新生隐球菌的致病机理

CHANGZHENGHOSPITAL,SHANGHAI5/8/20241新生隐球菌的致病机理隐球菌病的致病菌5/8/20242新生隐球菌的致病机理CC.5/8/20243新生隐球菌的致病机理MaturebasidiaPostmeioticmitosisMeiosisKaryogamyinbasidiumDikaryotichyphaeConjugationHaploidcycleaaLifeCycleMATaXMATa5/8/20244新生隐球菌的致病机理BloodstreamBrainCryptococcosis:Routeofinfectionanddissemination5/8/20245新生隐球菌的致病机理隐球菌病病原菌:新生隐球菌感染途径:吸入，皮肤，胃肠道？分布:世界范围

脑、肺、皮肤、骨和关节

HIV,淋巴瘤,激素治疗,器官移植

原发性CD4淋巴细胞减少未治疗的脑膜炎死亡率为100%

易感因素:易感器官：预后:5/8/20246新生隐球菌的致病机理新生隐球菌的毒性因子荚膜黑素磷脂酶37℃下生长良好5/8/20247新生隐球菌的致病机理新生隐球菌致病机理中

几个关键问题新生隐球菌是如何穿过血脑屏障后进入中枢神经系统的？为什么新生隐球菌易于感染中枢神经系统？新生隐球菌进入机体的途径是否只有吸入肺部后入血一个？5/8/20248新生隐球菌的致病机理新生隐球菌通过血脑屏障的机制研究人脐静脉内皮细胞（HUVEC）建立血脑屏障模型，观察新生隐球菌对HUVEC的影响新生隐球菌静脉感染C57BL/6小鼠后，检测大脑皮质内新生隐球菌感染情况，大脑皮质内细胞凋亡及大脑皮质中特异蛋白的表达5/8/20249新生隐球菌的致病机理Mousemodelofcryptococcosis5/8/202410新生隐球菌的致病机理血脑屏障模式图5/8/202411新生隐球菌的致病机理

紧密连接血脑屏障病原体1231:细胞内侵袭2:细胞旁通过－打开紧密连接3:

木马机制：通过巨嗜细胞穿越ECM巨嗜细胞病原体穿越血脑屏障的方式

5/8/202412新生隐球菌的致病机理HBMEC单层半通透膜Filter-insert脑侧血液侧新生隐球菌检测新生隐球菌通过血脑屏障的体外模型5/8/202413新生隐球菌的致病机理新生隐球菌对血脑屏障内皮细胞凋亡的影响

A:对照组B:2hC:6hD:12h新生隐球菌侵袭血脑屏障EC细胞的凋亡率5/8/202414新生隐球菌的致病机理新生隐球菌侵袭血脑屏障透射电镜A:对照组B:0.5hC:0.5hD:0.5hE:0.5hF:6hG:6hH:12h5/8/202415新生隐球菌的致病机理新生隐球菌侵袭血脑屏障EC扫描电镜结果

A:对照组B:2hC:6hD:12h5/8/202416新生隐球菌的致病机理HUVECBcl-2(抑凋亡基因)的表达被抑制

A：对照组B：2hC：6h：D：12h5/8/202417新生隐球菌的致病机理HUVECBax

(凋亡基因)的表达被启动A：对照组B：2hC：6h：D：12h5/8/202418新生隐球菌的致病机理新生隐球菌对血脑屏障紧密连接通透性的影响HUVEC紧密连接相关蛋白表达紧密连接胞质附着蛋白ZO-1血管渗透因子VEGFIL-65/8/202419新生隐球菌的致病机理新生隐球菌对C57BL/6小鼠大脑皮质作用研究

大脑皮质PAS染色

A：CgroupB：CTXgroupC：0.5hD：2hE：6hF：12hG：24hH：72h大脑皮质透射电镜A：CgroupB：24hC：72hD：CgroupE：24hF：72h5/8/202420新生隐球菌的致病机理新生隐球菌对C57BL/6小鼠大脑皮质作用研究小鼠大脑皮质Bcl-2在不同时相点的比较不同时相点的小鼠大脑皮质凋亡细胞比较不同时相点的小鼠大脑皮质Bax比较5/8/202421新生隐球菌的致病机理新生隐球菌对C57BL/6小鼠大脑皮质作用研究

