项目4-2 动物性食品中兽药残留的检测2课件讲解

动物性食品中兽药残留的检测什么是兽药残留？兽药：是指用于预防、治疗、诊断动物疾病或者有目的地调节动物生理机能的物质，主要包括：血清制品、疫苗、诊断制品、微生态制品、中药材、中成药、化学药品、抗生素、生化药品、放射性药品及外用杀虫剂、消毒剂等。兽药残留是指用药后蓄积或存留于畜禽机体或产品(如鸡蛋、奶品、肉品等)中原型药物或其代谢产物，包括与兽药有关的杂质的残留。常见的几类兽药残留药物抗生素类：青霉素、四环素抗生素，还包括抗真菌药以及磺胺

类、氟喹诺酮类药物β-激动剂类：俗称瘦肉精，有

盐酸克伦特罗、

莱克多巴、

沙丁胺醇等11种磺胺类药物：磺胺异恶唑、磺安密啶等硝基呋喃类药物：呋喃唑酮、呋喃它酮、呋喃妥因、呋喃西林激素类兽药残留的危害？2011年3•15特别行动中，央视曝光了双汇“瘦肉精”养猪一事。2011年1月，浙江省杭州、金华、嘉兴等地相继发生六起食物中毒事件。中毒者相继出现脸色潮红、胸闷、心悸等食物中毒现象。省疾控中心在送检的食物样品中测出了不同浓度的“瘦肉精”。

北京奥运会前，欧阳鲲鹏和美国泳将哈迪均因瘦肉精尿检阳性，而被禁止参赛。瘦肉精事件瘦肉精瘦肉精是一类药物，是肾上腺素类神经兴奋剂，属β－兴奋剂类激素，任何能够促进瘦肉生长、抑制肥肉生长的物质都可以叫做“瘦肉精”。在中国，通常所说的瘦肉精是指盐酸克伦特罗。但瘦肉精有着较强的毒性，中毒者会有心慌、头疼、恶心等中毒症状，长期使用有可能导致染色体畸变，诱发恶性肿瘤。对心脏病、高血压患者、老年人的危害更大。盐酸克伦特罗快速测试卡“瘦肉精”现场快速检测孔雀石绿事件孔雀石绿是有毒的三苯甲烷类化学物，既是染料，也是杀菌剂，具有潜在的致癌、致畸、致突变的作用。我国在2002年前就将孔雀石绿列入《食品动物禁用的兽药及其化合物清单》中，禁止用于食品动物。但是，在水产品的养殖过程中，很多渔民仍然用它来预防鱼的水霉病、鳃霉病、小瓜虫病等；在运输过程中，为了使鳞受损的鱼延长生命，鱼贩也常使用孔雀石绿。2005年3月8日，重庆市水产技术推广站水产检疫队在渝中区西三街水产交易市场查获600多只含有致癌药物孔雀石绿的甲鱼。2005年8月，香港有关部门一连两天在市面抽验29个淡水鱼样本进行测试，当中25个进口淡水鱼样本中，10个证实含有可能致癌的“孔雀石绿”。2005年11月，继三款“珠江桥牌豆豉鲮鱼罐头”被查出含致癌物孔雀石绿后，香港食物环境卫生署公布的食物最新测试结果显示，“鹰金钱”牌金奖豆豉鲮鱼和甘竹牌豆豉鲮鱼等三个食物样本被查出含有致癌物“孔雀石绿”。日本政府于1994年制订法规，规定对来自中国的鳗鱼须加强对抗生素、磺胺制剂及恶喹酸三项有害物质控制检查，其中土霉素等四环素类抗生素要求未检出（检测限为0.1mg/kg）。2012年4月10日起，日本决定对进入日市场的鳗鱼及制品逐批抽检是否有土霉素残留。这意味着中国出口鳗鱼将面临一次严峻的挑战。如果有关方面不及时采取有效的控制措施，鳗鱼加工企业、养殖户、鳗鱼饲料加工企业可能将受到严重的冲击。

