呼吸系统呼吸系统常见实验检测及常见疾病实验诊断

呼吸系统常见实验检测及常见疾病实验诊断1呼吸系统呼吸系统常见实验检测及常见疾病实验诊断5/8/2024第一部分标本采集第二部分细菌真菌涂片检查第三部分细菌真菌培养鉴定第四部分细菌真菌耐药性检查第五部分真菌G和GM实验第六部分败血症患者血液培养2呼吸系统呼吸系统常见实验检测及常见疾病实验诊断5/8/2024痰液（下呼吸道）和咽拭子（咽喉部）；可进行涂片查细菌、真菌或抗酸杆菌；可进行细菌、真菌或结核杆菌培养；上述检查只要一口痰即可。怀疑脓毒血症，抽取静脉血进行血液培养。怀疑深部真菌感染，抽取静脉血G和GM实验。第一部分标本采集3呼吸系统呼吸系统常见实验检测及常见疾病实验诊断5/8/2024采集深部痰（sputum），不是唾液和口水；自然咳痰法(Expectoratedsputum)；最好为清晨第一口痰，用清水反复漱口用力咳出第一口痰于无菌容器内；支气管镜采集法（Bronchoscopy）。标本尽快送检，室温保存不能超过2小时。标本采集

4呼吸系统呼吸系统常见实验检测及常见疾病实验诊断5/8/2024一、革兰染色二、抗酸染色第二部分细菌真菌涂片检查5呼吸系统呼吸系统常见实验检测及常见疾病实验诊断5/8/2024Basicprinciple

?Peptidoglycan.Procedure

?crystalviolet,iodine,alcohol.carbofuchsinred.1Gram-stained6呼吸系统呼吸系统常见实验检测及常见疾病实验诊断5/8/2024Results,

G+orG-bacteria,cocciorbacillibacteria,bacteriaorfungi,inoilimmersionfield.1Gram-stained7呼吸系统呼吸系统常见实验检测及常见疾病实验诊断5/8/20248呼吸系统呼吸系统常见实验检测及常见疾病实验诊断5/8/20249呼吸系统呼吸系统常见实验检测及常见疾病实验诊断5/8/202410呼吸系统呼吸系统常见实验检测及常见疾病实验诊断5/8/202411呼吸系统呼吸系统常见实验检测及常见疾病实验诊断5/8/202412呼吸系统呼吸系统常见实验检测及常见疾病实验诊断5/8/202413呼吸系统呼吸系统常见实验检测及常见疾病实验诊断5/8/202414呼吸系统呼吸系统常见实验检测及常见疾病实验诊断5/8/202415呼吸系统呼吸系统常见实验检测及常见疾病实验诊断5/8/2024WBC>25/LP上皮细胞<10/LP提示炎症培养结果意义大16呼吸系统呼吸系统常见实验检测及常见疾病实验诊断5/8/2024Basicprinciple?Lipid.

Procedure?carbolfuchsinred,hydrochloricacid3%alcohol,methyleneblue.2acid-faststain17呼吸系统呼吸系统常见实验检测及常见疾病实验诊断5/8/2024Results,

acid-fastbacteriared,otherbacteriaandbackgroundblue.2acid-faststain18呼吸系统呼吸系统常见实验检测及常见疾病实验诊断5/8/2024TheresultreportmodeNegative,acid-fastbacillinotfound,Positive(1or2),1or2wholevisualfield,Positive（+）,3to9wholevisualfield,Positive（++）,10to99wholevisualfield,Positive（+++）,1to9everyvisualfield,Positive（++++）,>10everyvisualfield.

19呼吸系统呼吸系统常见实验检测及常见疾病实验诊断5/8/2024抗酸阳性，约90%为结核分枝杆菌，约10%为非典型分支杆菌，建议荧光定量PCR快速鉴别；可进行结核杆菌培养鉴定（质谱、PCR、测序），阳性约1个月，2个月发阴性结果；为提高阳性率，建议晨痰深咳痰，并连续送检3天；或支气管镜，多张刷片，送检。抗酸染色注意事项

20呼吸系统呼吸系统常见实验检测及常见疾病实验诊断5/8/2024第三部分细菌真菌培养鉴定21呼吸系统呼吸系统常见实验检测及常见疾病实验诊断5/8/2024常见的细菌：金黄色葡萄球菌、凝固酶阴性葡萄球菌；肺炎链球菌、化脓链球菌；肠球菌、卡他莫拉菌；脑膜炎奈瑟菌；大肠埃希菌、克雷伯杆菌、铜绿假单胞菌；流感嗜血杆菌；军团菌；结核分枝杆菌、非典型分枝杆菌。支原体、衣原体。痰液标本中常见的病原体

22呼吸系统呼吸系统常见实验检测及常见疾病实验诊断5/8/2024常见的真菌：白假丝酵母菌、隐球菌、曲霉菌、毛霉菌。常见的病毒：腺病毒、流感病毒、副流感病毒、呼吸道合胞病毒、巨细胞病毒、单纯疱疹病毒、冠状病毒和麻疹病毒。痰液标本中常见的病原体

23呼吸系统呼吸系统常见实验检测及常见疾病实验诊断5/8/2024报“分离出某种致病菌，比例，药敏”：分离出致病菌，而不是常见的正常菌群，且具有优势，约占血平板菌群总数的百分比%；同一病人如痰中连续分离出同一种菌，3天内如果已经做过药敏试验，则不再做药敏；同一病人痰中细菌的种类和比例，会随着治疗情况变化，也受留取痰标本的质量影响。结果报告形式

