2.2.1-动物细胞培养和核移植技术课件

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烧伤病人的治疗通常是取烧伤病人的健康皮肤进行自体移植，但对于大面积烧伤病人来讲，健康皮肤很有限，请同学们想一想如何来治疗该病人？最基础的是

——动物细胞培养技术动物细胞工程常用的技术：动物细胞培养动物细胞核移植动物细胞融合单克隆抗体等2.2.1动物细胞培养和核移植技术动物细胞培养学习目标：1、简述动物细胞培养的过程、条件。2、了解动物细胞培养应用。3、对比说出动物细胞培养与植物组织培养原理、条件、结果、培养目的自主阅读P44第5段，思考下列问题：1、什么叫动物细胞培养（animalcellculture)？2、动物细胞培养的原理是什么？一、动物细胞培养1、概念：从动物机体中取出相关组织，将它们分散成单个细胞，然后放在适宜的培养基中，让这些细胞生长和增殖。原理：细胞增殖如何进行动物细胞培养?放入二氧化碳培养箱中培养动物细胞培养过程示意图

结合问题，阅读书本，四人一组，讨论写出动物细胞培养的流程图。学习活动一：合作学习（结合问题思考流程）1、为何动物细胞培养过程将组织分散成单个细胞呢？2、如何将动物组织分散成单个的细胞？3、胰蛋白酶的作用是什么？由此可说明细胞间的物质主要是什么成分？4、培养瓶或培养皿的内表面为何要光滑、无毒？5、培养瓶中的细胞培养到什么时候就不再分裂、增殖？细胞贴壁接触抑制

(contactinhibition)原代培养：通常将直接从动物体内取出的动物组织消化后的初次培养称为原代培养。传代培养：原代培养的细胞出现接触抑制后，贴满瓶壁的细胞需要重新用胰蛋白酶等处理，然后分瓶继续培养，让细胞增殖。这样即为传代培养。分类：10代内的细胞；10-50代；50代以后。有关概念：1、选用组织时，一般用动物胚胎或幼龄个体的器官或组织做培养材料，而不用老龄动物的，这是为什么？

因为幼龄组织或器官上的细胞增殖能力强，有丝分裂旺盛，容易培养。老龄动物的细胞则相反。学习活动二：寻根问底，加深巩固2、胰蛋白酶处理组织时要注意什么问题？能够用胃蛋白酶代替吗？

控制好消化时间，太长会消化细胞膜上的蛋白质

不能，因为两者的最适PH不同，而正常组织细胞的生存环境与胰蛋白酶的最适PH较接近.学习活动二：寻根问底，加深巩固3、动物细胞培养能否最终培养成新个体？

不能，动物细胞培养只能使细胞数目增多，不能发育成新的动物个体学习活动二：寻根问底，加深巩固动物胚胎或幼龄动物的组织、器官胰蛋白酶剪碎单个细胞加培养液制成细胞悬浮液原代培养动物细胞培养细胞增殖部分细胞无限传代去掉组织间蛋白动物细胞培养不能最终培养成生物体传代培养多细胞动物和人体的细胞都生活在内环境中，根据你所学的知识，认为体外培养动物细胞应该模拟内环境的哪些条件呢？问题探讨：无菌、无毒全部的营养物质适宜的温度和PH值必要的气体条件3、动物细胞培养的条件动物细胞培养条件：1、无菌、无毒的环境（添加一定量的抗生素，定期更换培养液）2、营养（葡萄糖、氨基酸、无机盐、维生素、动物血清等。）3、温度和PH36.5+（-）0.5度,7.2-7.44、气体环境：

O2和CO2（95%空气和5%CO2

）保证细胞顺利的生长增殖①生物制品的生产②用于基因工程③用于检测有毒物质④细胞的生理、病理、药理研究4、动物细胞培养技术的应用获得细胞细胞的全能性植物体培养结果或细胞产物快速繁殖、培育无病毒植株等培养目的葡萄糖、动物血清蔗糖、植物激素培养基特有成分液体培养基固体培养基培养基性质细胞增殖原理动物细胞培养植物组织培养比较项目植物细胞和动物细胞培养的比较细胞群体1．动物细胞工程常用的技术手段中，最基础的是

A.动物细胞培养B.动物细胞融合

C.单克隆抗体D.胚胎核移植

练一练~~~Let'stry!2．贴壁细胞的分裂方式具体是

A.无丝分裂B.有丝分裂

C.减数分裂D.增殖3．关于动物细胞培养的叙述，不正确的是

A.动物细胞培养前要用胰蛋白酶或胶原蛋白酶使细胞分散开来

B.通常将动物组织消化后的初次培养称为原代培养

C.动物细胞培养只能传50代左右，所培育的细胞全部衰老死亡

D.用于培养的细胞大都取自胚胎或幼龄动物的器官或组织

练一练~~~Let'stry!

