临床检验操作规程

临床检验操作规程

第一节临床血液学检验

血常规检查

【标本】

抗凝静脉血(有些仪器也可用末梢血)。

【方法】

血液细胞自动分析仪测定法。

【试剂】

血液细胞自动分析仪配套试剂。

【操作】

详见自己实验室血液细胞自动分析仪使用手册。

【附注】

1.血常规包括白细胞计数及分类、红细胞计数、血红蛋白浓度、

红细胞比积、血小板计数等项目。这些项目亦有相应的手工方法，详

见有关资料。

2.半自动及全自动血液细胞分析仪从设计上均要求用抗凝静脉

血。其优点为：

(1)静脉血能正确地反映病人实际情况，重复性好；

(2)利于延长仪器的使用寿命；

(3)解决了采血盘的交叉感染问题等。

3.血细胞计数应用EDTA-K2：为抗凝剂(EDTA-K2•2H201.5~

2.2mg可抗凝1ml血)。

4.贮血容器应选用有盖塑料管。抗凝血采集后在室温中贮存应

不超过6h;如需制作血涂片应在2h内完成。

5.测定前必须将EDTA♦匕抗凝血充分混匀。

6.血细胞分析仪测定最适温度为18〜22C,低于15C或高于

30℃,均可使细胞体积发生改变，影响各参数的结果。

7.血细胞分析仪用于白细胞分类只能当作一种过筛手段，当白细

胞、红细胞、血红蛋白和血小板的任何一项有明显

升高或降低；白细胞分类出现异常结果（中间细胞群百分率＞8.0%）;

