配制。如果有n个样品，同时配制n＋1

个反应体系，然后分装于各管。配制时，依次加入反应液12.5µL，引物，

（上游引物：0.5µL；下游引物0.5µL；探针0.25µL），加入DNA样本3µL，

无菌水补足至25µL。充分混匀后，瞬时离心，确保所有反应成分混匀并集

于管底。

加样后，置于荧光定量PCR仪内进行反应。反应条件如下：50℃2min

预变性；95℃10min；95℃变性10s，60℃退火延伸60s），45个循环。

退火延伸步骤采集荧光。

1.7产物检测

PCR产物检测取10μL产物加入到2%琼脂凝胶孔中，以80V电压进行

电泳，电泳结束后，经溴化乙锭(EB，终浓度为0.5μg/mL)染色后，在紫外

线台上观察并拍照，以标准分子质量作参考，分析记录结果。

荧光定量PCR产物用荧光定量PCR仪自带分析软件对扩增结果进行分

析。

1.8结果判定PCR扩增产物在2%琼脂糖凝胶电泳后，经EB染色后，衣

原体在紫外线下均可见一条大小为300bp的特异性条带（图1）。

6

说明：M——DL2000TMMarker，从上往下依次为2000bp、1000bp、750bp、

500bp、250bp、100bp；

1——条带为阳性对照；3——阴性对照；

2——样本阳性扩增结果；4——空白对照。

图1PCR结果判定示意图

荧光定量PCR产物阴性对照无扩增曲线，阳性对照Ct值应小于30.0，

并出现典型的扩增曲线则视为该实验成立。否则此次试验视为无效。在实验

成立的前提下，若检测样品Ct值≤30，且出现典型的扩增曲线，则荧光PCR

结果为阳性；若检测样品无Ct值且无扩增曲线，则荧光PCR结果为阴性（图

2）。

1、2—流产衣原体DNA；3—阴性对照

图2荧光定量PCR结果判定示意图

2.ELISA方法的建立

2.1抗原包被板和酶标抗原可购置。

2.22种ELISA方法的比较

2.2.1IDVET试剂盒ELISA操作方法：参照试剂盒操作方法进行。主要操作

7

包括将待检血清使用血清稀释液进行稀释，加入至酶标板中，室温作用45分钟，

洗涤后加入酶标抗体作用30分钟；洗涤后加入TMB底物溶液，作用后终止反

应，判定结果。

2.2.2其他品牌试剂盒ELISA操作方法：参照试剂盒操作方法进行。主要操

作包括将待检血清使用血清稀释液进行稀释，混匀后室温作用1h；将处理后的

血清加入至酶标板中，室温作用1h，洗涤后加入酶标抗体作用1h；洗涤后加入

TMB底物溶液，作用后终止反应，判定结果。

2.2.32种ELISA方法的比较结果

同时应用2种ELISA方法，检测标准阳性血清和标准阴性血清，检测标准

阳性血清和标准阴性血清，比较它们的P/N值，以P/N值的大小比较ELISA方

法的优劣。结果IDVET试剂盒的P/N值最高达30.4，其他品牌P/N值小于IDVET

试剂盒（见表1）。

表1不同试剂盒比较表

标准阳性值（P）标准阴性值（N）P/N值

IDVET试剂盒1.460.04830.4

其他品牌试剂盒0.620.03418.2

2.2.42种ELISA方法检测临床样品的比较

同时应用2种ELISA方法，检测临床样品，比较其敏感性和特异性。结果

IDVET试剂盒的阳性率达4.41%，其他品牌检测阳性率高于IDVET试剂盒（见

表2）。分析判断其他商品试剂盒适用于衣原体属的检测，敏感性较高；而IDVET

公司的试剂盒特异性较高，适用于筛选阳性个体。

表2不同试剂盒检测临床样品表

检测数（份）阳性数（份）阳性率（%）

IDVET试剂盒6834.41

其他品牌试剂盒685377.9

2.2.5IDVET公司流产衣原体ELISA试剂盒的初步应用

应用IDvet公司试剂盒对中国动物卫生与流行病学中心储备的部分临床血清

进行检测。2020年从全国15个省份65个养殖场采集1784份血清，血清阳性52

份，个体阳性率2.9%，群体阳性率32.3%；2021年从全国12个省份76个养殖

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场采集2084份血清，血清阳性75份，个体阳性率3.6%，群体阳性率32.9%。