根据动物细胞核仍具有全能性的特点,怎样将动物细胞的全能性表达?

再想一想利用动物体细胞核移植技术卵细胞Ａ母绵羊Ｂ母绵羊乳腺细胞细胞质细胞核细胞核移植早期胚胎卵裂C母绵羊子宫胚胎移植多莉羊分娩妊娠多莉羊的培育过程融合后的卵细胞二、动物体细胞核移植技术

1、理解核移植技术和克隆动物概念。2、掌握用动物体细胞核移植技术克隆动物过程

3、了解体细胞核移植技术的应用前景及存在的问题学习目标：核移植技术1、细胞核移植技术概念？2、利用原理？3、什么叫做克隆动物？由多利的诞生小组讨论归纳：

1、概念：将动物的一个细胞的细胞核，移入一个已经去掉细胞核的卵母细胞中，使其重组并发育成一个新的胚胎，这个新的胚胎最终发育成动物个体。

原理：动物细胞核的全能性。

用核移植的方法得到的动物称克隆动物二、动物体细胞核移植技术2、核移植的种类胚胎细胞核移植体细胞核移植（易）（难）学习活动三：思考探究1997年，美国威斯康星州的一个奶牛场有一头名叫卢辛达的奶牛，年产奶量为30.8t，创造了世界奶牛产奶量的最高记录。目前世界各国高产牛奶场的奶牛，平均每年产量为十几吨，而我国平均水平仅有3－4吨。

你能想办法繁殖卢辛达的后代，使年产奶量为30.8t吗？供体细胞培养（MⅡ卵母细胞）减数第二次分裂中期去核的卵母细胞供体细胞注入去核卵母细胞激活受体细胞，完成分裂、发育胚胎移植代孕牛子宫克隆牛3、过程：供体细胞（供核）细胞培养体细胞卵巢卵母细胞（MⅡ中期：供质）去核无核卵母细胞注入细胞融合重组细胞构建重组胚胎胚胎移植代孕母体生出与供体奶牛遗传基础相同的犊牛归纳:1.共分成两大阶段：核移植和胚胎移植2.取卵细胞作受体细胞的原因是:它是最大的细胞,易操作,它发育可直接表达性状核移植过程完成P49 讨论：①加速家畜遗传改良进程，促进优良畜群繁育②保护濒危物种，增加存活数量③克隆动物作为生物反应器，生产医用蛋白④可以作为异种移植的供体4、应用前景：⑤可以用于组织器官的移植5、存在问题：①成功率低②克隆动物存在健康问题③克隆动物食品的安全性问题存有争议小结：动物细胞培养

（概念、原理、过程、条件）

动物体细胞核移植

（概念、原理、过程）从母羊甲的体细胞中取出细胞核，注入到母羊乙的去核卵母细胞中，融合后的细胞经卵裂形成早期胚胎，再将胚胎移到另一只母羊丙的子宫内，出生的小羊大多数性状

