药用菌茯苓菌种生产技术规程VIP

1DBXX/XXXXX—XXXX药用菌茯苓菌种生产技术规程本标准规定了药用菌茯苓菌种生产技术规程中的术语和定义，菌种生产，母种生产，原种生产，栽培种生产，菌种质量标准与检验，标签、标志、包装、运输和贮存等要求。本标准适用于江西省内茯苓菌种的规范化生产。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB1354-2008小麦GB1886.239-2016食品安全国家标准食品添加剂琼脂GB3095-2012环境空气质量标准GB5749-2006生活饮用水卫生标准GB/T191-2008包装储运图示标志GB/T5483-2008天然石膏GB/T10463-2008玉米粉GB/T12728-2006食用菌术语GB/T20413-2017过磷酸钙GB/T20880-2018食用葡萄糖NY5099-2002无公害食品食用菌栽培基质安全技术要求NY/T119-1989麦麸NY/T528-2010食用菌菌种生产技术规程NY/T1846-2010食用菌菌种检验规程NY/T2798.5-2015无公害农产品生产质量安全控制技术规范第5部分：食用菌NY/T5010-2016无公害农产品种植业产地环境条件《食用菌菌种管理办法》（2015年修正版）3术语和定义下列术语和定义适用于本文件。3.1茯苓Poria多孔菌科真菌茯苓Poriacocos(Schw.)Wolf的菌核，供药、食两用。3.2菌种culture生长在适宜基质上具结实性的菌丝纯培养物，包括母种、原种和栽培种。3.3母种stockculture经各种方法选育得到的具有结实性的菌丝体纯培养物及其继代培养物，也称一级种、试管种。2DBXX/XXXXX—XXXX3.4种源母种provenanceculture从具备相应技术资质的供种单位购买的试管母种。3.5生产母种cultivateculture从试管母种转接得到的菌种。3.6原种motherspawn由母种移植、扩大培养而成的菌丝体纯培养物，也称二级种。3.7栽培种spawn由原种移植、扩大培养而成的菌丝体纯培养物。栽培种只能用于栽培，不可再次扩大繁殖菌种。也称三级种。3.8种苓mothersclerotium经精心培育、选择，用于分离茯苓母种的优质鲜茯苓菌核。3.9菌龄cellages菌种菌丝体的生长时间，即菌种自接种至使用之间的间隔时间。4菌种生产4.1生产条件要求从事茯苓菌种生产和经营的人员、单位、生产场地环境、厂房设置布局、设施设备和技术条件应符合《食用菌菌种管理办法》和NY/T528-2010、NY/T2798.5-2015无公害农产品生产质量安全控制技术规范第5部分：食用菌、NY/T5010-2016无公害农产品种植业产地环境条件、GB3095-2012环境空气质量标准的规定。4.2种源要求从选育单位或具备相应技术资质的供种单位引种；或从明确种源的产区中选用优质鲜茯苓菌核分4.3原料要求4.3.1母种马铃薯新鲜、无发芽、无病斑、无霉烂。选用的葡萄糖应符合GB/T20880-2018的要求，琼脂应符合GB1886.239-2016的要求。4.3.2原种选用的麦粒应符合GB1354-2008的要求，过磷酸钙应符合GB/T20413-2017的要求，石膏粉应符合GB/T5483-2008的要求。松木屑应新鲜且粗细均匀，不含有害物质，符合NY5099-2002无公害食品食用菌栽培基质安全技术要求，使用前过筛除去杂质。4.3.3栽培种3DBXX/XXXXX—XXXX选用的玉米粉应符合GB/T10463-2008的要求，麦麸应符合NY/T119-1989的要求。松木屑应新鲜且粗细均匀，不含有害物质，符合NY5099-2002无公害食品食用菌栽培基质安全技术要求，使用前过筛除去杂质。4.3.4容器容器应符合NY/T528-2010中的要求。4.3.5水水应符合GB5749-2006的要求。