对出口的影响长期食用兽药残留超标的食品后，当体内蓄积的药物浓度达到一定量时会对人体产生多种急、慢性中毒。四环素类药物能够与骨骼中的钙结合，抑制骨骼和牙齿的发育。红霉素等大环内酯类可致急性肝毒性。氨基糖苷类的庆大霉素和卡那霉素能损害前庭和耳蜗神经，导致眩晕和听力减退。磺胺类药物能够破坏人体造血机能。硝基呋喃类药物及其代谢物对人体有致癌、致畸胎副作用。激素对内分泌功能、生育功能有影响，引起儿童性早熟。因此，检测动物性食品中兽药残留十分重要。根据《兽药管理条例》规定，农业部组织修订里了《动物性食品中兽药最高残留限量》，即农业部235号公告，规定了四类兽药：1、允许使用，不需要制定最大残留限量（如碳酸钙、葡萄糖酸钙、过氧化氢等）2、允许使用，但需要制定最大残留限量（如阿莫西林、四环素类、磺胺类、氟喹诺酮类）3、允许治疗使用，动物的任何可食用组织不得检出（如镇定剂类，激素类）4、不允许使用，动物的任何可食用组织不得检出（兴奋剂类、氯霉素、硝基呋喃类）药物名动物种类靶组织残留限量（μg/kg）阿莫西林所有食品动物肌肉脂肪肝肾奶5050505010地西泮（安定）所有食品动物所有可食组织不得检出氯霉素及其盐、酯所有食品动物所有可食组织不得检出克伦特罗及其盐、酯所有食品动物所有可食组织不得检出己烯雌酚及其盐、酯所有食品动物所有可食组织不得检出呋喃它酮所有食品动物所有可食组织不得检出农业部235公告部分兽药残留限量兽药残留的原因1、养殖环节违规用药和用药不当是产生兽药残留的最主要原因。非法使用违禁或淘汰药物不遵守休药期规定超剂量滥用药物违背有关标签规定屠宰前用药2、加工、包装、贮存、运输、销售过程污染3、人为掺杂使假（违法行为）学习目标知识目标：

1.会说出兽药氟喹诺酮残留检测原理；

2.会说出液相色谱的组成部分及作用；技能目标：

1.会熟练使用漩涡振荡器、固相萃取仪等对样品进行预处理

2.会正确使用液相色谱仪对样品进行测定和数据处理

3.能准确进行数据记录和处理4.能根据正确评价食品中兽药残留是否符合标准素质目标：

1.培养学生严谨、务实的学习精神；

2.培养学生开拓创新、团结协作的职业素质。检测依据农业部1025号公告-14-2008适用范围：适用于猪的肌肉、脂肪、肝脏和肾脏，

鸡的肝脏和肾脏组织中达氟沙星、

恩诺沙星、环丙沙星和沙拉沙星药

物残留检测。测定原理用磷酸缓冲盐溶液提取试料中的药物，C18柱净化，流动相洗脱，以磷酸-乙腈为流动相，用高效液相色谱—荧光检测法测定，外标法定量。具体工作任务分解任务3：提取液净化任务2：样品制备与提取任务4：液相色谱测定任务5：数据记录与计算任务1：主要仪器设备任务一：主要仪器设备离心机漩涡振荡器液相色谱仪固相萃取仪固相萃取柱任务二、样品制备与提取样品，切成小块，放入搅拌机中，打浆准确称取2±0.05g样品于50mL具塞离心管中旋涡振荡器上中速振荡5min

准确加入20.0mL磷酸盐缓冲液离心管配平离心，10000转/min，离心5min将上清液倒入50mL烧杯中，以备过柱用任务三、提取液净化将固相萃取柱在固相萃取仪上安装好加2.0mL甲醇于固相萃取柱中当水快要滴干时加5.0mL上清液，流速控制在1-2mL/min当甲醇快要滴干时，再加2.0mL水快要滴干时，加2.0mL水淋洗，滴完后，挤干将5mL试管安装于固相萃取仪上，用于接收用2.0mL流动相洗脱，收集洗脱液，滴完后，挤干用0.2um滤膜过滤至样瓶中固相萃取柱填料上面不能完全干，除非要求挤干任务四、液相色谱测定仪器：液相色谱仪色谱条件：（1）色谱柱：C18250mm×4.6mm，粒径5μm，或者相当者；（2）流动相：0.05mol/L磷酸溶液/三乙胺：乙腈（82：18，v/v）；（3）流速：0.8mL/min；（4）进样量：20μL；（5）柱箱温度：25℃；（6）荧光检测器：激发波长280nm，发射波长450nm。色谱柱任务四、液相色谱测定色谱分析：由自动进样器分别吸取20μL对照品标准工作溶液及试样净化液注入液相色谱仪中，记录色谱峰，以保留时间定性，以试样和标准工作液的峰面积（或峰高）比较定量。100μg/L环丙沙星、恩诺沙星标准溶液谱图任务五、定性与定量计算项目名称样品名称接样日期设备检验日期检验依据农业部1025号公告-14-2008样品质量M（g）提取用磷酸盐缓冲溶液的总体积V1（mL）过C18固相萃取柱所用备用液体积V2（mL）洗脱用流动相体积V3（mL）样品溶液中相应药物的峰面积A对照溶液中药物的浓度Cs（ng/mL）对照溶液中相应药物的峰面积As计算公式X（μg/㎏）=试样中氟喹诺酮

