亚铁氧化酶（Hephaestin,HP）试剂盒说明书_第1页
亚铁氧化酶（Hephaestin,HP）试剂盒说明书_第2页
亚铁氧化酶（Hephaestin,HP）试剂盒说明书_第3页
亚铁氧化酶（Hephaestin,HP）试剂盒说明书_第4页
全文预览已结束

下载本文档

版权说明：本文档由用户提供并上传，收益归属内容提供方，若内容存在侵权，请进行举报或认领

文档简介

第第页亚铁氧化酶（Hephaestin,HP）试剂盒说明书亚铁氧化酶（Hephaestin,HP）试剂盒说明书微量法100管/48样注意：正式测定前务必取23个预期差别较大的样本做猜测定测定意义：Hephaestin（HP）作为铜蓝蛋白的同系物,是近年来发现的铁转运蛋白亚铁氧化酶，HP属亚铁氧化酶家族成员,具有亚铁氧化酶的活性,参加体内铁代谢。HP的表达可受铁、铜及锌等金属离子的调整。HP催化Fe2+氧化生成Fe3+，在介导铁的跨膜转运中有紧要作用。测定原理：HP催化Fe2+氧化为Fe3+，Fe2+和ferrozine反应显色，在560nm下有特征吸光值。通过测定Fe2+的减少速率可测得亚铁氧化酶的活性。自备用品：酶标仪、台式离心机、可调式移液器、96孔板、研钵、冰和蒸馏水。试剂构成和配制：试剂一：液体60mL×1瓶，4℃保管；试剂二：液体1.5mL×1瓶，4℃保管；试剂三：液体11mL×1瓶，4℃避光保管。粗酶液提取：依照组织质量（g）：水（mL）为1：5～10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL蒸馏水），进行冰浴匀浆。10000g4℃离心10min，取上清，置冰上待测。测定步骤：1.酶标仪预热30min以上，调整波长至560nm。2.在96孔板中加入下列试剂试剂名称（μL）测定管对照管试剂一5050试剂二1010样本1010蒸馏水3030试剂三混匀，40℃静置30min100试剂三100混匀，立刻测定A对照和A测定，ΔA=A对照A测定。（每个测定管需设一个对照管）HP活性计算:标准曲线：y=8.2135x0.0006，R2=0.9998；（x为标准品浓度，μmol/mL；y为吸光值ΔA）（1）按样本质量计算单位定义：每g样本每分钟氧化1nmolFe2+定义为一个酶活力单位。HP（nmol/min/g鲜重）=（△A+0.0006）÷8.2135×V总÷T÷（W×V样÷V样总）×1000=40.58×（△A+0.0006）÷W（2）按样本蛋白浓度计算单位定义：每mg蛋白每分钟氧化1nmolFe2+定义为一个酶活力单位。HP（nmol/min/mgprot）=（△A+0.0006）÷8.2135×V总÷T÷（Cpr×V样）=40.58×（△A+0.0006）÷CprV总：反应体系体积，0.1mL；V样：加入样本体积0.01mL；V样总：加入提取液体积，1mL；T：反应时

人人文库> 全部分类> 应用文书 > 规章制度

温馨提示

  • 1. 本站所有资源如无特殊说明，都需要本地电脑安装OFFICE2007和PDF阅读器。图纸软件为CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.压缩文件请下载最新的WinRAR软件解压。
  • 2. 本站的文档不包含任何第三方提供的附件图纸等，如果需要附件，请联系上传者。文件的所有权益归上传用户所有。
  • 3. 本站RAR压缩包中若带图纸，网页内容里面会有图纸预览，若没有图纸预览就没有图纸。
  • 4. 未经权益所有人同意不得将文件中的内容挪作商业或盈利用途。
  • 5. 人人文库网仅提供信息存储空间，仅对用户上传内容的表现方式做保护处理，对用户上传分享的文档内容本身不做任何修改或编辑，并不能对任何下载内容负责。
  • 6. 下载文件中如有侵权或不适当内容，请与我们联系，我们立即纠正。
  • 7. 本站不保证下载资源的准确性、安全性和完整性, 同时也不承担用户因使用这些下载资源对自己和他人造成任何形式的伤害或损失。

最新文档

评论

0/150

提交评论