2.3关于标准中ELISA结果的判定。不同的试剂盒，其判定标准是不一致的。

IDVET试剂盒为当阳性对照OD值＞0.35且P/N值（阳性对照OD值/阴性对照

OD值）＞3时，计算样品OD值/阳性对照OD值（S/P），当S/P≥0.6时判为阳

性，0.5＜S/P＜0.6时判为可疑，S/P≤0.5时判为阴性。这种使用P/N值作为对照

成立的判定条件较少。但通过大量应用证实ELISA的P/N值比单纯的P值和N

值更为稳定，因此最终在标准中应用P/N值作为对照成立的判定依据。

（二）综述报告

衣原体（Chlamydiae）是一类严格真核细胞内寄生细菌，具有独特的发育周

期可观察到两种不同的形态：一种是原体（EB），具有较强感染力，无繁殖能力；

另一种是网状体（亦称为始体）（RB），RB不具有感染性，在空泡内以二分裂方

式增殖成许多代EB。衣原体属（Chlamydia）包含至少13个种：沙眼衣原体

（C.trachomatis）、肺炎衣原体（C.pneumoniae）、鹦鹉热衣原体（C.psittaci）、

鼠衣原体（C.muridarum）、家畜衣原体（C.pecorum）、猪衣原体（C.suis）、鸟

衣原体（C.avium）、禽衣原体（C.gallinacea）、流产衣原体（C.abortus）、豚鼠

衣原体（C.caviae）、猫衣原体（C.felis）和其他未命名衣原体。

流产衣原体是小型反刍动物（绵羊、山羊）地方性流产常见的病原，亦能引

起牛、猪等家畜流产。流产衣原体是一种重要人兽共患病的病原体，可以感染孕

妇，使其发生流产或其他疾病。全世界许多国家都有关于流产衣原体感染牛的报

道，如德国、埃及、中国、瑞典等，它也是衣原体中造成经济损失最大的种型。

目前，中国关于衣原体的血清学调查大多使用间接血凝试验（IHA），且有些血

清学调查样本量太少，从而使这些研究所获得的结果经常有较大的偏差。

（三）技术经济论证

为了提高实验室对羊地方性流产诊断的水平，通过对各种引物条件和试剂的

优化，先后建立了PCR和荧光定量PCR检测方法，以满足不同实验室试验条件

的需要。针对目前衣原体属有至少13个种的情况，常规的流产衣原体DNA的

PCR检测方法是以基因序列保守区域为靶点，可以结合限制性片段长度多态性

分析来鉴别扩增的DNA序列；荧光定量PCR方法由于其具高特异性、快速、高

通量和易于标准化等优点，已成为诊断实验室的首选方法，建议首先针对流产衣

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原体属进行PCR筛查，在阳性病例中再采用基于外膜蛋白序列的流产衣原体特