的残留量X（μg/㎏）试样中氟喹诺酮

残留量平均值（μg/㎏）标准规定分析结果的精密度在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的20%。本次实验分析结果的精密度X（μg/㎏）=式中：X——样品中环丙沙星或恩诺沙星的残留量，单位为微克每千克（μg/㎏）；A——样品溶液中相应药物的峰面积；As——对照溶液中相应药物的峰面积；Cs——对照溶液中药物的浓度，单位为纳克每毫升（ng/mL）；V1——提取用磷酸盐缓冲溶液的总体积，单位为毫升（mL）；V2——过C18固相萃取柱所用备用液体积，单位为毫升（mL）；V3——洗脱用流动相体积，单位为毫升（mL）M——样品的质量，单位为克（g）。测定结果用平行测定的算术平均值表示，保留三位有效数字。计算公式：知识拓展1、液相色谱仪液相色谱法（liquidchromatography，LC）初期发展比较慢，到了20世纪60年代后期，液相色谱得到了迅速的发展。特别是填料制备技术、检测技术和高压输液泵性能的不断改进，使液相色谱分析实现了高效化和高速化。从此，这种分离效率高、分析速度快的液相色谱法就被称为高效液相色谱法（highperformanceliquidchromatography，HPLC）。该方法已成为化学、医学、工业、农学、商检和法检等学科领域中重要的分离分析技术。沃特世（Waters）液相色谱仪安捷伦气相色谱仪2、液相色谱仪原理高效液相色谱是以液体为流动相，采用高压输液系统，将具有不同极性的单一溶剂或不同比例的混合溶剂、缓冲液等流动相泵入装有固定相的色谱柱，在柱内各成分被分离后，进入检测器进行检测，从而实现对试样的分析。液相色谱流程图1、储液罐；2输液泵；3、进样器；4、色谱柱；5、检测器；6、工作站；7、废液灌输液泵2将储液罐1的流动相抽入泵内加压后，从泵头以一定的流速输出，经压力表计量后，样品从进样器3带入色谱柱4，样品在色谱柱4内被分离成单一组分后立即进入检测器5，利用样品与流动相在电学、光学、热学或电化学性质上的差别，检测器5能给出一个表达物质浓度或量的信号，此信号经放大系统放大并记录下来。3、液相色谱仪的组成液相色谱仪由高压输液系统、进样系统、分离系统、检测系统和记录系统五部分组成。流动相高压输液泵柱箱自动进样器检测器记录系统3、液相色谱仪的组成（1）高压输液系统：由储液罐、高压输液泵、过滤器、压力脉动阻力器等组成，高压输液泵是核心部件，作用是输送流动相，由于色谱柱的阻力大，所以高压泵必须能克服阻力以恒定流速输送流动相。（2）进样系统：常用的进样系统有3种：直接进样、停留进样和六通阀进样。其中最常用的是六通阀进样，采用这种方法，耐高压，进样量的可变范围大，而且易于自动化。（3）分离系统：由柱箱、色谱柱组成。色谱柱是液相色谱的心脏部件，它包括柱管与固定相两部分。柱管材料有玻璃、不锈钢、铝、铜及内衬光滑的聚合材料的其他金属。玻璃管耐压有限，故金属管用得较多。（4）检测系统：检测器是色谱仪的重要部件，用来检测分离出的组分。在液相色谱中，有两种基本类型的检测器：一类是溶质型检测器，它仅对被分离组分的物理或化学特性有响应，属于这类检测器的有紫外检测器、荧光检测器、电化学检测器等。另一类是总体检测器，它对试样和洗脱液总的物理或化学性质有响应，属于这类检测器的有示差折光检测器，电导检测器等（5）记录系统：记录系统也称输出系统，是将检测器转化成的电信号以谱图的形式输出，描绘出各组份的色谱峰。（1）紫外检测器：根据被分析试样对特定波长的紫外光或可见光的选择性吸收，试样的浓度与吸光度的关系来完成检验。紫外检测器应用最广，对大部分有机化合物都有响应。特点：灵敏度高、线性范围高、对流动相的流速和温度变化不敏感、波长可选，易于操作，只对样品组分有响应，而对流动相基本没有响应。（2）荧光检测器：用紫外光照射某些化合物时它们可受激发而发出荧光，测定发出的荧光能量即可定量