5母种生产5.1种苓的选择5.1.1在明确种源的产区，经提前精心培育而成的优质鲜茯苓菌核。5.1.2处于旺长期，个体较大，重量﹥2.5kg；近球形，外皮较薄，呈黄棕色或淡棕色，有明显的白色或淡棕色裂纹。5.1.3切开或掰开后，内部苓肉色白，气味浓郁，有乳白色汁液或淡青色浆汁渗出。5.1.4外皮完整，无虫咬损伤，无腐烂异味。5.1.5种苓选定后要及时进行分离使用，若需短暂储存或运往异地使用，必须埋于湿沙中储存，以防干燥。5.2培养基5.2.1配方详见附录A。5.2.2制作将马铃薯去皮洗净，切片放入容器，加水800mL，煮沸30min，取滤液加入20g琼脂，煮至全部溶化，再加入葡萄糖20g,搅拌溶化，补足水分至1000mL，分装于18mm×200mm规格试管中，塞上棉塞。5.2.3灭菌将配制的母种培养基置于高压灭菌锅内，用0.1030MPa压力（温度121℃)灭菌30min。待冷却至55~60℃时，放斜，制成斜面培养基，48h后无微生物检出的视为合格培养基。5.3组织分离5.3.1分离前准备严格按照无菌操作方法对无菌室或无菌箱内的环境、工具以及移入的培养基试管等进行表面消毒，操作人员按照无菌操作标准着装、手部消毒。将选好的种苓用清水冲至无泥沙，稍晾干表面后，迅速移入无菌室或无菌箱操作台面上，70%酒精冲洗，再用无菌水冲洗6～8遍。待种苓表面稍干，备用。5.3.2接种4DBXX/XXXXX—XXXX用接种刀从种苓中央切浅口，顺浅口掰开。用灭菌的接种刀或接种铲在近种苓皮内侧2cm～3cm处，挑取0.5cm见方，0.1cm厚的白色苓肉，接种于试管斜面培养基中部。5.3.3将分离后的试管贴上标签，内容应符合《食用菌菌种管理办法》的相关规定。5.4种源母种接种按照无菌操作流程，1支种源母种可扩繁20～30支生产母种。接种后的试管贴上标签，内容应符合《食用菌菌种管理办法》的相关规定。5.5培养5.5.1将试管置于23℃~25℃恒温培养箱中培养5～7d。培养过程中应经常观察菌丝生长情况，凡是菌丝长速慢、稀疏、不均匀、发黑、污染者，应及时剔出。5.5.2苓肉分离的母种可转管纯化1次。6原种生产6.1培养基6.1.1配方详见附录A。6.1.2制作将麦粒精选，除去瘪粒和杂质，洗净，置于温水中浸泡5h，取出，煮至麦粒无白芯后摊开放置于干净台面上，晾至表面半干，加入过磷酸钙和石膏粉，混匀，再加入一半松木屑混匀，装于500mL原种瓶(袋)中，装至瓶（袋）肩处。将另一半松木屑稍润湿（含水率20%）后覆盖于混合培养基表面，厚约0.5cm。擦净瓶（袋）内、外壁沾附物，盖塞或扎口。6.1.3培养基灭菌将配制的原种培养基置于高压灭菌锅内，用0.1030MPa压力（温度121℃)灭菌120min，或用流通蒸汽（温度100℃)灭菌8～10h，冷却后放置干净处备用。6.2接种严格按照无菌操作方法，挑取长宽各0.5cm左右的母种块（连同培养基），移入原种培养基上端中央，与培养基料接触，随即盖塞或扎口。6.2.1接种后的原种瓶（袋）贴上标签，内容应符合《食用菌菌种管理办法》的相关规定。6.3培养6.3.1接种后的原种瓶（袋）放置于25℃~28℃培养室中培养。菌丝生长至瓶（袋）内三分之二处时，移入10℃~23℃的培养室内继续培养。6.3.2培养过程中应经常观察菌丝生长情况，凡出现菌丝长速慢、稀疏、不均匀、发黑、污染等异常现象的瓶（袋），应及时剔出，灭菌处理。6.3.3每一批次的原种生产完成后，均应进行清场，做好环境清洁和清场记录。5DBXX/XXXXX—XXXX7栽培种生产7.1培养基7.1.1配方详见附录A。7.1.2制作将蔗糖溶于水中，放入松木屑、玉米粉、麦麸、过磷酸钙、石膏粉混合拌匀，以紧握培养基料指间稍见渗水为度（含水率40%~45%）。放置30min，待水分均匀渗入料后，装入12╳24规格聚丙烯袋中，每袋装料400～450g，稍微压实（上紧下松），擦净袋口内外壁沾附物，封口。