异性筛选引物。根据以上思路，设计、筛选并优化了1对能特异性鉴定衣原体属

的PCR引物和1对特异性鉴定流产衣原体的荧光定量PCR引物。特异性上与其

它临床症状类似的疾病病原无交叉、无假阳性扩增结果。PCR检测出的阳性样

品在琼脂糖凝胶电泳300bp处可见明显条带，非常容易判定结果；荧光定量PCR

检测到的阳性样品在2个小时内可见明显荧光值，迅速、准确。经大量临床试验

检测，建立的常规PCR和荧光定量PCR方法，可以检测包括绵羊流产胎儿脾脏、

胃液、胎衣和拭子样品等材料，比涂片镜检和细菌培养检测方便、快捷。应用建

立的方法对新疆、广西和山东等地采集的样品进行检测，两种方法检测结果一致，

共检测样品168份，其中5份阳性，阳性率为2.98%。

羊地方性流产的血清学抗体检测通常是用补体结合方法（CFT）或ELISA

试验，两种方法的原理都是基于抗原-抗体反应，当这些检测方法采用LPS或全

菌作为抗原时，对抗体水平的检测往往出现较低的特异性和敏感性。根据以上思

路，考虑采取针对外膜蛋白（Momp）的ELISA抗体检测。应用IDvet公司试剂

盒对中国动物卫生与流行病学中心储备的部分临床血清进行检测。2020年从全

国15个省份65个养殖场采集1784份血清，血清阳性52份，个体阳性率2.9%，

群体阳性率32.3%；2021年从全国12个省份76个养殖场采集2084份血清，血

清阳性75份，个体阳性率3.6%，群体阳性率32.9%。2021年用其他商品试剂盒

与IDVET公司生产的羊地方性流产诊断试剂盒进行血清检测，用已知阳性血清

和已知阴性血清比较不同试剂盒检测的差异，共检测血清68份，初步分析判断

其他商品试剂盒适用于衣原体属的检测，敏感性较高；而IDVET公司的试剂盒

敏感性与其他试剂盒差别不大，但特异性较高，适用于筛选阳性个体。基于以上

研究进展，我们推荐采用这种ELISA方法，为我国羊地方性流产的诊断防控提

供技术支持。

（四）预期的经济效果

羊地方性流产常规PCR、荧光定量PCR和ELISA等方法的应用，将为羊地

方性流产的诊断提供科学的方法，有效监测疫病的流行形势，并通过流行病学调

查、监测与淘汰病畜等综合防治措施，防止羊地方性流产在我国的蔓延。本标准

涉及的试验必将为有效剔除病畜、减少繁殖损失提供技术支持，从而产生巨大的

经济效益。

10

四、采用国际标准和国外先进标准的程度，以及与国际、国内同

类标准水平的对比情况，或与测试的国外样品有关数据对比情况

本标准基本采用了国际标准。WOAH在线网站发布的《陆生动物诊断试验

和疫苗手册》中，羊地方性流产的诊断方法包括病原分离、PCR、荧光定量PCR

等病原学检测方法以及ELISA等免疫学检测方法，本项目使用的方法，即是根

据WOAH陆生动物诊断试验与疫苗手册，参考引进的德国耶拿细菌感染和人兽

共患病研究所国家衣原体病引进的PCR方法、荧光定量PCR方法以及商品化的

ELISA诊断方法，在实验室建立了可以快速确诊筛查衣原体科的PCR方法、可

以快速鉴定流产衣原体的荧光定量PCR方法以及用于流行病学监测的ELISA试

验方法。这些方法经过了多年的应用和实践验证确实有效。本标准起草人员在广

泛征求意见、充分吸收国内外经验的基础之上，本标准最终确定将PCR、荧光

定量PCR和ELISA试验列入标准，由项目参加单位开展了大量的检测复核试验，

对其参数进行了进一步的修正后引入到本标准中来。

五、与现行的法律、法规和强制性国家标准的关系

主要说明标准与相应法律法规和强制性标准之间的衔接、协调情况。列出与

标标准密切相关的法律法规、强制性标准的名称和编号。

我国尚未出台用于羊地方性流产诊断的法律、法规和强制性国家标准，本标

准的制定遵循GB/T1.1-2009、《中华人民共和国动物防疫法》、《GB/T18088-2000》、

《国家动物疫情测报体系管理规范》、《病原微生物实验室生物安全管理条例》、

《动物检疫管理办法》、《农业部国家（行业）标准的计划编制、制定和审查管理

办法》等相关法律、法规规定。

六、重大分歧意见的处理经过和依据

说明各方面专家对标准主要内容（如参数、指标、试验方法）有哪些重大分

歧，以及标准起草单位在修改完善标准过程中，对专家分歧意见的处理主要依据

和处理结果。对同一方法或问题有不同解决方案的应讨论出最佳方案。

无。

七、标准性质（强制性，推荐性）的建议，特别是对建议批为强

制性标准的理由应充分说明

严格按照立项下达的性质编写。无需增加解释文字。建议将本修订标准批准

11

为推荐性标准。

本标准批为推荐性标准。

八、贯彻标准的要求和建议措施（组织实施、技术措施、过渡办

法等）

标准发布后，为了有效贯彻实施之，建议农业农村部有关部门确定培训

对象，委托标准起草单位举办全国技术培训班，对有关技术人员进行相关技

术强化操作培训，培训效果要达到：懂原理、操作熟练、判定准确，回单位

基本能独立工作。

九、废止现行有关标准的建议；

无。

十、其他应予说明的事项。

主要包括标准项目任务完成中有关标准名称变更、对有争议问题、遗留问题

处理、尚需探讨的问题和制定或修订配套标准的说明等。

无。

