DB32-T 3306-2017蓝莓组培脱毒种苗生产技术规程

ICS65.020.20

B61

备案号：56880-2017DB32

江苏省地方标准

DB32/T3306—2017

蓝莓组培脱毒种苗生产技术规程

TechniqueregulationfortheVirus-freeplantletproductionofBlueberry

2017-09-25发布2017-10-25实施

江苏省质量技术监督局发布

DB32/T3306—2017

蓝莓组培脱毒种苗生产技术规程

1范围

本标准规定了蓝莓组培脱毒种苗生产技术规程的脱毒、外植体消毒、初代培养、病毒检测、继代培

养、壮苗培养、驯化生根、上钵、苗期管理、生产记录等。

本标准适用于全省蓝莓组培脱毒种苗的生产。

2规范性引用文件

下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。

凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

GB/T8321(所有部分)农药合理使用准则

3脱毒

3.1母株

选择具有品种典型特征特性、生长势强、目测无病症的优良单株。

3.2热处理钝化病毒

取母株的侧枝嫩梢，放入病毒钝化处理器，60℃热击10s。

4外植体消毒

将经热处理的嫩梢剪取放入烧杯，纱布封口，自来水冲洗30min～60min，用75%乙醇浸润130s后，

用无菌水洗净，再放入5%～10%的NaClO溶液中浸泡10min～15min后，用无菌水冲洗5次，再用无菌

滤纸吸去表面水分，置于无菌培养皿中备用。

5初代培养

5.1初代培养基

WPM+IBA0.05mg/L+ZT0.5mg/L，pH5.0。

5.2接种

在超净工作台上，用已灭菌的剪刀、镊子将消过毒的外植体均匀分成1.5cm～2.0cm的小段，每段

含1芽～2芽，接种于初代培养基中，每瓶5株～10株。注明品种、编号和接种日期。

5.3培养条件

1

DB32/T3306—2017

温度25℃±2℃、光照强度2000lx～3000lx、光照时间16h/d，培养100d～120d。

6病毒检测

抽取初代培养的蓝莓无菌苗进行蓝莓枯焦病毒(BLScV)、蓝莓急性坏死病毒(BLShV)、蓝莓鞋带病

毒(BSSV)、蓝莓红环斑病毒(BRRV)、蓝莓坏死环斑病烟草环斑病毒(TRSV)、蓝莓叶片斑点病毒(BLMV)

