荧光分光光度计基本结构和原理 光度计工作原理_第1页
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第第页荧光分光光度计基本结构和原理光度计工作原理荧光分光光度计是用于扫描液相荧光标记物所发出的荧光光谱的一种仪器。其能供应包括激发光谱、发射光谱以及荧光强度、量子产率、荧光寿命、荧光偏振等很多物理参数,从各个角度反映了分子的成键和结构情况。通过对这些参数的测定,不但可以做一般的定量分析,而且还可以推断分子在各种环境下的构象变化,从而阐明分子结构与功能之间的关系。荧光分光光度计的激发波长扫描范围一般是190～650nm，发射波长扫描范围是200～800nm。可用于液体、固体样品（如凝胶条）的光谱扫描。

由高压汞灯或氙灯发出的紫外光和蓝紫光经滤光片照射到样品池中，激发样品中的荧光物质发出荧光，荧光经过滤过和反射后，被光电倍增管所接受，然后以图或数字的形式显示出来。

基本结构和原理，光源与检测器成直角方式布置。

1.光源：

为高压汞蒸气灯或氙弧灯，后者能发射出强度较大的连续光谱，且在300nm～400nm范围内强度几乎相等，故较常用。

2．激发单色器：

置于光源和样品室之间的为激发单色器或第一单色器，筛选出特定的激发光谱。

3．发射单色器：

置于样品室和检测器之间的为发射单色器或第二单色器，常接受光栅为单色器。筛选出特定的发射光谱。

4．检测器：

一般用光电管或光电倍增管作检测器。可将光信号放大并转为电信号。

5．样品室：

通常由石英池（液体样品用）或固体样品架（粉末或片状样品）构成。丈量液体时，光源与检测器成直角布置；丈量固体时，光源与检测器成锐角布置。紫外可见分光光度计认真操作流程及校准方法

1、紫外可见分光光度计光度测量

在模式选择屏幕中选择1、Photometric光度选项，将显示参数配置屏幕；

用GOTOWL键设定测量波长；

按F2键设定进样掌控；

按START/STOP键时，测量开始，显示测量屏幕；

如需做空白校正，应在测量前先设置空白样品，然后，按AUTO—ZERO键，将测量值置为OABS（100%）；

2、紫外可见分光光度计校正

开机预热10分钟足矣；

放入黑块和标样（没有的本身配），关闭盖子；

校0；

把灯光对着黑块，把透光度调0；

把灯光对标样，将吸光度调到100%；

3、参比溶液介绍

参比溶液又称空白溶液。测量时用作比较的、不含被测物质但其基体尽可能与试样溶液相像的溶液。通常，用参比溶液扫描的曲线应是一条平坦的直线。有时，基体中，虽不含被测物质，但含有别的物质，这时必需保证其不影响测试。常常碰到的是试剂空白中含有被测物质，此时必需经过纯化将其除去。否则将影响测定结果。

4、紫外可见分光光度计使用注意事项

1、开机前应先预热15分钟，然后开机自检；

2、湿度要掌控在75%左右，温度在5～30度之间；

3、仪器要稳压电源，接地要好。并且避开阳光直接照射；

5、常见故障及处理方法

光门不能完全关闭：修复光门部件，使其完全关闭；

透过率“100%”旋到底了。解决方法：重新调整“100%”旋钮；

仪器严重受潮：可

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