动物实验概述

动物实验一、实验动物的编号与标记编号与标记通常是动物实验开始时进行的第一项工作。编号的目的是使个体易于识别，便于实验者观察每个动物的变化，为清楚记录结果做好准备。无论何种编号方法，良好的标记方法都应满足号码清晰、耐久、简便和适用的要求。（一）染色法常用的染液有3%～5%的苦味酸溶液（黄色）、2%的硝酸银溶液（咖啡色）、0.5%的中性品红溶液（红色）。染色法编号的原则是“先左后右，先上后下”。（二）穿耳孔法（三）剪趾法（四）挂牌法（五）挂腿圈法（六）烙印法（七）针刺法（八）剪尾法剪尾法是将动物尾尖部剪去，一般用于大鼠、小鼠的分组，但仅限于将两组动物区分开，无法给每只动物编号。如果若需进行尾尖取血，此法不适用。（九）剪毛法剪毛法是将动物背部的被毛用剪刀剪去，用于标记，此法编号标记清楚、可靠，便于试验人员观察，常用于大中型动物的编号。二、实验动物的分组（一）随机分组的原则及方法动物编号后，通常需要根据实验要求进行分组。动物随机分组一般使用随机数字表或用计算器产生随机数字来进行。（二）分组的注意事项动物随机分组的目的在于使某实验中的某主要指标平均分配到各个组中，为确保实验结果具有统计学意义，实验分组时应注意各组动物的数量不可太少，一般需进行统计学处理的实验数据，各组动物至少不可少于6只，若再考虑到实验过程中出现意外等情况，动物数量还需适当增加。实验分组时还应考虑到动物性别的影响。如果条件允许，可选择雌雄各半进行实验，但应保证雌雄动物的实验数据均应具有统计学意义；若条件不允许，考虑到雌性动物的生理因素，选择雄性动物进行实验为好。三、实验动物的抓取和固定小鼠的捉取与固定小白鼠正常体温37℃左右，小鼠性情比较温顺，一般不会主动咬人。在小鼠较安静时打开鼠笼盖，一般情况下用右手在靠近鼠尾尾根部捏住并将其提起，放在较粗糙的平面或鼠笼盖上，轻轻地向后拉鼠尾，当其向前爬行时，用右手拇指和食指捏住小鼠颈部皮肤和两耳，捏住的皮肤要适量，太多太紧小鼠会窒息，太少太松小鼠会回头咬伤实验者。捏住后翻转右手，掌心向上，将鼠体置于右手掌心中，左手拉住小鼠尾部，用左手无名指或小指压紧尾根，使小鼠身体成一条直线（图2）。此种抓取固定方法适用于肌肉注射、腹腔注射、灌胃等操作。图1小鼠的抓取图2小鼠固定豚鼠的抓取与固定豚鼠正常体温38.6(37.8～39.5)℃，豚鼠性情温顺，一般不咬人。抓取时，不能粗暴，更不能抓腰腹部，这样易造成肝破裂而引起死亡。抓取幼小的豚鼠时，可用双手捧起。抓取较大的豚鼠时，可将手轻轻地伸进笼子，先用手掌扣住豚鼠的背部，抓住其肩胛上方，将左手张开，用手指抓住颈部慢慢将其提起。怀孕或体重较大的豚鼠，应用右手托起臀部（图4）。图3大鼠的抓取图4豚鼠的抓取及固定四、注射免疫方法(一)皮下注射皮下注射一般选取皮下组织疏松的部位，大鼠、小鼠和豚鼠可在颈后肩胛问、腹部两侧作皮下注射，猪的皮下注射部位为耳根部皮下。牛的皮下注射部位是颈部的两侧或者肩胛后方的胸侧皮肤容易移动的部位。皮下注射时，先用酒精棉球消毒需注射部位的皮肤，再将皮肤提起，进针时，从头部方向刺入皮下，再沿体轴方向将注射针推进5～10mm，若针尖易左右摆动，表明已刺入皮下。然后轻轻抽吸，如无回流物可缓慢注射药液。注射完毕，缓慢拔出注射针，用干棉球压针刺部位，以防止药液外漏。(二)肌肉注射肌肉注射一般选肌肉发达，无大血管通过的部位。