单克隆抗体(用)

专题2细胞工程动物细胞融合与单克隆抗体学习目标1.通过阅读课文、图片，能说出动物细胞融合的原理、方法、过程、意义2.通过回忆抗体的产生过程，能理解单克隆抗体的概念3.通过小组合作学习，教师提供的资料分析自主构建单克隆抗体的制备过程4.通过阅读课本和资料，能说出单克隆抗体的优点与应用一、动物细胞融合活动一：阅读课本P52思考与讨论：1.诱导动物细胞融合的方法？2.动物细胞融合体现了细胞膜的什么特性？3.为什么灭活的病毒能作为诱导剂？（参考生物技术资料卡）4.不灭活的病毒能作为诱导剂吗？5.动物细胞融合的结果是什么？6.融合后一定是杂交细胞吗？7.杂交细胞遗传物质有什么特点？8.动物细胞融合的意义？最大的应用？细胞膜的流动性灭活病毒、PEG、电激等融合后的细胞进行有丝分裂，形成完整的杂交细胞1.诱导的方法？6.融合后细胞的类型？7.AB杂交细胞遗传物质有什么特点？三种AA、AB、BB（A、B）含两种生物的遗传物质1.1动物细胞融合过程2.原理？ABA细胞B细胞人工诱导1.2动物细胞融合的概念杂交细胞动物细胞融合（也称细胞杂交）：是指两个或多个细胞融合形成一个单核细胞的过程。主要用于制备单克隆抗体获得杂种植株主要用途物理、化学方法（同左）灭活的病毒物理（离心、振动、电刺激）化学（聚乙二醇）诱导方法使细胞分散后诱导细胞融合去除细胞壁后诱导原生质体融合

细胞融合的方法细胞膜的流动性细胞膜的流动性、植物细胞全能性细胞融合的原理动物细胞融合植物体细胞杂交比较项目植物体细胞杂交与动物细胞融合的比较1.3动物细胞融合技术的意义和应用突破有性杂交方法的局限，使远缘杂交成为可能最主要用途：制造单克隆抗体强调：效应B细胞是能够产生抗体的B淋巴细胞，下文将其简称为B淋巴细胞抗体：能够与抗原发生特异性结合的免疫球蛋白。温故知新1.抗体是什么？2.抗体如何产生？3.抗体主要分布在哪里？能产生抗体的细胞是浆细胞（即效应B细胞）。4.如果一个农夫被毒蛇咬了，如何获得相应的抗体来治疗？抗体的传统生产方法抗原反复注射从动物的血清中分离抗体该法制备抗体的缺点：产量低、纯度低，且抗体的特异性差、灵敏度低。如何解决这个问题呢？单克隆抗体！2.1单克隆抗体的定义：克隆单个B淋巴细胞所产生的化学性质单一、特异性强的抗体称为单克隆抗体。

单：一个B淋巴细胞克隆：该细胞大量增殖为相同的细胞群抗体：该细胞群产生的特异性抗体。二、单克隆抗体一个B淋巴细胞只分泌一种特异性抗体骨髓瘤细胞能无限增殖杂交瘤细胞动物细胞培养技术设计方案：动物细胞融合技术单克隆抗体既能迅速大量增殖，又能的产生专一抗体1975年英国科学家米尔斯坦和柯勒的实验活动二：阅读课本P53-54思考与讨论:1.为什么要对小鼠进行注射特定的抗原？2.选择了哪两种细胞进行细胞融合？3.为什么选这两种细胞？4.细胞融合后获得几种类型的融合细胞？5.有几种杂交瘤细胞？6.两次筛选的目的？7.如何大量生产单克隆抗体？2.2单克隆抗体的制备过程用抗原免疫小鼠骨髓瘤细胞的培养B淋巴细胞骨髓瘤细胞融合多种细胞获得产生相应抗体的B细胞产生专一抗体无限增殖BB

