常见微生物指标检测

酱油中细菌总数的测定细菌检测的意义

细菌总数是指食品检验经过处理，在一定条件下（培养基成分、培养温度和时间、pH、需氧性质等）培养后，所得1mL（g）检验中所含细菌菌落总数。

食品菌落总数可作为判定食品被污染程度的指标，同时，也可以用于观察细菌在食品中繁殖的动态，以便对被检样品进行卫生学评价时提供依据。一、实验目的1、学习食品中细菌总数测定的技术方法；2、掌握食品细菌总数的结果报告方式。1、仪器：电热恒温培养箱、恒温水浴锅、托盘天平、电炉、灭菌吸管、灭菌三角瓶、灭菌平皿、灭菌试管、试管架、酒精灯、75%酒精棉球、记号笔；2、试剂：75%乙醇、生理盐水或无菌水、营养琼脂培养基等

二、实验材料1、菌落总数检验程序三、实验方法（1）以无菌操作，将检样25mL放于含有225mL灭菌蒸馏水水的三角锥瓶中，摇匀，做成1：10的均匀稀释液。（2）另取1ml灭菌吸管吸取1：10稀释液1ml，沿管壁徐徐注入含有9ml灭菌水（注意吸管尖端不要触及管内稀释液，下同），振摇试管混合均匀，做成1：100的稀释液。（3）另取1ml的灭菌吸管，按上项操作顺序作10倍递增稀释液，如此每递增稀释一次，即换用1支1ml灭菌吸管。2、检样稀释及培养（4）根据食品卫生标准要求或对检样污染情况的估计，选择2~3个适宜稀释度，本次实验分别选取1：10；1：100；1：1000三个稀释液，以吸取该稀释度的吸管移1ml稀释液于灭菌平皿内，每个稀释度作两个平皿。（5）稀释液移入平皿后，应及时将凉至460C营养琼脂培养基注入平皿15ml~20mL，并转动平皿使混合均匀，同时将营养琼脂培养基倾入加有1ml稀释液（不含样品）的灭菌平皿内作空白对照。（6）等琼脂凝固后，翻转平板，置（36±1）0C恒温箱内培养（48±2）h取出，计算平板内菌落数目乘以倍数，即得1g（1mL）样品所含菌落总数。（1）菌落计数方法做平板菌落计数时，可用肉眼观查，必要时用放大镜检查，以防遗漏。在记下各平板的菌落数后，求出同稀释度的各平板平均菌落总数。3、菌落计算方法（2）菌落计数的报告酱油中细菌总数结果记录稀释度10-1

10-2

10-3平板121212菌落数＞300＞3003537

2

未检出平均菌落数36

细菌总数

3.6×103（cFu/mL）食品中大肠菌群的测定——以池水为例大肠菌群检测的原理及意义大肠杆菌是指一群在37℃条件下培养后，能发酵乳糖、产酸产气的需氧和兼性厌氧的革兰阴性无芽孢杆菌。该菌群主要来源于人畜粪便，故以此作为粪便污染指标，来评价食品的卫生质量，具有广泛的卫生学意义。大肠杆菌数常以1mL（g）检样内大肠杆菌的最大可能（MPN）表示。其测定是将一定量的样品接种乳糖发酵管，根据发酵反应结果，证实大肠杆菌的阳性管数后，在检索表中查出大肠菌群的MPN值。一、实验目的1、学习食品中大肠菌群检测程序、方法；2、掌握食品中大肠菌群检测结果的报告方式。二、实验材料1、设备和材料电热恒温培养箱、恒温水浴锅、托盘天平、电炉、灭菌吸管、灭菌三角瓶、灭菌平皿、灭菌试管、试管架、酒精灯、接种针等；2、培养基及试剂乳糖—胆盐发酵管、乳糖发酵管、蛋白胨水、伊红美蓝琼脂（EMB）、琼脂、革兰氏染色液、75%乙醇、生理盐水或无菌水、营养琼脂培养基等。三、实验方法与步骤1、水样的采取池水、河水或湖水应取距水面10—15㎝的深层水样，先将灭菌的带玻璃塞瓶，瓶口向下浸入水中，然后翻转过来，除去玻璃塞，水即流入瓶中，盛满后，将瓶塞盖好，再从水中取出，最好立即检查，否则需放入冰箱中保存。2、检样稀释（1）以无菌操作，将检样25mL放于含有225mL灭菌蒸馏水水的三角锥瓶中，摇匀，做成1：10的均匀稀释液。（2）取一支lmL吸管插入吸取1∶10稀释液1mL注入含有9mL灭菌水的试管内，振摇试管，混合均匀，做成1∶100稀释液。（3）另取1ml灭菌吸管按上述操作顺序操作10倍递增稀释液，如此每递增稀释1次，即换用1支1ml灭菌吸管。振摇试管，混合均匀，做成1∶1000稀释液。3、发酵试验

根据对检样污染情况的估计，选择三个稀释度，分别为10-1、10-2、10-3。每个稀释度样分别于接种三个单料乳糖胆盐发酵管1mL，即九个试管。置于（36±1）℃温箱内，培养（24±2）h。24小时后取出，如所有乳糖胆盐发酵管都不产气、产酸（颜色变浅），则可报告为大肠菌群阴性，如有产酸产气者，则按下列程序进行检验。4、分离培养将产气的发酵管分别转种在伊红美蓝琼脂平板上，置于35～37℃温箱内，培养18～24h，然后取出观察菌落形态、并做乳糖复发酵试验。5、复发酵证实试验在上述平板上，挑取可疑大肠菌群菌落以无菌操作接种于乳糖发酵管，置于（36±1）℃温箱内，培养（24±2）h，观察产酸产气情况。凡乳糖发酵管产气、产酸（颜色变浅），即可报告为大肠菌群阳性。符号乳糖胆盐发酵管发酵情况伊红美蓝平板上菌落生长情况复发酵管发酵情况

结论1+++阳性2+++