红细胞、白细胞和血小板的任何一个直方图出现异常图形等情况，须

用显微镜检查及分类。

嗜酸性粒细胞直接计数

【标本】

末梢血或抗凝静脉血。

【方法】

直接计数法。

【试剂】

1.Hinkelmann液；

2.乙醇-伊红稀释液；

3.伊红-丙酮稀释液。

【操作】

1.小试管中加稀释液0.38ml。

2.常法取末梢血20ul,加入管内混匀，待红细胞溶解后两侧充

池。

3.静置3~5min,用低倍镜（必要时用高倍镜）镜下计数10

个大方格内嗜酸性粒细胞数。总数X20X10。=嗜酸性粒细胞/L

【附注】

1.血液稀释后应于1h内计数完毕。

2.充池前要充分混匀，但又不宜用力过猛。

3.住院病人采集标本时间力求统一，以免受日间生理变化的影

响。

红细胞沉降率测定

【标本】

抗凝静脉血。

【方法】

魏氏法。

【试剂】

109mmol/L枸椽酸钠溶液。

【操作】

1.3nlmx100mm试管1支，在2ml容量处刻上记号，加抗凝剂

0.4ml0

2.静脉采血后，取下针头，加血至刻度，旋转混合。

3.用血沉管(300mmx2.5mm)吸取上述混匀血液至"0"刻度

处，拭去管外附着的血液，将管垂直立在血沉架上。

4.记时，室温中静置lh,观察血浆高度，以红细胞下沉的毫米

数报告之。

【附注】

1.红细胞在单位时间内下沉的速度与血浆蛋白的量与质，血浆

中脂类的量和质，红细胞的大小与数量，是否成串钱相聚以及血沉管

的内径、清洁度、放置位置是否垂直，室温高低等因素都有关系。

2.标本采集时应空腹。

3.血液和抗凝剂的比例要准确。

4.血沉管内径要标准（2.5mm）,放置要垂直。

5.做血沉的标本要在采集后3h内测定，并充分混匀。

6.室温过低、过高和贫血时，对结果有影响。为此，血沉应尽

量放在18~25C室温下测定。室温过高时血沉加快，可以按温度系

数校正。室温过低时血沉减慢，无法校正。

网织红细胞计数

【标本】

末梢血或抗凝静脉血。

【方法】

百分计数法。

【试剂】

10g/L煌焦油蓝生理盐水溶液或10g/L煌焦油蓝ACD溶液。

【操作】

1.于小试管中滴加1滴煌焦油蓝生理盐水溶液或煌焦油蓝ACD

溶液。

2.加入末梢血或静脉血2滴于上述试管中，混匀。

3.静置15〜20min后，取用1滴制成薄片。

4.油镜下检查1000个红细胞中网织红细胞数，以百分率或绝对

值报告。

【附注】

1.活体染色时间不能过短，室温低时，放37C温箱。

2.网织红细胞也可用Miller窥盘计数法、荧光染色或流式细胞

仪计数。

嗜碱性点彩红细胞计数

【标本】

末梢血。

【方法】

百分计数法。

【试剂】

1.甲醇；

2.碱性亚甲基蓝染液（保存2〜3周）。

【操作】

1.按常法制成薄血片，自然干燥后，用甲醇固定3min。

2.用碱性亚甲基蓝染液染色1〜2niin,水洗待干。

3.用油镜计数1000个红细胞中嗜碱性点彩红细胞数，以百分率

报告。

【附注】

1.用碱性亚甲基蓝染液染色后，红细胞呈浅蓝绿色，嗜碱性点

彩呈深蓝色。

2.也可用瑞氏染色，嗜碱性点彩呈蓝黑色。

3.由于点彩红细胞分布不匀，必要时扩大计数红细胞数。

第二节体液及排泄物检查

尿液检验

尿常规检查

【标本】

新鲜尿液。

【方法】

化学试带法。

【试剂】

各型号尿液化学分析仪配套试带。

【操作】

详见自己实验室的尿液化学分析仪使用手册。

【附注】

1.尿常规检查使用尿液化学分析仪，目前能进行8~10项检测

（PH、蛋白、葡萄糖、酮体、隐血、尿胆红素、尿胆素原、亚硝酸盐、

比重、白细胞）。这些项目亦有相应的手工方法，详见有关资料。

2.必须了解所用试带各膜块注意事项、药物干扰。

3.要注意尿液化学分析仪测定结果与手工法的差异，必要时用

手工法复查。

4.尿液化学分析仪检测仅是一个过筛手段，当蛋白、隐血、白

细胞等出现异常结果（如尿蛋白"+”或以上）时，应进行镜检。

5.尿液颜色、透明度等一般性状异常时也应报告。

本-周氏（Bence-Jones）蛋白定性检查

【标本】

新鲜尿液。

【方法】

热沉淀反应法。

【试剂】

1.200g/L磺基水杨酸溶液；

2.2moi/L醋酸盐缓冲溶液（pH4.9土0.1）。

【操作】

1.先将尿液用磺基水杨酸法作蛋白定性检查，如呈阴性反应，

则可认为尿液标本中本-周氏蛋白阴性。

2.取透明尿液4ml于试管中，再加入醋酸盐缓冲液1ml,混匀

后，放置56C水浴中15分钟。如有浑浊或出现沉淀，再将试管放入

沸水中，煮沸3分钟，观察试管中浑浊或沉淀的变化，如浑浊变清、

浑浊减弱或沉淀减少，均提示本-周氏蛋白阳性。若煮沸后，浑浊增

加或沉淀增多，表明此尿液中还有其它蛋白质，此时应将试管从沸水

中取出，立即过滤。如滤液开始透明，温度下降后浑浊，再煮沸时又

透明，提示本-周氏蛋白为阳性。

【附注】

1.过多的本-周氏蛋白，在90C以上不易完全溶解，故需与对

照管比较，也可将尿液稀释后再测。

2.煮沸过滤除去尿中白、球蛋白时，动作要迅速，并需保持高

温，否则本-周氏蛋白也会滤去。

尿乳糜定性检查

【标本】

新鲜尿液。

【试剂】

1.乙醛(AR);

