任务十 大肠菌群商品化试剂盒检测法

食品微生物检验任务十大肠菌群的检验——商品化试剂盒检测法任务目标知识目标1.掌握大肠菌群商品化试剂盒检测法的操作流程及数据处理。2.掌握实验室微生物无菌操作的步骤和注意事项。

素质目标技能目标培养学生形成生物安全意识、环保意识、标准意识、社会服务意识。

1.掌握大肠菌群商品化试剂盒检测法的操作步骤。2.掌握大肠菌群的数量在卫生学上的重要性。讨论：农贸市场生鲜产品如何保障安全？知识点一商品化试剂盒快速检测的意义在我们消费的食品周围环境中，存在着大量的微生物。通过商品化试剂盒快速检测的学习，可以快速的检测出微生物对食品的污染，对食品的卫生状况评价具有重要的意义。选择2～3个适宜稀释度的样品匀液，加入大肠杆菌/大肠菌群测试片36℃±1℃24h±2h或48h±2h检样25g（mL）样品+225mL稀释液，均质10倍系列稀释计数蓝色带气泡的菌落检验程序计数蓝色和红色带气泡的菌落报告大肠杆菌数报告大肠杆菌数知识点二实验器材、试剂的准备500mL烧杯1个：配制生理盐水；锥形瓶1个：装225mL0.85%无菌生理盐水；

液体样品：25mL1支、1mL4支（灭菌）移液管10mL2支

固体样品：1mL4支（灭菌）10mL2支测试片6张知识点三实验器材、试剂的准备

操作前，用镊子取酒精棉球消毒桌子、消毒手知识点四肉制品的无菌采样及样品稀释在天平上称取25g样品+225mL无菌生理盐水知识点五大肠菌群测试片无菌接种揭开上层膜吸取1mL样品匀液垂直滴加在测试片的中央将上层膜缓慢盖下把压板（平面底朝下）放置在上层膜中央，轻轻地压下使样液均匀覆盖于圆形的培养面积上拿起压板，静置至少1min以使培养基凝固知识点六培养及典型菌落计数注意选择设置为36℃±1℃培养箱培养18-24h。蓝色有气泡和红色有气泡的菌落数之和为大肠菌群数。测试片圆形面积边缘上及边缘以外的菌落不做计数知识点七数据处理与报告

选取菌落数在15CFU~150CFU之间的测试片计数大肠菌群或大肠杆菌菌落总数。低于15CFU的测试片记录具体菌落数，大于150CFU的记录为多不可计。每个稀释度的大肠菌群或大肠杆菌菌落数应采用两个测试片的平均数。

若只有一个稀释度测试片的菌落数在适宜计数范围内，计算两个测试片大肠菌群或大肠杆菌菌落数的平均值，再将平均值乘以相应稀释倍数，作为每克（或每毫升）样品中大肠菌群或大肠杆菌菌落数结果。知识点七数据处理与报告

若有两个连续稀释度的测试片菌落数在适宜计数范围内，按以下公式计算：式中：N———样品中大肠菌群或大肠杆菌总数；a———测试片（含适宜范围菌落数的测试片）大肠菌群或大肠杆菌菌落数之和；n1———第一稀释度（低稀释倍数）测试片个数；n2———第二稀释度（高稀释倍数）测试片个数；d———稀释因子（第一稀释度）知识点七数据处理与报告

若所有稀释度测试片上的菌落数均小于15CFU，则应按稀释度最低的测试片上的平均菌落数乘以稀释倍数计算。若所有稀释度（包括液体样品原液）的测试片上均无菌落生长，则以小于1乘以最低稀释倍数计算。

知识点七数据处理与报告若所有稀释度的测试片菌落数均不在15CFU～150CFU之间，其中一部分小于15CFU或大于150CFU时，则以最接近15CFU或150CFU的平均菌落数乘以稀释倍数计算。计数菌落数大于150CFU的测试片时，可计数一个或两个具有代表性的方格内的菌落数，换算成单个方格内的菌落数后乘以20即为测试片上估算的菌落数（圆形生长面积为20cm2）生化处理知识点八检测过程中所用的所有器具、培养后的培养皿等先进行生化处理，再根据实际情况分类处理。1.[单选题]在大肠菌群商品化试剂盒检测法中，首先将食品样品做成（

）倍递增稀释液。A.1：5B.1：10C.1：15D.1：202.[单选题]大肠杆菌/大肠菌群测试片接种时，用吸管吸取（

）样品匀液垂直滴加在测试片的中央A.2mLB.3mLC.1mLD.5mL3.[判断