大鼠、小鼠、豚鼠可注射大腿外侧肌肉。猪的肌肉注射部位为颈部肌肉或者耳后肌肉。牛的肌肉注射部位是颈部三角区（项韧带下缘，胸头肌后缘，肩胛骨前方围成的）、后臀的前外侧（髋结节后面的）。(三)腹腔注射给大鼠、小鼠进行腹腔注射时，以左手固定动物，使腹部向上，为避免伤及内脏，应尽量使动物头处于低位，使内脏移向上腹，右手持注射器从下腹两侧向头方刺入皮下，针头稍向前，再将注射器沿45℃角斜向穿过腹肌进入腹腔，此时有落空感，回抽无回血或尿液，即可注入药液。（四）皮内注射皮内注射用于观察皮肤血管通透性变化或皮肤反应。大鼠、小鼠、豚鼠、家兔等动物皮内注射常选择背部脊柱两侧的皮肤。猪的皮内注射一般选取耳壳外面或腹侧皮肤注射。操作时需先将动物注射部位脱毛，酒精棉球消毒局部，用左手将皮肤捏成皱襞，右手持注射针，将针头与皮肤大约呈30℃角刺入皮下，然后使针头向上挑起并稍刺入，即可注射。注射后，皮肤表面可见鼓起一小丘，停留片刻拔出针头。五、采血方法（一）大鼠、小鼠的采血方法：1、尾尖采血：此种采血方法血量很少，约1～2滴，可以做血涂片、试纸检测血糖等实验。动物固定露出尾巴，用酒精擦拭尾尖，使血管扩张，然后剪去尾尖1mm～2mm(小鼠)或3mm～5mm(大鼠)，血液即可流出。若剪尾后，未见血，可用手沿尾根部至尾尖部捋尾巴，血液即可流出，取血后用干棉球压迫止血。2、眼眶后静脉丛采血：是以采血管刺破后眼眶静脉丛进行采血的方法。操作者一手固定小鼠或大鼠，食指和拇指轻轻压迫颈部两侧，使眶后动静脉充血，另一只手持玻璃制的毛细采血管（小鼠采血管直径约1mm，大鼠采血管直径约2mm）以大约45℃角从内眼角刺入，并向下旋转，感觉刺入血管后，再向外边退边吸，使血液顺取血管自由流入小管中，当得到所需血量后，放松加于颈部的压力，并拔出采血器，以防穿刺孔出血。采血后，用消毒纱布压迫眼球止血30s。若技术熟练，此方法在短期内可重复采血，小鼠一次可取血0.2ml～0.3ml左右,大鼠可取血约0.5ml～1ml。3、摘眼球采血：若一次性采血可选择摘眼球法从眶动脉或眶静脉采血。取血时左手固定动物，将动物头部皮肤绷紧，眼球突出，右手持眼科弯镊夹住眼球根部，将眼球迅速摘出，并立即将鼠倒置，头朝下使眼眶内动静脉血液流入容器。(二)豚鼠采血方法1、耳缘切口采血：先将豚鼠耳消毒，用刀片割破耳缘，则血可自动流出而进入容器。此法能采血约0.5ml。2、背中足静脉采血：将豚鼠后肢关节伸直，提到实验者面前。实验者将动物脚背面用酒精消毒，找出背中是静脉后，用左手拇指和食指拉住豚鼠的趾端，右手持注射针刺入静脉，抽出注射针后即有血液渗出。猪采血方法耳静脉采血：适用于40Kg以上的中大猪或种猪。采用站立保定，由1名助手用猪保定器套住猪的上颌骨、收紧，用力向前方牵引，另一助手在猪耳根处用力压住耳静脉近心端，采血员左手拉伸猪耳，右手用酒精棉球反复涂擦耳静脉使血管怒张后，右手持连接9号针头的注射器，沿血管走向刺入，针头与猪耳水平面呈10～15℃角进针，回血后，缓慢抽取所需血液量后，用干棉球或棉签按压止血。前腔静脉采血法：20～30Kg的小猪。一般用仰卧保定法，由一名助手抓握两后肢，尽量向后牵引，另一助手用手将下颌骨下压，使头部贴地，并使两前肢与体中线基本垂直。此时，两侧第一对肋骨与胸骨结合处的前侧方呈两个明显的凹窝。