2.苏丹川醋酸乙醇染色液或猩红染色液。

【操作】

1.取尿5〜10ml,加乙醛2~3ml,混合振摇后，使脂肪溶于乙

醒。静置数分钟后，2000r/min离心5min。

2.吸取乙醛与尿液的界面层涂片，加苏丹川醋酸乙醇染色液或

猩红染色液1滴。

3.镜检观察是否有红色脂肪小滴。

【附注】

1.尿液中加少量饱和氢氧化钠，再加乙醛，有助于澄清。

2.将分离的乙醛层隔水蒸干，若留有油状沉淀，也可加苏丹in,

镜检证实有无脂肪小滴。

尿胆色素原定性试验

【标本】

新鲜尿液。

【试剂】

1.对二甲氨基苯甲醛试剂；

2.饱和醋酸钠溶液；

3.氯仿；

4.正丁醇。

【操作】

1.在试管中，加入尿标本2ml及对二甲氨基苯甲醛试剂2ml,

混合。

2.立即加饱和醋酸钠溶液4ml,混合，加氯仿3ml,振摇混合后,

上层水溶液呈红色者为阳性反应。

3.阳性结果应用下法证实：如尿胆原含量多，用一次氯仿不能

完全抽提尿胆原，应多次用氯仿抽提，直至氯仿层呈淡粉红色或无色

为止，再观察上层水溶液色泽。如上层水溶液为红色时，再加正丁醇

4ml抽提，如水溶液仍呈红色则证实尿中胆色素元为阳性。

【附注】

1.醋酸钠溶液必须为饱和液。

2.当尿胆色素原浓度太高时，应将尿标本稀释25~100倍。

3.尿液必须新鲜，不能久置。

尿苯丙酮酸定性试验

【标本】

新鲜尿液。

【方法】

三氯化铁法。

【试剂】

1.100g/L三氯化铁液；

2.磷酸盐沉淀剂。

【操作】

1.尿液4ml加磷酸盐沉淀剂1ml,混匀，静置3min,如出现沉

淀，可用滤纸过滤或离心除去。

2.滤液中加入浓盐酸2~3滴和100g/L三氯化铁溶液2〜3滴，

每加1滴立即观察颜色变化。以尿液显蓝绿色并持续2-4min,为阳

性。

【附注】

1.尿中若含酚类药物（如水杨酸制剂）及氯丙嗪，也可与氯化

铁结合显色，试验前应停用此类药物。胆红素也可造成假阳性。

2.小儿出生后6周内不易查出。故于出生6周后检查为宜。

3.大多数苯丙酮尿症患者的尿液可出现阳性。但约1/4〜1/2病

例可能会漏检

4.亦可采用2,4-二硝基苯肺法。

尿沉渣检查

【标本】

新鲜尿液（最好采集清晨中段尿）。

【方法】

显微镜检查法。

【操作】

1.取刻度离心管,倒入混合后的新鲜尿液10ml,1500r/min离

心5mino

2.弃去上层清液，留下0.2ml沉渣，轻摇离心管，使尿沉渣有

形成分充分混匀。

3.取尿沉渣0.02ml,滴在载玻片上，用18mmx18mm的盖玻片

覆盖。

4.镜检观察，用10x10镜头，观察其中有形成分的全貌及管

型。用10x40镜头观察鉴定细胞成分及计算数量，应观察10个视

野所见最低和最高值，记录结果。管型用高倍镜鉴定，但计数数量按

低倍镜观察20个视野，算出一个视野的平均值，记录结果。尿结晶

和盐类数量以每一高倍视野+、2+、3+、4+报告。

【附注】

1.清晨空腹第一次尿（一般情况应采集中段尿），应在lh内送

检。

2.见到各种上皮细胞也应报告，报告方式参照白细胞。

3.亦可采用染色尿沉渣镜检。

尿沉渣定量检查

【标本】

新鲜晨尿。

【方法】

一小时尿沉渣计数法。

【操作】

1.标本收集：患者先排尿弃去，准确收集3h尿液于干燥容器

内送检（标本留取时间5:30~8:30）„

2.准确测量3h尿量，充分混合。取混匀尿液10ml,置刻度离

心管中，1500r/min离心5min,用吸管吸弃上层尿液9ml,留下1ml,

充分混匀。吸取混匀尿液1滴，注于血细胞计数板内。细胞共数10

个大方格，管型共数20个大方格。最终计算出红细胞/h、白细胞/h、

管型/h。

【附注】

1.尿液应新鲜，PH应在6以下。

2.尿液比重最好在1.026以上。

3.如尿液中含多量磷酸盐时，应加少量稀醋酸液（切勿加多），

使其溶解；含大量尿酸盐时，应加温使其溶解。

4.亦可采用尿沉渣定量分析板或尿沉渣自动分析仪进行尿沉渣

定量检查，详见有关资料。

绒毛膜促性腺激素检测