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注：提交时黑色和蓝色字均不可删减。没有的应写“无”。

一、工作简况

（一）任务来源

本项目由农业农村部畜牧兽医局提出，农业农村部列为2022年国家标准制

修订项目计划，任务编号20220275-T-326。

羊地方性流产又称羊衣原体病，是由流产衣原体引起的一种传染病，以发热、

流产、死产和产下生命力不强的弱羔为主要特征。人可能通过接触感染性流产物

或分娩物或在实验室处理衣原体培养物时不小心受到感染，从而导致亚临床感染，

甚至发生急性流感样疾病。怀孕后期羊的地方性流产已在世界上许多养羊地区引

起严重的繁殖损失。

WOAH将该病列为法定报告疫病，我国将其列为三类动物疫病。我国还没

有羊地方性流产诊断技术的相关标准。本标准的制定，将规范羊地方性流产的诊

断，及时确诊羊地方性流产，提出人间流产衣原体的预警，抵制境外势力生物武

器的袭击，保障我国的国防安全。

（二）起草单位和主要起草人及其所做的工作

中国动物卫生与流行病学中心接到此任务后，成立了项目组并开展国家标准

的制定工作，在项目实施过程中，山东省滨州畜牧兽医研究院、安徽科技学院、

广西壮族自治区动物疫病预防控制中心作为合作单位参与了标准的制定任务。参

与制定本标准的人员如下：

孙翔翔中国动物卫生与流行病学中心项目主持、标准起草；

孙淑芳中国动物卫生与流行病学中心技术指导、征求意见；

孙明军中国动物卫生与流行病学中心样品检测、方法复核；

樊晓旭中国动物卫生与流行病学中心样品检测、方法复核；

刘蒙达中国动物卫生与流行病学中心方法复核、征求意见；

张皓博中国动物卫生与流行病学中心方法复核、征求意见；

焉鑫中国动物卫生与流行病学中心方法复核、征求意见；

1

田莉莉中国动物卫生与流行病学中心方法复核、征求意见；

孙世雄中国动物卫生与流行病学中心方法复核、征求意见；

王金良山东省滨州畜牧兽医研究院方法复核、征求意见；

张训海安徽科技学院方法复核、征求意见；

熊毅广西壮族自治区动物疫病预防控制中心方法复核、征求意见；

何奇松广西壮族自治区动物疫病预防控制中心方法复核、征求意见；

邵卫星中国动物卫生与流行病学中心技术指导；

范伟兴中国动物卫生与流行病学中心技术指导。

（三）主要工作过程

1.起草阶段

标准起草阶段得到了国家重点研发计划“重大动物源性病原体传入风险

评估和预警技术研究(2017YFC1200500)”的支持，项目组在前期查阅资料的

基础之上，启动本标准的起草工作。编写过程中主要参考了世界动物卫生组

织（WOAH）发布的《陆生动物诊断试验和疫苗手册》关于羊地方性流产

（ManualofDiagnosticTestsandVaccineforTerrestrialAnimals，part3section

3.8chapter3.8.5ENZOOTICABORTIONOFEWES(OVINE

CHLAMYDIOSIS)(INFECTIONWITHCHLAMYDIOSISABORTUS）和中

国农业科学院兰州兽医研究所发布的《动物衣原体病诊断技术》（N/T

562-2015）等国内外相关标准和技术法规。

起草人与德国细菌感染和人兽共患病研究所衣原体病实验室负责人联

系，就羊地方性流产的诊断技术征求意见，得到的反馈是德国的技术与

WOAH推荐的诊断技术基本一致，在实验室中目前应用最多的方法是荧光

定量PCR方法和ELISA方法。结合国际专家的意见，同时综合考虑WOAH

手册规定和我国的实际情况，最终在标准的起草过程中，加入了常规PCR、

荧光定量PCR和ELISA等方法。

起草标准的同时，项目组就羊地方性流产试验方法的适用性在实验室内

进行了重复性试验，先后进行了常规PCR、荧光定量PCR和ELISA等诊断

方法的验证工作，证实了这些试验方法的准确性与可靠性。

2.征求意见阶段

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在上述资料收集分析、试验研究、验证试验的基础上形成了标准征求意

见稿。并于2020年在国内单位征求意见。征求意见的单位包括中国动物卫

生与流行病学中心、北京市农林科学院畜牧兽医研究所、中国动物疫病预防

控制中心和安徽科技学院等4家单位，这些单位包括了科研院所、大专院校

和疫病控制机构等有关方面。4家单位返回意见的有4家单位，4家单位对

征求意见稿共提出27条修改建议。这些修改建议主要集中在以下几个方面：:

一是格式方面的建议，如数字与单位之间的空格不规范等，起草者对这类建

议全部接受，并利用国家标准化委员会提供的软件重新对标准征求意见稿进

行修改，彻底消除标准文本格式不规范的问题；二是文字方面的建议，这类

建议起草者大部分接受，使本标准的文字叙述更为准确和通俗易懂。

3.审查阶段（此次不写本部分）

4.报批阶段（此次不写本部分）

二、标准编制原则和确定标准主要内容的依据

（一）标准的编写原则

主要阐述标准制定或修订过程遵循的基本原则。

本标准按照标准编制的有关要求，通过对大量临床样品的检测应用，对

标准所述方法进行充分验证，对试验数据