A.难以预测 B.像甲

C.像乙D.像丙

练一练~~~Let'stry!2.下列有关克隆的叙述，不正确的是

A.生物体通过体细胞进行的无性繁殖B.将某种瘤细胞体外培养繁殖成大量细胞C.扦插和嫁接实质上也是克隆

D.将鸡的某个DNA片段整合到小鼠的DNA中练一练~~~Let'stry!1、动物细胞培养的过程：幼龄动物取动物器官和组织剪碎组织胰蛋白酶处理细胞培养单个细胞加培养液细胞悬液10代细胞原代培养50代细胞传代培养无限传代遗传物质未改变遗传物质已改变1、动物细胞培养的过程：问题1、植物组织培养过程将组织分散成单个细胞的吗？２、动物细胞培养过程将组织分散成单个细胞的吗？３、为何动物细胞培养过程将组织分散成单个细胞的呢？４、如何将动物组织分散成单个的细胞呢？５、胰蛋白酶的作用是什么呢？由此可说明细胞间的物质是什么成份？没有是成块的组织细胞靠在一起,彼此限制了细胞的生长和增殖先用剪刀剪碎,后用蛋白酶处理胰蛋白酶水解蛋白质细胞间的成份是蛋白质(胶原蛋白等)思考题６、细胞膜的主要成份是什么？７、胰蛋白酶能将细胞消化掉吗？８、既然胰蛋白酶能将细胞消化掉，那将动物组织分散成单个细胞要注意什么问题呢？９、能够用胃蛋白酶代替胰蛋白酶吗？为什么？10、动物细胞培养取材时，一般是取胚胎组织或幼龄动物的组织或器官，请解释原因？蛋白质和磷脂能注意时间的控制

不能，因为两者的最适PH不同，而正常组织细胞的生存环境与胰蛋白酶的最适PH较接近胚胎组织或幼龄动物的组织或器官分裂、增殖旺盛11、贴附性细胞培养瓶内表面为何要光滑、无毒？12、培养瓶中的细胞培养到什么时候就不再分裂、增殖？13、如果此时细胞数量并未达到人们的需求，应该怎样办？细胞株和细胞系通常是培养多少代的细胞?易于培养细胞贴壁，进行生长增殖

当贴壁细胞分裂生长到表面相互接触时，细胞分裂就会停止分裂增殖，这种现象叫接触抑制。

将贴满瓶壁的细胞用胰蛋白酶处理，然后继续增殖。这样的过程叫做传代培养思考题14、如何理解原代培养和传代培养？15、传代培养的细胞能一直传代下去吗？16、有些为何能一直传下去吗？动物细胞培养就是为了得到这些细胞吗？17、人类一般保存的是哪类细胞呢？为什么？用于植皮的细胞培养应该不多于多少代？

上述过程中，在第一培养瓶中培养就是原代培养，之后转移到其它培养瓶中培养就是传代培养不是都能发生突变，朝着癌细胞方向发展不是保存10代以内的细胞；因为10－50部分细胞的细胞核型可能发生变化，有少部分还发生突变向癌细胞方向发展；10代思考题