【标本】

新鲜尿液。

【方法】

金标抗体检测法。

【操作】

见试剂盒说明书。

【附注】

若质控点和测定点均不呈现红色，表示试剂失效。

粪便检验

粪便的显微镜检查

【标本】

新鲜粪便。

【方法】

直接涂片镜检法。

【操作】

1.洁净玻片上加等渗盐水1~2滴，选择粪便的不正常部分，或

挑取不同部位的粪便做直接涂片（最好取大玻片，制成涂片后，应覆

以盖片。涂片的厚度以能透过印刷物字迹为准）检查。

2.在涂片中如发现疑似包囊，则在该涂片上滴加1滴碘液，在高

倍镜下仔细鉴别，如仍不能决定时，可取全量粪便浓缩法检查。

隐血试验

【标本】

新鲜粪便。

【方法】

免疫学检测法。

【操作】

取一片洁净干燥的载玻片，滴加2~3滴蒸像水，取粪便少许，

调成均匀混悬液。取粪便隐血试纸条，按说明书操作，将试纸条的反

应端浸湿。在5min内观察结果。以反应线及质控线均呈蓝色带为阳

性。

【附注】

1.若两条线均不显色，说明试纸条失效。

2.本法由于间断性出血或出血在粪便中分布不均等因素，可造

成假阴性结果。

3.本法由于药物等原因，对正常人检查有时会得到阳性结果。

4.亦可采用化学试带法、邻甲联苯胺法、愈创木酯法等。收集

标本前3日应禁食动物性食物及富含叶绿素食物、铁剂、中药。但本

法不受动物血红蛋白的干扰，试验前不须禁食肉类。

粪胆素检查

【标本】

新鲜粪便。

【方法】

氯化高汞煮沸法。

【试剂】

饱和氯化高汞溶液。

【操作】

1.于小试管内置粪便一小块，加饱和氯化高汞溶液数毫升。

2.将粪块调匀，加热煮沸3min,立即观察颜色反应。

【附注】

1.结果不易判定时，应注意粪便颜色，必要时以盐水代替试剂

做空白对照。

2.当粪便颗粒经煮沸后如有红色又有绿色出现，说明标本内既

含粪胆素又含胆红素，常见于肠炎、腹泻等。

脑脊液检验

潘氏（Pandy）球蛋白定性试验

【标本】

新鲜脑脊液。

【试剂】

5%苯酚溶液（棕色瓶内保存）。

【操作】

取试剂2~3ml,置于小试管内，用毛细滴管滴入脑脊液1〜2滴,

衬以黑色背景，立即观察结果，报告阴性或阳性及阳性的程度。

细胞计数

【标本】

新鲜脑脊液。

【试剂】

1.细胞计数板；

2.红细胞稀释液；

3.冰乙酸；

4.1%冰乙酸。

【操作】

1.细胞总数：

(1)澄清脑脊液：混匀后用滴管直接滴入计数池，计数10个大

方格内红、白细胞数，其总和即为每u1的细胞数。(如细胞较多，

可计数一大格内的细胞数X10)。

(2)浑浊或带血脑脊液：用血红蛋白吸管吸取混匀的脑脊液

20ul,加入含红细胞稀释液0.38ml的小试管内，混匀后滴入计数池

内，用低倍镜计数4个大方格中的细胞总数，再乘以50即为每ul脑

脊液的细胞总数。

2.白细胞数：

(1)非血性标本：小试管内放入冰乙酸1〜2滴，转动试管，使

内壁沾有冰乙酸后倾去之，然后滴加混匀的脑脊液3~4滴，数分钟

后，混匀充入计数池，按细胞总数操作中的红、白细胞计数法计数。

(2)血性标本：将混匀的脑脊液用1%冰乙酸溶液稀释后，按细

胞总数操作中的红、白细胞计数法计数，结果x稀释倍数。

3.细胞分类：

(1)直接分类法：白细胞计数后，将低倍镜换成高倍镜，直接

在高倍镜下根据细胞核的形态分别计数单个核细胞(包括淋巴细胞及

单核细胞)和多核细胞，应数100个白细胞，并以百分率表示。若白

细胞少于100个，应直接写出单核、多核细胞的具体数字。

(2)染色分类法：如直接分类不易区分细胞时，可将脑脊液离

心沉淀，取沉淀物2滴，加正常血清1滴，推片制成均匀薄膜，置室

温或37C温箱内待干，进行瑞氏染色后用油镜分类。

如见有不能分类的细胞，应另行描述报告。

【附注】

1.脑脊液常规包括一般性状检查、潘氏(Pandy)球蛋白定性试

验及细胞计数。

2.计数应及时进行。

3.细胞计数时，应注意新型隐球菌与白细胞的区别。

4.计数池用后，应用75%乙醇消毒60min。

浆膜腔积液检查

浆膜粘蛋白定性试验(Rivalta反应)