采血员用酒精棉球消毒皮肤后，手持连接7～9号针头的一次性注射器（10～40Kg小猪，选择9×25毫米针头；10Kg以下乳猪，选择7×20毫米针头），向右侧凹窝处，由上而下，稍偏向中央及胸腔方向刺入，见有回血，即可采血，采血完毕，左手拿酒精棉球紧压针孔处，右手迅速拔出采血针管，稍压片刻止血后，解除保定。40Kg以上的中大猪，采用站立式保定，由一名助手用猪保定器套住猪的上颌骨、收紧，用力向前上方牵引，使猪的上颌骨稍稍吊起，两前肢刚刚着地，让猪的胸前凹窝充分暴露，采血员用酒精棉球消毒皮肤后，手持连接12×38毫米针头的一次性注射器，朝右侧胸前凹窝最低处，由下而上，且垂直凹窝方向进针，见回血后，标志已刺入血管，轻轻抽动注射器活塞，采取血液。采血完毕，拔出针头，术部用酒精棉球压迫片刻止血后，解除保定。牛采血方法1、牛、羊静脉采血：将动物保定，稍抬头颈，于经脉沟上1/3与中1/3交界部剪毛消毒，一手拇指按压采血部位下方颈静脉沟血管，促使静脉怒张，另一手执针头，与皮肤呈45℃角，由下向上方刺入，血液顺器壁流入容器内，防止气泡产生。待血量达到要求后，拔下针头，用消毒棉球按压针眼，轻按止血。2、牛尾静脉采血：固定动物，使牛尾往上翘，手离尾根部约30cm。在离尾根10cm左右中点凹陷处，先用酒精棉球消毒，然后将采血针垂直刺入（约1cm深）。针头触及尾骨后再退出1mm进行抽血。采血结束，消毒并按压止血。3、乳房静脉采血：奶牛、奶山羊可选乳房静脉采血，奶牛腹部可看到明显隆起的乳房静脉，消毒后在静脉隆起处，针头向后肢方向快速刺入，见有血液回流，缓慢抽取所需量血液或接入真空采血管。六、不同动物感染FMDV后的症状：（一）猪口蹄疫的症状与病变：潜伏期为24h至7天，少数可达到14天，开始时，病猪发热，可达到41℃，精神萎顿，打盹，猪蹄底部或蹄冠部皮肤潮红、肿胀，继而出现水泡，行走呈跛行，有明显的痛感，行走发出凄厉的尖叫声，很快蹄壳脱落，蹄部不敢着地，病猪跪行或卧地不起，鼻颈部出现一个或数个水泡，黄豆大或乒乓球大小不等，水泡很快破裂，露出鲜色溃疡面，如无细菌感染，伤口可在一周左右逐渐结痂愈合。哺乳母猪的乳头常出现水泡，引起疼痛而拒绝哺乳；哺乳仔猪出现急性胃肠炎、急性心肌炎或四肢麻痹，衰弱死亡，死亡率可达80%以上；大猪解剖一般特征性病变，少数可见胃肠出血性炎症。仔猪呈现典型的“虎斑心”，心肌外出现黄色条纹斑，心外膜有不同程度的出血点，个别肺有气肿现象。（二）牛口蹄疫的症状与病变：口蹄疫病毒侵入动物体内后，经过2～3日，有的则可达7～21日的潜伏时间，才出现症状。症状表现为口腔、鼻、舌、乳房和蹄等部位出现水泡，12～36h后出现破溃，局部露出鲜红色糜烂面；体温升高达40～41℃；精神沉郁，食欲减退，脉搏和呼吸加快；流涎呈泡沫状；乳头上水泡破溃，挤乳时疼痛不安；蹄水泡破溃，蹄痛跛行，蹄壳边缘溃裂，重者蹄壳脱落。犊牛常因心肌麻痹死亡，剖检可见心肌出现淡黄色或灰白色、带状或点状条纹，似如虎皮，故称“虎斑心”。有的牛还会发生乳房炎、流产症状。牛的潜伏期2～7天，可见体温升高40～41℃，流涎，很快在唇内、齿龈、舌面、颊部粘膜、蹄趾间及蹄冠部柔软皮肤以及乳房皮肤上出现水泡，水泡破裂后形成红色烂斑，之后糜烂逐渐愈合，也可能发生溃疡，愈合后形成斑痕。病畜大量流涎，少食或拒食；蹄部疼痛造成跛行甚至蹄壳脱落。该病在成年牛一般死亡率不高，在1%～3%之间，但在犊牛，由于发生心肌炎和