体细胞核移植方法生产的克隆牛是对卢辛达进行了100%的复制吗？为什么？不是，克隆动物绝大部分DNA来自供体细胞核，但核外还有少部分DNA（如线粒体DNA）来自受体卵母细胞。此外，还会受到不同环境的影响思考：长风破浪会有时，直挂云帆济沧海。努力，终会有所收获，功夫不负有心人。以铜为镜，可以正衣冠；以古为镜，可以知兴替；以人为镜，可以明得失。前进的路上，要不断反思、关照自己的不足，学习更多东西，更进一步。穷则独善其身，达则兼济天下。现代社会，有很多人，钻进钱眼，不惜违法乱纪；做人，穷，也要穷的有骨气！古之立大事者，不惟有超世之才，亦必有坚忍不拔之志。想干成大事，除了勤于修炼才华和能力，更重要的是要能坚持下来。士不可以不弘毅，任重而道远。仁以为己任，不亦重乎?死而后已，不亦远乎?心中有理想，脚下的路再远，也不会迷失方向。太上有立德，其次有立功，其次有立言，虽久不废，此谓不朽。任何事业，学业的基础，都要以自身品德的修炼为根基。饭疏食，饮水，曲肱而枕之，乐亦在其中矣。不义而富且贵，于我如浮云。财富如浮云，生不带来，死不带去，真正留下的，是我们对这个世界的贡献。英雄者，胸怀大志，腹有良策，有包藏宇宙之机，吞吐天地之志者也英雄气概，威压八万里，体恤弱小，善德加身。老当益壮，宁移白首之心；穷且益坚，不坠青云之志老去的只是身体，心灵可以永远保持丰盛。乐民之乐者，民亦乐其乐；忧民之忧者，民亦忧其忧。做领导，要能体恤下属，一味打压，尽失民心。勿以恶小而为之，勿以善小而不为。越是微小的事情，越见品质。学而不知道，与不学同；知而不能行，与不知同。知行合一，方可成就事业。以家为家，以乡为乡，以国为国，以天下为天下。若是天下人都能互相体谅，纷扰世事可以停歇。志不强者智不达，言不信者行不果。立志越高，所需要的能力越强，相应的，逼迫自己所学的，也就越多。臣心一片磁针石，不指南方不肯休。忠心，也是很多现代人缺乏的精神。吾日三省乎吾身。为人谋而不忠乎?与朋友交而不信乎?传不习乎?若人人皆每日反省自身，世间又会多出多少君子。人人好公，则天下太平；人人营私，则天下大乱。给世界和身边人，多一点宽容，多一份担当。为天地立心，为生民立命，为往圣继绝学，为万世开太平。立千古大志，乃是圣人也。丹青不知老将至，贫贱于我如浮云。淡看世间事，心情如浮云天行健，君子以自强不息。地势坤，君子以厚德载物。君子，生在世间，当靠自己拼搏奋斗。博学之，审问之，慎思之，明辨之，笃行之。进学之道，一步步逼近真相，逼近更高。百学须先立志。天下大事，不立志，难成！海纳百川，有容乃大；壁立千仞，无欲则刚做人，心胸要宽广。其身正，不令而行；其身不正，虽令不从。身心端正，方可知行合一。子曰:“知者不惑，仁者不忧，勇者不惧。”真正努力精进者，不会把时间耗费在负性情绪上。好学近乎知，力行近乎仁，知耻近乎勇。力行善事，有羞耻之心，方可成君子。操千曲尔后晓声，观千剑尔后识器做学问和学技术，都需要无数次的练习。第一个青春是上帝给的；第二个的青春是靠自己努力当眼泪流尽的时候，留下的应该是坚强。人总是珍惜未得到的，而遗忘了所拥有的。谁伤害过你，谁击溃过你，都不重要。重要的是谁让你重现笑容。幸运并非没有恐惧和烦恼；厄运并非没有安慰与希望。你不要一直不满人家，你应该一直检讨自己才对。不满人家，是苦了你自己。最深的孤独不是长久的一个人，而是心里没有了任何期望。要铭记在心；每一天都是一年中最完美的日子。只因幸福只是一个过往，沉溺在幸福中的人；一直不知道幸福却很短暂。一个人的价值，应该看他贡献什么，而不应当看他取得什么。做个明媚的女子。不倾国，不倾城，只倾其所有过的生活。生活就是生下来，活下去。人生最美的是过程，最难的是相知，最苦的是等待，最幸福的是真爱，最后悔的是错过。两个人在一起能过就好好过！不能过就麻利点分开。当一个人真正觉悟的一刻，他放下追寻外在世界的财富，而开始追寻他内心世界的真正财富。人若软弱就是自己最大的敌人。日出东海落西山，愁也一天，喜也一天。遇事不转牛角尖，人也舒坦，心也舒坦。乌云总会被驱散的，即使它笼罩了整个地球。心态便是黑暗中的那一盏明灯，可以照亮整个世界。生活不是单行线，一条路走不通，你可以转弯。给我一场车祸。要么失忆。要么死。有些人说：我爱你、又不是说我只爱你一个。生命太过短暂，今天放弃了明天不一定能得到。删掉了关于你的一切，唯独删不掉关于你的回忆。任何事都是有可能的。所以别放弃，相信自己，你可以做到的。、相信自己，坚信自己的目标，去承受常人承受不了的磨难与挫折，不断去努力、去奋斗，成功最终就会是你的！既然爱，为什么不说出口，有些东西失去了，就在也回不来了！对于人来说，问心无愧是最舒服的枕头。嫉妒他人，表明他人的成功，被人嫉妒，表明自己成功。在人之上，要把人当人；在人之下，要把自己当人。人不怕卑微，就怕失去希望，期待明天，期待阳光，人就会从卑微中站起来，带着封存梦想去拥抱蓝天。成功需要成本，时间也是一种成本，对时间的珍惜就是对成本的节约。人只要不失去方向，就不会失去自己。过去的习惯，决定今天的你，所以，过去的懒惰，决定你今天的一败涂地。让我记起容易，但让我忘记我怕我是做不到。不要跟