【标本】

新鲜浆膜腔积液。

【试剂】

冰醋酸。

【操作】

取100ml量筒，加蒸镭水100ml,滴入冰醋酸0.1ml(PH3~5),

充分混匀，静止数分钟，将穿刺液靠近量筒液面逐滴轻轻滴下，在黑

色背景下，观察白色雾状沉淀的发生及其下降速度等，报告阴性或阳

性及阳性的程度。

细胞学检查

【标本】

新鲜浆膜腔积液。

【操作】

1.细胞总数及有核细胞计数

方法基本与脑脊液同，漏出液中有核细胞数量常在100x1()6/1

以下；渗出液中有核细胞数量较多，常在500X1(T/L以上。

2.细胞分类：

穿刺液应在抽出后立即离心，用沉淀物涂片后以瑞氏染色法进行

分类。必要时制备稍厚涂片，在干燥前放置乙醛乙醇等量混合液中固

定30min,用苏木素-伊红(HE)或巴氏法染色查找癌细胞。

精液检查

精子活动率

【标本】

新鲜精液。

【操作】

取新鲜标本混匀后，在温热玻片上用高倍镜观察100个精子，计

数活动精子与不活动精子的比例，计算精子活动的百分率。

【附注】

如室温低于10℃时，应将标本先放入37C温育5~10min后镜检。

精子活力

【标本】

新鲜精液。

【操作】

取上述新鲜湿片标本，观察精子的活动力，以。级至IV级报告。

精子计数

【标本】

新鲜精液。

【试剂】

精子稀释液。

【操作】

1.于小试管内加精子稀释液o.38ml,吸液化精液20ul,加入稀

释液内摇匀。

2.充分摇匀后，滴入血细胞计数池内，静置1〜2min,待精子

下沉后，以精子头部作为基准进行计数。

3.如精子数少，可计数2个大方格内精子数，数得总数乘10万

即为每毫升精液内精子数，再换算成X107L报告。

4.如精子数多，可计数5个中方格内精子数，加6个零，即为

每ml精液内精子数再换算成xlO'/L报告。

【附注】

1.收集精液前应避免性生活3—7天，精液宜用清洁干燥之小瓶

收集，避孕套内的精液不宜采集。收集精液标本后应在一小时内检查,

冬季应注意保温。

2.出现一次异常结果，应隔一周后复查，反复查2~3次方能得

出比较正确的结果。

3.如低倍镜、高倍镜检查均无精子，应将精液离心沉淀后再涂

片检查，如两次均无精子，报告“无精子”。

精子形态观察

【标本】

新鲜精液。

【试剂】

革兰或瑞氏染液。

【操作】

革兰或瑞氏染色后用油镜观察，报告异常精子的百分比。

前列腺液检查

【标本】

新鲜前列腺液（临床医师作前列腺按摩术后，采集标本于清洁玻

片上，立即送检）。

【操作】

1.肉眼观：记录液体颜色、是否混有血液、粘稠度（有无脓块）。

2.湿片镜检：高倍镜下观察白细胞、红细胞、卵磷脂小体，其

次为上皮细胞、精子、淀粉样体等，必要时革兰染色查细菌。

阴道分泌物检查

【标本】

阴道分泌物。

【操作】

1.清洁度：取阴道分泌物，用生理盐水涂片，高倍镜检查，根

据所含白细胞（或脓细胞）、上皮细胞、杆菌、球菌的多少，分成I~

IV度。

2.滴虫检查：在湿片镜下如见梨形，比白细胞大2倍，顶端有

鞭毛4根，在25〜42C温度下可活动的滴虫（在寒冷天气，标本要

采取保温措施），报告之。

3.霉菌检查：在湿片高倍镜下如见卵圆形霉菌袍子，报告之。

痰液检查

显微镜检查

【标本】

痰液。

【操作】

选择脓样、干酪样或带脓样血液部分，取1小块置玻片上，直接

与生理盐水混合，涂成薄片，加盖片后轻压之，用低倍镜及高倍镜检

查。注意有无红细胞、白细胞、上皮细胞、弹力纤维、枯什曼螺旋体、

夏科-雷登结晶、胆红素结晶、硫磺样颗粒（放线菌块）、寄生虫卵

（可见蛔虫卵、肺吸虫卵）、痢疾阿米巴、真菌袍子、心力衰竭细胞、

载碳细胞、癌细胞等。

嗜酸性粒细胞检查

【标本】

痰液。

【试剂】

瑞氏或伊红-美蓝染色液。

（操作

取痰液做直接涂片，干燥后用瑞氏或伊红-美蓝染色液染色，油

镜下计数100个白细胞，报告嗜酸性粒细胞百分数。

第三节血栓与止血的检验

血管壁与内皮细胞检验

出血时间（BT）

出血时间检测是指皮肤受特定条件的外伤后，出血自行停止所需

的时间。此过程反映皮肤毛细血管与血小板相互作用，包括血小板粘

附，血小板活化和释放以及血小板聚集等反应。

1.出血时间“测定器法”自肘前窝凹下二横指处，经常规消毒

后，使刀片由“测定器”内刺入皮肤，启动秒表，每隔半分钟用干净

滤纸吸干流出的血液，直至出血自然停止，按停秒表，记录出血时间。

2.Duke法，自耳垂或指尖取血。

（方法与操作】

见《全国临床检验操作规程》（第二版）

（注意事项】

测定器法：

1.采取部位应保暖，血液应自动流出。

2.由于刺入皮肤的刀片长度和深度均固定，故“测定器法”的

结果较为准确。

3.滤纸吸干流出血液时，应避免与伤口接触。

4.试验前1周内不能服用抗血小板药物，如阿司匹林等，以免

影响结果。

血小板数量和功能检验

血小板计数和平均血小板体积测定

血小板计数:

目视计数法。

【标本】

末梢血或抗凝静脉血。

（方法与操作】

见《全国临床检验操作规程》（第二版）。

【试剂】

1.草酸铁法稀释液。

2.许汝和稀释液。

【附注】

1.血小板稀释液要清洁。防微粒和细菌污染。试管和吸管也应

清洁、干净。

2.针刺应稍深，使血流通畅。拭去第一滴血后，首先采血作血

小板检测，动作要快，防止血小板聚集和破坏。采取标本后尽快计数。

3.血液稀释液充分混匀后，滴入计数池内后，要静置l（F15niin。

室温高时注意保持计数池周围的湿度，以免水分蒸发。

4.计数时光线要适中，注意有折光性的血小板与杂质灰尘相区

别，附在血细胞旁边的血小板也要注意，不要漏掉。

血小板计数仪计数

【标本】

末梢血。

（方法与操作】

使用血小板计数仪及与其相匹配的稀释液。操作详见仪器使用说

明书。

平均血小板体积（MPV）测定

【标本】

根据仪器的要求用末稍血或静脉取血注入抗凝管（EDTA.Na2或肝

素）

（方法与操作】

自动化血细胞计数仪均可检测

血小板功能检验

血小板粘附试验

【标本】

自静脉取血1.0-l.5mL

【方法】

1.玻珠柱法：

（1）操作：见《全国临床检验操作规程》（第二版）。

（2）注意事项：

1）取血过程必须顺利，掌握血液通过玻珠柱的速度，流速

太快，粘附率降低，流速太慢会使粘附率增高。

2）玻珠柱为一次性用具，用后即弃去。

3）待用玻珠柱应置于干燥器中贮存，受潮后粘附率下降。

2.玻璃滤器法：

【标本】

自静脉取血1.5mlo

（方法与操作】

见《全国临床检验操作规程》（第二版）。

血小板聚集试验（PAgT）

【标本】

自肘静脉取血4.5ml注入于含0.5ml109mmol/L枸椽酸钠的硅化

离心管内，充分混匀。

【试剂】

1.富含血小板血浆（PRP）及贫含血小板血浆（PPP）。

2.血小板聚集诱导剂ADP、肾上腺素、胶原、瑞斯托霉素

（Ristocetin）等。

［方法与操作】

PAgT比浊法，按《全国临床检验操作规程》（第二版）步骤操作。

（注意事项】

1.血标本中pH6.8飞.5之间时，可测得最佳结果。pH<6.4或

>10.0时，可使聚集抑制或消失。

2.阿司匹林、潘生丁、肝素、双香豆素等可抑制聚集，尤其阿

司匹林抑制聚集作用时间可持续1周。

3.采血后标本应放在15~25C下，切忌冰箱内保存，并在3h内

作完实验。

凝血因子检验

全血凝固时间检验（CT）

【标本】

静脉取血3mlo

（方法与操作】

试管法、硅管法操作参见《全国临床检验操作规程》（第二版）。

【附注】

1.静脉取血要一针见血，尽量减少组织液和空气混入。

2.水浴箱温度要恒定，过高或过低，可影响结果。

活化部分凝血活酶时间测定（APTT）

【标本】

自静脉取血，用109mmo1/L枸椽酸钠作1:9抗凝。

【试剂】

市售成套试剂。

［方法与操作】

按试剂及有关仪器说明书要求进行。

【附注】

1.标本应及时检测，最迟不超过2h。

2.分离血浆应在3000r/min,离心lOmin。

3.本试验较试管法全血凝血时间敏感，能检出因子削：C<25%

轻型血友病。

血浆凝血酶原时间测定（PT,一期法）

【标本】

静脉血1.8ml,用109mmol/L枸椽酸钠0.2ml抗凝。

【试剂】

1.组织凝血活酶浸出液；

2.0.025mol/LCaCh液;