5/8/202422新生隐球菌的致病机理初步结论新生隐球菌入血后到达血脑屏障，通过相关细胞因子如IL-6和VEGF等作用引起脑微血管内皮细胞的凋亡，紧密连接开放，细胞间隙增大，并可能使血脑屏障完整性被破坏，穿越血脑屏障，感染宿主脑组织5/8/202423新生隐球菌的致病机理隐球菌脑膜炎发病机制新生隐球菌的跨膜作用穿越脑微血管内皮细胞紧密连接脑微血管内皮细胞凋亡其它相关因子导致的通透性的增加5/8/202424新生隐球菌的致病机理新生隐球菌嗜中枢性的研究利用蛋白质组学技术分析新生隐球菌与血管内皮细胞共孵育后血管内皮细胞蛋白质谱的变化筛选差异表达蛋白，并在基因的转录层面进行验证

5/8/202425新生隐球菌的致病机理血管内皮细胞总蛋白差异表达谱

实验组蛋白二维凝胶电泳图谱对照组蛋白二维凝胶电泳图谱5/8/202426新生隐球菌的致病机理实验组与对照组细胞蛋白表达差异共找到可信差异表达蛋白点19个5个蛋白点仅在对照组细胞中表达3个蛋白点仅在实验组细胞中表达10个蛋白点在实验组细胞中表达降低1个蛋白点在实验组细胞中表达升高

5/8/202427新生隐球菌的致病机理差异表达蛋白点肽指纹谱鉴定S100A10PrxⅠ

Prohibitin(PHB)

HSP27Malate

dehydrogenase

CacyBP

PSA7_HUMANcofilin

5/8/202428新生隐球菌的致病机理隐球菌嗜中枢性可能的相关机制增强细胞骨架活动能力，促进细胞胞吞胞吐活动减少HUVEC对氧应激的耐受能力，细胞损伤增加，增殖能力下降促进细胞凋亡影响了HUVEC正常的细胞内信号转导过程抑制细胞能量代谢

5/8/202429新生隐球菌的致病机理皮肤隐球菌感染的研究小鼠原发性皮肤隐球菌感染模型的建立宿主免疫状态、隐球菌变种和荚膜与皮肤隐球菌感染的关系小鼠隐球菌皮肤感染后是否发生播散人角质形成细胞株－HaCat体外与新生隐球菌相互作用5/8/202430新生隐球菌的致病机理5/8/202431新生隐球菌的致病机理小鼠原发性皮肤隐球菌感染模型传染性软疣样皮损溃疡结节样皮损PAS染色5/8/202432新生隐球菌的致病机理小鼠隐球菌感染后的血行播散免疫抑制与免疫正常小鼠各个脏器及血液真菌培养均为阴性免疫抑制小鼠血清乳胶凝集试验阳性

乳胶凝集试验是目前比较成熟的技术，在去除试验本身因素影响后，其阳性率接近100％

免疫严重受损的患者，皮肤局部创伤后大剂量接种隐球菌还是可能引起播散性的隐球菌感染5/8/202433新生隐球菌的致病机理隐球菌皮肤致病性中的影响因素免疫抑制的作用可以使隐球菌感染皮损出现时间提前，感染加重。无荚膜株与父代有荚膜株在皮肤的致病力方面没有明显差别两个变种之间的致病力没有显著差别5/8/202434新生隐球菌的致病机理新生隐球菌与角质形成细胞的体外相互作用

5/8/202435新生隐球菌的致病机理透射电镜观察新生隐球菌与角质形成细胞的作用

角质形成细胞中的B3501，可见菌体正在出芽。角质形成细胞中的cap64，可见菌体中出现空泡。5/8/202436新生隐球菌的致病机理新生隐球菌触发角质形成细胞表面蛋白酪氨酸残基磷酸化空白对照B3501作用2h