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第第页水土中总磷酸盐试剂盒说明书水土中总磷酸盐试剂盒说明书微量法100T/96S注意：正式测定之前选择23个预期差异大的样本做预测定。测定意义：总磷酸盐包含正磷酸盐、偏磷酸盐、焦磷酸盐、多聚磷酸盐等各种磷酸盐的形式，反应了水土中的磷酸盐水平，是一个水质和土壤质量评价的重要指标。测定原理：在酸性溶液中，在分解剂和高温条件下，将无机磷酸盐和有机磷酸盐水解成正磷酸盐，正磷酸盐可与钼酸铵反应成磷钼酸，在还原剂存在时被还原为磷钼蓝，在710nm处有特征吸收峰。需自备的仪器和用品：天平，震荡仪、常温离心机、酶标仪、96孔板、蒸馏水。试剂组成和配制：试剂一：液体20mL×1瓶，4℃保存。试剂二：液体40mL×1瓶，4℃保存。试剂三：液体4mL×1瓶，4℃避光保存。试剂四：粉剂×1瓶，4℃保存。临用前加4mL蒸馏水充分溶解，然后将试剂五全部加入试剂四中充分混匀。试剂五：液体×1支，4℃保存。样品处理：1.水样：按照水样体积（mL）：试剂一体积（mL）：试剂二体积（mL）为10:1:2的比例（建议取1mL水样，加入100μL试剂一和200μL试剂二）95℃沸水浴30min，冷却后待测。2.土样：按照土壤质量（g）：蒸馏水体积(mL)：试剂一体积（V）：试剂二体积（V）=1：10:1:2（建议称取约0.1g土样，加入1mL蒸馏水，再加入100μL试剂一和200μL试剂二），95℃沸水浴振荡30min，10000g，25℃离心10min，取上清液待测。测定操作表：空白管测定管样本（μL）40试剂三（μL）4040试剂四（μL）4040蒸馏水（μL）12080充分混匀，25℃静置10min，于96孔板测定710处吸光值A，分别记为A空白管和A测定管，△A=A测定管A空白管计算公式：标准曲线：y=0.0237x+0.0016，R2=0.9989；x为PO4浓度μg/mL，y为吸光值△A。1.水样：总磷酸盐含量（μg/mL）=(△A0.0016)÷0.0237×V样÷（V样÷V样总）=54.8×(△A0.0016)2.土样：总磷酸盐含量（μg/g）=(△A+0.0063)÷0.0489×V样÷（W×V样÷V样总）=54.8×(△A+0.0063)÷WV样：加入样本体积；0.04mL；V样总：样本总体积，1.3mL；W

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