的病毒检测。检测方法采用PCR/RT-PCR。无病毒苗作为核心种苗继代扩繁培养。

7继代培养

7.1继代培养基

WPM+NAA0.5mg/L+ZT1mg/L，pH5.0。

7.2培养条件

温度为25℃±2℃，光照强度1000lx～3000lx，光照时间12h/d～16h/d。60d～90d培养一代，培养不

超过15代。

8壮苗培养

8.1壮苗培养基

WPM+IBA0.1mg/L，pH5.0～5.5。

8.2培养条件

温度为25℃±2℃，光照强度2000lx～3000lx，光照时间14h/d～16h/d。培养90d～120d。

9驯化生根

9.1生根设施

在苗床上搭建高度50cm的小拱棚，安装喷灌设备，苗床上面铺一层无纺布，拱棚上面覆盖塑料薄

膜，上盖遮阳网。

9.2基质

选用苔藓作为专用基质，浸泡12h甩干，湿度控制在40%～60%，塞进5×10的穴盘内。

9.3炼苗

将培养瓶放入温室内，上盖一层遮阳网，封口炼苗7d,然后打开遮阳网，把瓶盖拧松，再炼苗7d。

9.4扦插

选择生长健壮、长度5cm以上、木质化程度好的组培苗进行扦插，先用清水清洗掉培养基，剪去根

部膨大部分，去掉下部三分之一的叶片，在萘乙酸(NAA)1000mg/L的生根液中浸蘸1min，然后用镊子

捏住插穗基部，插入塞好苔藓的穴盘内压紧。每穴1株，插入的深度为2cm～3cm。

2

DB32/T3306—2017

9.5插后管理

插后立即喷水1次。15d内每天叶面喷水2次～3次，相对湿度控制在80%～100%，15d后开始生根并

长出新叶，每天喷水1次，湿度控制在70%左右，30d后去掉拱棚上的遮阳网和塑料薄膜，湿度控制在

60%左右。温度控制在20℃～30℃。

10上钵

10.1栽培容器

选用13×12黑色软质营养钵为宜。

10.2栽培基质

壤土、草碳土、腐锯末按3:1:1的体积比例混合，加入硫磺粉均匀混拌。1m3基质使用硫磺粉0.75kg～

1kg将基质pH值调至4.5～5.5。

10.3上钵时间

须根长至3cm，苗高超过10cm时进行上钵移植。

10.4上钵移植

先装填基质至营养钵的1/3处，然后把苗从穴盘内取出放到营养钵的中央扶正，再把四周填满基质，

稍用力压紧，使基质低于营养钵上沿2CM～3cm。每钵一株，浇透水。

11苗期管理

11.1温湿度管理

白天温度25℃～30℃，夜间不低于13℃，基质温度不低于15℃，基质含水量在50%～60%。

11.2水肥管理

缓苗期保持基质湿润；速生期应量多次少，见干见湿；生长后期要控制浇水。速生期以氮肥为主，

磷、钾肥为辅；生长后期停止使用氮肥，适当增加磷、钾肥。追肥结合浇水进行，浓度控制在0.1%～

0.2%。速生期每月施3次。

11.3病虫害防治

贯彻预防为主，综合防治的方针，选用生物农药、高效、低毒、低残留的化学农药，交替用药，改

进施药技术，降低农药用量，化学农药按GB/T8321的规定执行。

11.4其他管理

育苗期发现容器内基质下沉，及时填满，经常挪动容器进行重新排列并截断伸出容器外的根系。

12生产记录

做好全程记录，并将记录保持2年。

3

DB32/T3306—2017

__________________________

4

DB32/T3306—2017

前  言

本标准按照GB/T1.1-2009《标准化工作导则第1部分：标准的结构及编写》给出的规则编写。

本标准由江苏农林职业技术学院提出并归口。

本标准由江苏农林职业技术学院起草。

本标准主要起草人：王永平、宗树斌、刘玉华、许建民、王珊、任焕焕。

I

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蓝莓组培脱毒种苗生产技术规程

1范围

本标准规定了蓝莓组培脱毒种苗生产技术规程的脱毒、外植体消毒、初代培养、病毒检测、继代培

养、壮苗培养、驯化生根、上钵、苗期管理、生产记录等。

本标准适用于全省蓝莓组培脱毒种苗的生产。

2规范性引用文件

下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。

凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

GB/T8321(所有部分)农药合理使用准则

3脱毒

3.1母株

选择具有品种典型特征特性、生长势强、目测无病症的优良单株。

3.2热处理钝化病毒

取母株的侧枝嫩梢，放入病毒钝化处理器，60℃热击10s。

4外植体消毒

将经热处理的嫩梢剪取放入烧杯，纱布封口，自来水冲洗30min～60min，用75%乙醇浸润130s后，

用无菌水洗净，再放入5%～10%的NaClO溶液中浸泡10min～15min后，用无菌水冲洗5次，再用无菌

滤纸吸去表面水分，置于无菌培养皿中备用。

5初代培养

5.1初代培养基

WPM+IBA0.05mg/L+ZT0.5mg/L，pH5.0。

5.2接种

在超净工作台上，用已灭菌的剪刀、镊子将消过毒的外植体均匀分成1.5cm～2.0cm的小段，每段

含1芽～2芽，接种于初代培养基中，每瓶5株～10株。注明品种、编号和接种日期。

5.3培养条件

1

DB32/T3306—2017

温度25℃±2℃、光照强度2000lx～3000lx、光照时间16h/d，培养100d～120d。

6病毒检测

抽取初代培养的蓝莓无菌苗进行蓝莓枯焦病毒(BLScV)、蓝莓急性坏死病毒(BLShV)、蓝莓鞋带病

毒(BSSV)、蓝莓红环斑病毒(BRRV)、蓝莓坏死环斑病烟草环斑病毒(TRSV)、蓝莓叶片斑点病毒(BLMV)

的病毒检测。检测方法采用PCR/RT-PCR。无病毒苗作为核心种苗继代扩繁培养。

7继代培养

7.1继代培养基

WPM+NAA0.5mg/L+ZT1mg/L，pH5.0。

7.2培养条件

温度为25℃±2℃，光照强度1000lx～3000lx，光照时间12h/d～16h/d。60d～90d培养一代，培养不

超过15代。

8壮苗培养

8.1壮苗培养基

WPM+IBA0.1mg/L，pH5.0～5.5。

8.2培养条件

温度为25℃±2℃，光照强度2000lx～3000lx，光照时间14h/d～16h/d。培养90d～120d。

9驯化生根

9.1生根设施

在苗床上搭建高度50cm的小拱棚，安装喷灌设备，苗床上面铺一层无纺布，拱棚上面覆盖塑料薄

膜，上盖遮阳网。

9.2基质

选用苔藓作为专用基质，浸泡12h甩干，湿度控制在40%～60%，塞进5×10的穴盘内。

9.3炼苗

将培养瓶放入温室内，上盖一层遮阳网，封口炼苗7d,然后打开遮阳网，把瓶盖拧松，再炼苗7d。

9.4扦插

选择生长健壮、长度5cm以上、木质化程度好的组培苗进行扦插，先用清水清洗掉培养基，剪去根

部膨大部分，去掉下部三分之一的叶片，在萘乙酸(NAA)1000mg/L的生根液中浸蘸1min，然后用镊子

捏住插穗基部，插入塞好苔藓的穴盘内压紧。每穴1株，插入的深度为2cm～3cm。

2

DB32/T3306—2017

9.5插后管理

插后立即喷水1次。15d内每天叶面喷水2次～3次，相对湿度控制在80%～100%，15d后开始生根并

长出新叶，每天喷水1次，湿度控制在70%左右，30d后去掉拱棚上的遮阳网和塑料薄膜，湿度控制在

60%左右。温度控制在20℃～30℃。

10上钵

10.1栽培容器

选用13×12黑色软质营养钵为宜。

10.2栽培基质