（方法与操作】

见《全国临床检验操作规程》（第二版）。

【附注】

1.采血后宜在lh内完成，置冰箱4C保存，不应超过4h,-20C

下可放置2周，-70C可放置6个月。

2.水温箱控制在37C±1C,过高过低均影响结果。

简易凝血活酶生成试验（STGT）

【标本】

取全血0.04ml加5nli蒸偏水，混匀，即成溶血液，备用。

（方法与操作】

见《全国临床检验操作规程》（第二版）

循环抗凝物质检验

凝血酶时间测定（TT）

【标本】

自静脉取血「1.5ml,注入枸椽酸钠抗凝管内，混匀。

（方法与操作】

见《全国临床检验操作规程》（第二版）

【试剂】

1.109mmol/L枸椽酸钠液

2.凝血酶溶液

【附注】

1.采血后宜在lh内完成，置冰箱内保存不应超过4h。

2.肝素或EDTA.Na2抗凝血浆不宜作本试验。

第四节溶血性贫血的检验

红细胞渗透脆性试验

标本】

1.简易法，静脉血为宜。

2.比色法，用肝素抗凝管，抽取静脉血1.0一1.5011,混匀。

(方法及操作与试剂】

1.简易法：用配有6号针头的干燥无菌注射器取静脉血

1.01.5ml,立即滴入试管架上含有不同量的NaCL及蒸偏水的各管

中，每管1滴，贫血患者可加2滴，摇匀，静置，室温2h,观察结

果。详见《临床实验诊断学上册》。

2.比色法：见《临床实验诊断学上册》。

【附注】

1.简易法：

(1)试剂配制要准确，每次配制量不宜过大，厂2个月内需更

换1次试剂。

(2)如取耳垂血要使血液流出畅通，如静脉血要求注射器干燥。

(3)如用抗凝血，以去纤维蛋白或肝素抗凝血为合适。

(4)如开始及完全溶血的结果不易判断时，可离心后观察。

(5)地中海贫血的渗透脆性降低，需作低浓度NaCL液检测。

2.比色法：

(1)如在室温下实验，需在2小时内比色结束。

(2)血与NaCL缓冲液的PH值及温度对检查结果均有一定影响。

红细胞自体溶血试验

本试验是测定患者的红细胞在自体血清中经孵育后，自发发生的

溶血程度。

【试剂】

1.100g/L葡萄糖(无菌);

2.等渗盐水（无菌）；

3.HiCN稀释液;