7.1.3灭菌将配制的栽培种培养基置于高压灭菌锅内，用0.1030MPa压力（温度121℃)灭菌120min，或用流通蒸汽（温度100℃)灭菌12～18h，冷却后放置干净处备用。7.2接种7.2.1严格按照无菌操作方法，将原种瓶（袋）打开，除去表面的菌膜及培养物，用接种铲或接种匙取4~6g略加捣碎的菌种迅速移入栽培种培养基中央，封口。7.2.2接种后的菌袋贴上标签，内容应符合《食用菌菌种管理办法》的相关规定。7.3培养7.3.1将接种后的菌种袋放置于25℃~28℃培养室中培养。菌丝向下生长至袋内培养料2～3cm处时，可移入10℃~23℃的培养室内继续培养25～30d，菌丝可基本长满。7.3.2培养过程中应经常检查培养室温度、二氧化碳浓度以及菌丝生长情况，凡是出现菌丝长速慢、稀疏、不均匀、发黑、污染等异常现象的菌袋，应及时剔出，灭菌处理。7.3.3菌丝长满料后，逐一检查菌种质量，合格品装入专用包装袋内，根据批号归类储存。7.3.4每一批次的栽培种生产完成后，均应进行清场，做好环境清洁和清场记录。8菌种质量标准与检验8.1母种质量标准与检验8.1.1质量标准8.1.1.1菌龄﹤21d。8.1.1.2菌丝色白、均匀、致密、粗壮、茯苓特异香气浓郁。8.1.1.3菌丝体表面可见晶莹的露滴状分泌物。8.1.1.4菌种试管完整无损，棉塞严密，无杂菌污染。8.1.2检验6DBXX/XXXXX—XXXX8.1.2.1按照质量标准要求，在自然光下采取目测方法，培养过程中，每隔2d观察各试管菌种生长速度及菌丝形态。8.1.2.2凡表现异常，特别是长速慢、菌丝稀疏、不均匀、发黑、污染者应及时剔出。8.1.2.3菌丝长满斜面后，按照上述质量标准逐支检查，合格者放置4℃冰箱内保存。8.2原种质量标准与检验8.2.1质量标准8.2.1.1菌龄25～40d。8.2.1.2菌丝生长旺盛，洁白、均匀、致密，爬壁现象明显，有根状菌索为佳。8.2.1.3菌丝体尖端可见乳白色露滴状分泌物，茯苓特异香气浓郁。8.2.1.4菌种瓶（袋）完整无损，无杂菌污染。8.2.2检验8.2.2.1按照质量标准要求，在自然光下采取目测方法，培养过程中经常观察各菌种瓶（袋）内菌丝生长情况。8.2.2.2凡是发现菌丝生长速度明显缓慢，菌丝稀疏、不均、地图斑、发黑、污染者，应及时剔出。8.2.2.3菌丝在瓶（袋）内长满后，按照上述质量标准逐瓶（袋）检查，合格者方可转入下一道工序，作为茯苓栽培种生产的种源。8.3栽培种质量标准与检验8.3.1质量标准8.3.1.1菌龄30～45d。8.3.1.2菌丝洁白致密，生长均匀，布满菌袋内。8.3.1.3菌丝体尖端可见晶莹露滴状分泌物，茯苓特异香气浓郁。菌袋完整无破损，菌丝充满菌种袋（满料），手握菌种袋，感觉坚实，无松散，无软化。菌丝无发黄、发黑、地图斑、无软化、无子实体出现、无杂菌污染。8.3.2检验8.3.2.1按照质量标准要求，在自然光下采取目测法，培养过程中经常观察各菌种袋内菌丝生长情况。8.3.2.2发现菌丝体发黄、发黑、不均匀、地图斑、杂菌污染者应及时剔出。8.3.2.3逐一检查各菌种袋，应符合上述质量标准，且菌丝长满菌种袋（满料），菌丝无倒伏现象，手握菌种袋，感觉坚实，无松散，无软化。8.4各级菌种应留样备查，留样数量为每批次3～5支（瓶、袋0℃~4℃贮存，贮存至正常生产条件下该批菌种生产的栽培袋出菇采收完毕。9标签、标志、包装、运输和贮存9.1标签、标志7DBXX/XXXXX—XXXX9.1.1产品标签每支（瓶、袋）菌种应贴有标签，应清晰注明以下信息：a)产品名称（菌种名称、菌株代号、类别）；b)生产单位；c)接种日期；d)执行标准。9.1.2包装标签菌种包装应贴有标签，应清晰注明以下信息：a)产品名称（品种名称、菌株代号、类别）；b)保质期、贮存条件；c)数量；d)执行标准；e)菌种生产经营许可证编号。9.1.3包装储运图示按GB/T191-2008规定，应注明以下图示标志：a)小心轻放标志；b)防水、防潮、防冻标志；c)