DB14T 807-2013山羊胚胎移植技术规程

DB14DB14/807—2013山羊胚胎移植技术规程2013-12-20发布2014-01-20实施山西省质量技术监督局I II 1 1 1 2 2 2 3 3 3 4 5 6 7 8 9 10 12 151件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的NY/T826绵羊羊胚胎移植技术规程将超数排卵及配种后优种母羊体内的早期胚胎取出或体外获得的早期胚胎移植到同期发情受体母2通过外源激素的调控使供体母羊、受体母羊在规定的时间在母羊发情周期内，通过外源激素调控，促使卵巢大量卵泡发育4胚胎移植材料及人员装备5.1胚胎室设置5.2胚胎室要求手术室要宽敞、明亮、洁净、密闭良好、地面硬化，面积不小于35m2，室内温度为25℃~30℃,胚胎操作室要求密闭良好、无菌、无尘，面积不小于20m2，室内温度为25℃~30℃,配备有照明品种优良、系谱档案完整、遗传性能稳定，且个体年龄1.5～5周岁产后3个月以上空怀母羊，体型外貌符合品种标准、生产性能好、膘情中等、繁3饲养环境应稳定、安静、卫生、通风、干燥、温度适宜根据山西省气候特点和山羊的繁殖特性，最适超数排卵季节为受体羊与供体羊同一时间放入CIDR，取出CIDR的时间比供体羊早8h～9h，取C4颈静脉注射静松灵0.5mL～1.0mL将供体羊麻醉后仰放手手术部位用湿棉纱清洗后覆盖创口巾，然后用碘酒消毒，宫角，并将子宫、卵巢引出刀口外，观察并记录卵巢排卵情然后把8#～10#冲胚三通管头朝子宫角方向插入子宫其气囊充2mL～3mL空气，冲胚三通管的出水口接培养皿。在同侧子宫的宫管结合处，将套管针插入子宫，取出针头，连接已吸好冲胚液20mL（37冲胚结束后，用37℃左右生理盐水将子宫、5合好后，伤口撒适量青霉素粉，再缝合皮肤。缝合160万单位，然后将羊轻轻从手术架上抬下放到室外，胚液冲洗2～3次，移入盛有胚胎保存液的培养皿中。根据胚龄、胚胎形态学及胚胎发育情况将胚胎分从液氮罐中取出装有胚胎的细管→迅速投入到32℃~35℃水浴中解冻10s左右→剪去封口端→将胚胎推入培养皿中→将胚胎依次放入含10%、6%、3油或在1M蔗糖的解冻液中平衡4min～10min→用胚胎保存液洗3次→镜检→胚从液氮罐中取出装有胚胎的细管→迅速投入到32℃~35℃水浴中解冻10s左右→剪去封口端→将胚胎推入培养皿中→用胚胎保存液洗3次→镜检→胚胎卵管中去。每只受体羊移植1～2枚胚胎，卵巢上无用移胚器先吸少许空气，再吸少量保存液和1～2枚胚胎，最后吸少许空气。在受体羊卵点一侧的输卵管伞部将移胚器针管插入输卵管2cm吸胚胎方法同11.5.1。在受体羊卵巢有排卵点一侧离宫管结合处2.0cm～2.5cm的子宫壁上扎一小孔，从此孔将移胚器针管插入子宫腔内，轻推移胚6受体羊术后一周内，禁止剧烈运动，注意检查创口愈合情移植胚胎的受体羊统一按妊娠母羊进行管理，但要注意观察其胚胎移植后2个发情周期内是否发7AA.1试剂、药品及生物制剂磷酸氢二钠(Na2HPO4)、盐酸、丙酮酸钠、葡萄糖、牛血清白蛋白、犊牛血清、青霉素、链霉素、生理析纯，生物制剂及抗生素应符合细胞培养要8名称数量名称数量放栓枪一次性创口巾体视显微镜2台手术刀保温板2个手术剪培养箱细管剪2把活动手术架敷料手术灯平镊活动手术器械车4台紫外线灯止血钳高压灭菌仪持针器干燥箱缝针2包天平（万分之一）缝线超净工作台套管针超纯水仪冲胚管(8g3cc、10g3cc)磁力搅拌器硅胶管酸度计培养皿(ф35mm、ф100mm）各30个