4.0.4.1101/LATP生理盐水无菌液。

（方法与操作】

见《全国临床检验操作规程》第二版。

【附注】

应严守无菌操作规程。

临床微生物及寄生虫检验

细菌涂片检查

涂片不染色显微镜检查

1.标本要求：各种标本或细菌培养物。

2.试验方法：直接涂片法、压滴法或悬滴法。

3.操作步骤：见《全国临床检验操作规程》（第二版）。

4.结果观察：观察标本中有无细菌或真菌，如有再观察细菌的形

态及运动情况，报告所见。

5.注意事项：注意微生物操作安全；标本量不宜太多，以免影响

观察；涂片制作后立即观察，涂片干涸后应重新制作涂片。

涂片革兰染色显微镜检查

1.标本要求：各种标本或细菌培养物。

2.试验方法：常规法、快速法。

3.操作步骤：见《全国临床检验操作规程》（第二版）。

4.结果观察：观察染色涂片有无细菌或真菌，如有则进一步观察

细菌的染色性、形态、特殊结构及排列方式。涂片中如有细胞，则观

察细菌菌体在细胞内或细胞外。报告所见。

5.注意事项：涂片厚薄适宜均匀；固定及染色不能超时，否则染

色变性；只能报告所见细菌的染色性、形态、特殊结构及排列方式，

不能直接报告细菌菌种如报告涂片见淋病奈瑟菌、白喉棒状杆菌。

涂片抗酸染色显微镜检查

1.标本要求：各种标本或细菌培养物。

2.试验方法：萋尼染色法、快速染色法或荧光（金胺-罗丹）染

色法。

3.操作方法：见《全国临床检验操作规程》（第二版）。

4.结果观察：抗酸菌在萋尼染色法中呈红色，在金胺-罗丹染色

法中呈荧光金黄色。

5.观察染色涂片有无抗酸杆菌，如有则进一步观察细菌数量大致

情况。涂片中如有细胞，则观察菌体在细胞内或细胞外。报告所见。

6.注意事项：涂片厚薄适宜均匀；固定及染色不能超时，否则染

色变性；只能报告有无抗酸杆菌，如有，可报告其数量大致情况及是

否在细胞内，不能直接报告见分枝杆菌或结核分枝杆菌，因奴卡菌属、

放线菌属细菌也可为抗酸阳性菌。

涂片墨汁染色显微镜检查

1.标本要求：各种标本或细菌培养物。

2.试验方法：直接染色法。

3.操作步骤：见《全国临床检验操作规程》（第二版）。

4.结果观察：涂片背景为黑色，新型隐球菌或细菌荚膜在染色中

呈折光环形菌体结构。

5.观察染色涂片有新型隐球菌或细菌荚膜时为检查阳性。报告所

见。

6.注意事项：染液与标本液的比例为1:1,比例不当影响观察效

果；只能报告所见即有无折光性环状样菌体，不能直接报告见新型隐

球菌等。

寄生虫检验操作

疟原虫检查

1.标本要求：间日疟及三日疟患者应在发作后数小时至10小时采

血，恶性疟患者在发作后20小时左右采血。

2.试验方法：薄血片或厚血片染色镜检。

3.试验材料：瑞氏-姬姆萨染色液、显微镜等。

4.操作步骤：见《全国临床检验操作规程》（第二版）。

5.结果判断：薄片须找100或100以上个视野，厚片须找20个视

野或以上才能报告“未找到疟原虫”。

6.注意事项：见疟原虫时必须进行分类。

微丝坳检查

1.标本要求：采血时间以晚上9〜12时前后为宜。

2.试验方法：鲜血片法、厚血片法、试管浓集法。

3.试验材料：枸椽酸钠等。

4.操作步骤：见《全国临床检验操作规程》（第二版）。

虫卵及包囊浓缩检查

1.标本要求：新鲜粪便取蚕豆大小，放于大小与大号青霉素相似

的瓶内。

2.试验方法：漂浮法、清水沉淀法。

3.试验材料：一般检验常规材料。

4.操作步骤：见《全国临床检验操作规程》（第二版）。

肛门擦拭子虫卵检查

1.标本要求：随机取样送检。

2.试验方法：软透明纸肛门拭子检查法、棉拭子肛门擦拭法等。

3.试验材料：一般常规实验用品。

4.操作步骤：见《全国临床检验操作规程》（第二版）。

临床免疫学检查

传染病免疫学检查

乙型肝炎血清标志物（HBV-M）检测

【方法】

ELISA法。

【试剂】

国内有商品化试剂盒供应。但必须按规定使用经中国药品生物制

品检定所检定并贴有“中国药品生物制品检定所检定合格”字样的防

伪标签的试剂。

【操作】

按试剂盒内说明书书进行。

【附注】

1.试剂盒应置冰箱中保存，取出后平衡至室温方可使用，未用

完的微孔条须密封保存；

2.每次应设空白1孔（不加标本及标酶试剂，其余各步相同）,

阴性对照3孔，阳性对照2孔;

3.洗涤液须用蒸镭水或去离子水配制，洗涤时各孔均应加满洗

液，以防孔口内边缘有游离酶残存不能洗净；

4.用洗板机洗板，每次洗板反复5遍，最后一次要求微孔内不

残留洗涤液，如达不到要求，需扣干；

5.洗板机洗板时应设定30―60秒的浸泡时间；

6.滴加试剂前应将滴瓶翻转数次，使液体均匀并弃去一滴。滴

加时瓶身应保持垂直，以使滴量准确，注意勿将试剂滴在孔壁上；

7.37C温育须采用水浴箱，不可使用37C干式恒温箱，且微孔

条必须接触37℃水浴水面，不可悬空；

8.不同批号试剂不可混合使用。

【结果判断】

酶标仪双波长450/630nm比色测定；

1.HBsAg、抗一HBs、HBeAg;

临界值(C.0)=阴性对照孔A值的均值Nx2.1(阴性对照A值

<0.05时按0.05W；

标本A值S/C.O>1为HBsAg,抗一HBs、HBeAg阳性(S/N>2.1);

标本A值S/C.0<1为HBsAg、抗一HBs、HBeAg阴性(S/N<2.1)。

2.抗一HBe、抗一啊；

临界值(C.O)=阴性对照孔A值的均值Nx0.5;

标本A值S/C.0<1者为抗一HBe、抗一HB,阳性(S/NC0.50);

标本A值S/C.O>1者为抗一HBe、抗一HBc阴性(S/N>0.50)。

抗甲型肝炎病毒免疫球蛋白M(Anti-HAV-IgM)测定

【方法】

ELISA法。

【试剂】

市售合格试剂、要求同HBV两对半；

【操作】

按试剂说明书要求进行，要求可参考HBV两对半；

【结果判断】

要求同HBV两对半中HBsAg。

抗丙型肝炎病毒免疫球蛋白G(Anti-HCV-IgG)测定

【方法】

ELISA法。

【试剂】

市售合格试剂、要求同HBV两对半。

【操作】

按试剂盒说明书进行、要求可参考HBV两对半。

【结果判断】

1.阴性对照：正常情况下，A值40.08;

2.阳性对照：正常情况下，A值》0.50;