、B瘤、瘤瘤

（B、瘤）由于培养基中缺乏相应的营养物，骨髓瘤细胞死亡B淋巴细胞培养几天后死亡杂交瘤细胞置于选择培养基上培养（一选）选择性培养基：只有杂交瘤细胞才能存活杂交瘤细胞特点：既能产生特异性抗体，又能大量增殖。多孔细胞培养板阳性克隆的筛选和克隆化培养用培养液稀释（二选）：选能产生所需专一抗体的杂交瘤细胞注射到小鼠体内体外培养由单个杂交瘤细胞通过克隆，所产生的化学性质单一、特异性强的抗体。单克隆抗体活动三、用以下文字和箭头来构建单克隆抗体的制备过程已免疫的B淋巴细胞、骨髓瘤细胞、BB细胞，B瘤细胞，瘤瘤细胞、杂交瘤细胞、产生专一抗体的杂交瘤细胞、体外培养、体内培养、单克隆抗体、融合、筛选你学会了吗？过程：B淋巴细胞骨髓瘤细胞融合B-B细胞B-瘤细胞瘤-瘤细胞选择性培养基筛选杂交瘤细胞（B-瘤细胞）克隆化培养抗体检测产生专一抗体的杂交瘤细胞体外培养小鼠腹腔内增殖单克隆抗体2.3单克隆抗体的应用诊断试剂——最广泛应用准确、高效、简易、快速单克隆抗体最主要的优点：特异性强，灵敏度高，并能大量制备。用抗人绒毛膜促性腺激素单克隆抗体做成的“早早孕诊断试剂盒”，灵敏度很高，在妊娠第8天就可以做出诊断，比原来的诊断方法提前了10天左右，可以避免孕妇在不知道妊娠的情况下因服用药物而对胎儿造成不利影响。该方法检测的准确率在90％以上。“生物导弹”＝单克隆抗体＋药物

单抗导向，药物为弹头治疗疾病和运载药物主要用于治疗癌症治疗，单克隆抗体作为载体，运载抗癌药物，形成“生物导弹”，准确杀伤癌变细胞。两个过程动物细胞培养过程单克隆抗体制备过程三个“一”一个诱导细胞融合的新方法

－－灭活的病毒一个新细胞－－杂交瘤细胞一个优势－－单克隆抗体特异性强、灵敏度高，可大量制备本节小结重点特点：既能迅速大量繁殖，又能产生专一的抗体1.动物细胞融合最常用的诱导方法是（）A.离心

B.灭活的病毒C.电刺激

D.振动2.动物细胞融合的作用中最重要的是（）A.克服远源杂交不亲和B.制备单克隆抗体C.培育新物种

D.生产杂种细胞BB课堂评价评价方向：学习目标1动物细胞融合的方法、意义3.单克隆抗体是由下列哪种细胞产生的（）B淋巴细胞

B．T淋巴细胞C．骨髓瘤细胞D．杂交瘤细胞课堂评价D评价方向：学习目标2单克隆抗体的概念4.科学家用小鼠骨髓瘤细胞与某种细胞融合，得到杂交细胞，经培养可产生大量的单克隆抗体，与骨髓瘤细胞融合的是（）A.经过免疫的B淋巴细胞C.经过免疫的T淋巴细胞B.不经过免疫的T淋巴细胞D.不经过免疫的B淋巴细胞A课堂评价评价方向：学习目标3单克隆抗体制备的过程课堂评价5．下列关于单克隆抗体的叙述，错误的是A.特异性强、灵敏度高

B.单克隆抗体就是“生物导弹”C.单克隆抗体可用于疾病诊断和治疗

D.生产单克隆抗体需要利用动物细胞培养技术

B评价方向：学习目标4单克隆抗体的优点与应用谢谢因为每一种B淋巴细胞可以产生一种抗体，人体有几百万个B淋巴细胞，也就是可以产生几百万中抗体。虽然你注射了某种抗原，但是产生对应的抗体也只有其中的一个B淋巴细胞。所以我们用传统方法从动物血清里面提取的抗体往往特异性差，纯度低。6、（1）单克隆抗体是指

。（2）制备单克隆抗体的步骤：①将__________注入小鼠体内，从小鼠脾脏中获得淋巴细胞，其中至少1个淋巴细胞带有抗该抗原的抗体。②将步骤①获得的B淋巴细胞与步骤②培养的骨髓瘤细胞在_________________的诱导下融合。③将诱导后产生的多种细胞，放在_______培养基的多孔培养板上培养，筛选。④这样获得的杂交瘤细胞既具有B淋巴细胞_____________的能力，又具有________________的本领。⑤检测和分离带有抗X抗体的阳性细胞，培养板中每孔放一个细胞进行培养。⑥将阳性细胞进行增殖，从而制备出大量抗该抗原的单克隆抗体。化学性质单一，特异性强的抗体

抗原

聚乙二醇选择性

无限增殖

产生专一抗体（3）大量制备单克隆抗体的方法主要有两种：①体外培养法，可获得10μg/mL的抗体；②动物体内诱生法可获得5~20mg/mL的抗体。你选择的方法及原因是

。（4）用本法制备出的单克隆抗体仍具有局限性，因为它是用小鼠的_______细胞制备的，其化学本质是___________，应用于人体，会作为

产生

，解决这个问题的方法是_____________________________。大量生产选①，小规模生产选②效应B蛋白质异物免疫反应采用人的效应B细胞制备15、右图为某同学根据杂交瘤技术的方法，设计的生产破伤风杆菌抗体的实验方案。据图回答：

（1）该方案能达到预期效果吗？

。原因是

______________________________________________。

（2）图中②为

过程，常用

作为诱导剂。该