水浴锅检胚器、移胚器超声波清洗仪注射器（2mL、5mL、10mL、20mL）各30个液氮罐（10L、3L）温度计烧杯（500mL、250mL、100mL）记号笔量筒（100mL、50mL、25mL）各2个纱布定量瓶（500mL、100mL、50mL）各2个碘酒棉球、酒精棉球各3广口瓶试剂瓶（50mL、100mL、500mL）工作服、工作帽、口罩玻璃棒橡胶手套（一次性）50副滤膜过滤器（0.22µm、0.45µm）各20个PE手套（一次性）剪毛剪脸盆刮毛刀毛巾、肥皂9新购置的玻璃器皿使用前应先用自来水刷洗，然后用5%稀盐酸溶液浸泡12h以上。使用后的玻璃涤20min～30min。金属器械套管针、检胚器、移胚器等使用后立即用超纯水（阻值16MΩ品采用紫外线消毒灭菌。塑料制品放在距紫外线灯50cm～80cm处，使每平方米厘米有0.06µW能量的耐高温的玻璃和金属器具，包装好后放入烘干箱内冲胚管、硅胶管、套管针、检胚器、移胚器等用70%～75%酒精浸泡消毒灭菌40min～60min，然D成分分子量组分浓度（mM）含量（g/L）备注氯化钠（NaCl）氯化钾（KCl）氯化钙（CaCl2）氯化镁（MgCl2或MgCl2.6H2O）磷酸二氢钾(KH2PO4)磷酸氢二钠(Na2HPO4或Na2HPO4.7H2O或Na2HPO4.12H2O)配制方法：1.称上述化学试剂置于1L烧杯中。58.4474.55147.0295.21或203.3136.09142.0或268.0或358.02.70.680.58.098.00.20.10.05或0.10.21.15或2.16或2.902.向烧杯中加入约800mL的超纯水（阻值16MΩ~18MΩ),充分搅拌溶解。3.用盐酸将PH值调节至7.2～7.6，然后加入超纯水（阻值16MΩ~18MΩ)定溶至1L。4.高温（120℃)高压（0.105Mpa）灭菌20min～30min，4℃保存。使用进口成品PBS粉剂配制方法，根据产品使用说明书。名称含量（g）含量（g）含量（g）备注A液100mL500mL1000mL为了便于保存，氯化钠（NaCl）8.040.080.0可配制成A液和B氯化钾（KCl）0.21.02.0液，也可配制成浓氯化钙（CaCl2）0.10.51.0缩10倍的原液。氯化镁（MgCl2或MgCl2.6H2O）0.05或0.10.25或0.50.5或1.0A、B原液高压B液100mL500mL1000mL灭菌后4℃保存。磷酸二氢钾(KH2PO4)0.21.02.0磷酸氢二钠(Na2HPO4或1.15或2.165.75或10.811.5或21.6Na2HPO4.7H2O)国际单位/ml、链霉素100国际单位/ml加入取含20%犊牛血清的保存液9.0mL，加入1.0mL甘油，混匀后用0.3%甘油的蔗糖解冻液，混合均匀，用0.22µ供体羊号CIDR生产厂家、批号放CIDR时间注射FSH日期FSH剂量每天剂量总剂量发情时间配种时间地点早第一次年龄FSH生产厂家、批号胎次换CIDR时间撤CIDR时间发情结束时间持续时间第二次第三次配种公羊号供体羊号采胚日期采胚开始时间采胚结束时间左侧卵巢右侧卵巢卵泡数黄体数卵泡数黄体数胚胎质量A级B级C级胚胎质量A级B级C级桑椹胚桑椹胚致密桑椹胚致密桑椹胚早期囊胚早期囊胚囊胚囊胚扩张囊胚扩张囊胚孵化囊胚孵化囊胚合计合计采胚总数A级B级C级备注采胚人员：检胚人员：参加人员：地点：受体羊受体羊号品种年龄CIDR批号放CIDR时间撤CIDR时间PMSG厂家、批号PMSG注射时间PMSG剂量发情日期备注同期发情处理人员：