3.临界值(C.O)=阴性对照均值x2.8。

阴性对照孔A值＞0.08应舍弃、如所有阴性对照孔A值均＞0.08,

试验应重做。阴性对照孔A值＜0.05时以0.05计算。

标本A值S/C.O)1者为阳性。

标本A值S/C.OC1为阴性。

抗HIV(1+2)测定

在选用测定方法时、需根据自身条件和需要加以综合考虑、尽管

所述方法灵敏度特异性都很高、但在实际工作中，假阳性仍然可见,

为达到最佳的检测目的，一般需采用下列程序。

ELISA,金标等过筛试验阴性排除后；阳性者应以同类另一方法

或另类某种方法重新过筛试验，以排除假阳性，若仍为阳性，可用免

疫印迹法证实，再次排除假阳性，经重复检测均为阳性者，方可慎重

发出阳性结果报告。

【方法】

1.筛选：ELISA法、金标法、明胶凝集试验、免疫荧光法和乳

胶凝集试验等。

试剂：必须使用经中国药品生物制品检定所检定并贴有“中国药

品生物制品检定所检定合格”防伪标签的商品试剂盒。

2.确认：免疫印迹法和放射免疫沉淀试验。

试剂：使用经国家卫生部正式批准的快速免疫转印试剂盒和相应

的放射免疫沉淀试剂盒。

【操作】

按试剂说明书要求进行。

【结果判断】

按试剂说明书要求判定。

【附注】

1.判断是否感染HIV应十分慎重，对可能是阳性的样品还应结

合其它测定项目的结果和临床情况作出判断。

2.金标法必须使用当天新鲜血清才能保证最佳结果，否则易产

生非特异性显色反应。血浆必须去掉纤维蛋白，否则易造成膜过滤阻

塞。

肥达氏反应

【方法】

大孔反应凝集试验。

【试剂】

试剂市售。

【操作】

按试剂盒内使用说明书执行，在大孔反应板内进行试验，较传统

的肥达氏反应结果更清晰，每次试验均须做阴、阳性对照管（孔）。

【结果判断】

为便于观察，每10ml稀释菌液中（70亿菌/ml）,加入20.Og/L

美兰溶液5ul（微升），结果更清晰。

凝集价0>1:80、H>1:160才有诊断价值。但近斯接种过伤寒,

付伤寒菌苗者其凝集价亦可升高。

抗“0”抗体属IgM,出现早、维持时间仅数日，抗H抗体属IgG,

出现较晚、但维持时间可达数年。

抗链球菌溶血素0（ASO）检查

【方法】

胶乳凝集法。

【试剂】

市售成套商品试剂。

【操作】

按试剂说明书进行。

1.A、S、0胶乳加入后，轻轻摇动到指定的时间应立刻纪录结

果。再放置一段时间后出现的清晰凝集不列为阳性。室温降低10℃,

在胶乳试剂加入后应延长反应时间2min,室温升高10℃应缩短反应

时间2min。阳性质控血清应在本说明书指定的时间内出现清晰凝集,

但不能将阳性质控血清出现凝集的时间视为判断结果的时间界限。

2.溶血、脂血、高胆红素血症、高胆固醇血症、类风湿因子阳

性以及标本被细菌污染都不会影响本试验。

3.胶乳试剂不可冰冻，放置在4C冰箱保存，有效期可达1年,

但用前必须摇匀。

4.本试验用的滴管口径以及装胶乳试剂的塑料瓶的口径应同样

大小，保证液滴大小一致。

梅毒血清学检查

快速血浆反应素环状卡片法（RPR）

【试剂】

本试验有商品试剂盒。RPR抗原悬液呈均匀，灰黑色无杂质。6~

10℃暗处可保存1年。

【操作】

按试剂盒说明书进行。

【结果判断】

阴性标本不凝集，阳性标本反应液中可见明显黑色凝集颗粒，根

据颗粒大小报告+-++++。如有需要，阳性标本也可在RPR卡片上将血

清用生理盐水作1:2一1:32稀释后，按定性试验方法做半定量试验。

【附注】

1.此试验的最佳温度为23~29C,温度过高，反应性可能增强。

温度过低，灵敏度可能下降；

2.观察结果要及时；

3.被检血清中若反应素过多，有可能抑制“反应性”，而出现前

带现象。半定量试验有助于澄清此问题。因此呈粗糙非反应性结果的

血清宜再做半定量试验。

甲苯胺红不加热血清法（TRUST）

【试剂】

本试验有商品试剂盒。

【操作】

按说明书进行。

【结果判断】

按说明书进行，根据粉红色凝块有无及大小报告-、土、+―++++。

【附注】

1.待测血清及TRUST抗原于测定前放室温平衡（23〜29。；

2.阳性反应需做半定量试验，操作方法同RPR半定量试验。

螺旋体血球凝集法（TPHA）

【试剂】

市售成套试剂。

【操作】

按试剂说明书进行。

【结果判断】

定性试验：将标本最终稀释成1:40与未致敏的红细胞反应，作

为阴性对照；同样将该标本最终稀释成1:80与致敏的红细胞反应，

如出现明显之凝集现象为阳性。对出现阳性的标本，可进一步作1:5、

1:10……的倍比系列稀释进行半定量试验，以呈现明显凝集反应的最

高稀释倍数作为该血清样本的凝集效价。

【附注】

1.以致病的梅毒螺旋体致敏明胶粒子代替红细胞的TPPA试验与

TPHA试验一样，在试验的原理，操作及结果的判断方面基本一致。

TPPA已有商品化试剂盒供应；

2.梅毒血清学检查，传统的康一华氏反应已被陶汰，目前常用

的方法除上述不加热血清反应素试验（USR）、RPR、TRUST、TPHA、TPPA

外，还有性病研究试验VDRL及荧光螺旋体抗体吸收试验FTA-ABS等；

其中的FTATBS、TPHA、TPPA,属特异性的密螺旋体抗原试验，而VDRL、

USR、RPR、TRUST则属非特异性的脂类抗原试验，实际应用时常以其

一种作为筛选检查，而用FTA-ABS或TPHA或TPPA作证实试验。

肿瘤免疫学检查

甲胎蛋白（AFP）测定

【方法】

ELISA法。

【试剂】

本试验有商品试剂盒。

【操作】

按试剂说明书进行。

【结果判断】

1.定性：显色为阳性，无色为阴性；

2.定量：酶标仪测定，测49211nl波长吸光度，查标准曲线（吸

光度为纵坐标，AFP含量为横坐标），得出标本中AFP含量，乘以稀

释倍数后发出定量报告。

【附注】

操作中有关要求可参考乙肝两对半试验。定量的试剂目前以进口

的ELISA法AFP测定试剂盒为佳。此外，也可用放射免疫（双抗体）

法对AFP进行定量测定，操作按市售放免试剂盒说明书进行。

自身抗体一类风湿因子(RF)测定

类风湿性关节炎和红斑狼疮患者的血清中常存在高滴度的RF,

国内普通使用胶乳凝集试验进行测定。此外，也可用双抗原夹心ELISA

法测定，其测定的操作程序按市售试剂盒进行。

【方法】

胶乳凝集试验。

【试剂】

市售试剂盒。

【操作】

按说明书进行。

［结果判断］

按说明书要求。

【附注】

1.每次试验必须设阴、阳对照；

2.RF胶乳试剂