24呼吸系统呼吸系统常见实验检测及常见疾病实验诊断5/8/2024报“正常菌群”：培养出细菌种类较多，无优势菌、无致病菌；可能标本采集不合格，为口水样痰；可能病人抵抗力弱，由条件致病菌（非致病菌）引起感染。结果报告形式

25呼吸系统呼吸系统常见实验检测及常见疾病实验诊断5/8/2024报“正常菌群”：可能病毒、支原体、衣原体等血平板无法培养的病原体；可能是生长缓慢或难于培养的细菌；未来发展方向利用高通量测序技术。结果报告形式

26呼吸系统呼吸系统常见实验检测及常见疾病实验诊断5/8/2024第四部分细菌真菌耐药性检查一、常用药敏试验方法

二、常用抗生素种类

三、药敏试验结果解读27呼吸系统呼吸系统常见实验检测及常见疾病实验诊断5/8/2024一、常用药敏试验方法(1)MIC稀释法(2)K-B纸片扩散法(3)E-test法28呼吸系统呼吸系统常见实验检测及常见疾病实验诊断5/8/2024MIC稀释法一般在琼脂或肉汤中将抗菌药物系列对倍稀释，定量接种待检菌，35℃培养18至24小时后观察结果；抑制检测菌肉眼可见生长的最低药物浓度，即最小抑菌浓度；MIC稀释法结果以MIC（μg/ml）数值报告，数值越小越敏感，与K-B法相反；(1)MIC稀释法29呼吸系统呼吸系统常见实验检测及常见疾病实验诊断5/8/2024MIC稀释法药物浓度主要包括折点浓度，可以判断敏感、中介、耐药，少数药物如亚胺培南、美罗培南、头孢他啶，万古霉素、替考拉宁、利奈唑胺等在判断敏感的基础上，又增加了一些低浓度，以利于合理选用药量，不同抗生素判断的折点浓度不同，故不同抗生素之间的MIC值没有可比性。30呼吸系统呼吸系统常见实验检测及常见疾病实验诊断5/8/2024(2)K-B纸片扩散法补充药敏板没有的抗生素，如头孢哌酮/舒巴坦。含有定量抗菌药物的纸片，贴在已接种待检菌的MH平板上，纸片中所含的药物，吸取琼脂中的水分溶解后，不断地向纸片周围区域扩散，形成递减的药物梯度浓度。31呼吸系统呼吸系统常见实验检测及常见疾病实验诊断5/8/2024在纸片周围抑菌浓度范围内，细菌的生长被抑制，形成透明的抑菌圈。抑菌圈大小，反映待检菌对测定药物敏感程度。不同抗生素有不同的判断标准，不同抗生素的抑菌圈大小没有可比性。32呼吸系统呼吸系统常见实验检测及常见疾病实验诊断5/8/2024(3)E-test法结合K-B法和稀释法的优点；原理同稀释法检测，操作同K-B法简单；试纸条上含干化、稳定、浓度由高到低呈指数梯度分布的某种抗菌药物。补充鉴定药敏板没有的抗生素，如替加环素（老虎素）。33呼吸系统呼吸系统常见实验检测及常见疾病实验诊断5/8/2024二、常用抗生素种类

临床和实验室标准化委员会（clinicalandlaboratorystandardsofinstitute,CLSI）系列指南，每年更新。34呼吸系统呼吸系统常见实验检测及常见疾病实验诊断5/8/2024多烯类：两性霉素B、制霉菌素。唑类：克霉唑、咪康唑、益康唑、氟康唑、酮康唑、伊曲康唑、伏立康唑。核苷类：氟胞嘧啶。棘球白素类：卡泊芬净。真菌药敏试验常用药物35呼吸系统呼吸系统常见实验检测及常见疾病实验诊断5/8/2024三、药敏试验结果解读临床和实验室标准化委员会（clinicalandlaboratorystandardsofinstitute,CLSI）系列指南，每年更新。36呼吸系统呼吸系统常见实验检测及常见疾病实验诊断5/8/2024敏感（Susceptible，S）是指菌株能被使用推荐剂量治疗感染部位可达到的抗菌药物浓度所抑制，推荐使用。37呼吸系统呼吸系统常见实验检测及常见疾病实验诊断5/8/2024中介（Intermediate，I）指抗菌药物MIC接近血液和组织中通常可达到的浓度，疗效低于敏感菌株。还表示药物在生理浓集的部位具有临床效力（如尿液中的喹诺酮类和β-内酰胺类），或者可用高于正常剂量的药物进行治疗（如β-内酰胺类）。另外，中介还作为缓冲区，以防止微小的、未受控制的技术因素导致较大的错误结果，特别是对那些药物毒性范围窄的药物。38呼吸系统呼吸系统常见实验检测及常见疾病实验诊断5/8/2024耐药（Resistant，R）指菌株不能被常规剂量抗菌药物达到的浓度所抑制，和/或证明MIC或抑菌圈直径落在某些特殊的微生物耐药机制范围（如β-内酰胺酶），在治疗研究中表现抗菌药物对菌株的临床疗效不可靠。39呼吸系统呼吸系统常见实验检测及常见疾病实验诊断5/8/2024

产超广谱β-内酰胺酶G-杆菌(extendedspectrumβ-lactamaseG-bacillus，ESBLs)

该酶是指由质粒介导的能水解所有青霉素类、头孢菌素类及单环β-内酰胺类氨曲南的一类酶，主要见于肺炎克雷伯菌和大肠埃希菌。40呼吸系统呼吸系统常见实验检测及常见疾病实验诊断5/8/2024

耐碳青霉烯类抗生素的G-杆菌

指对碳青霉烯类抗生素亚胺培南、美罗培南等耐药的G-杆菌，主要为不动杆菌属（鲍曼和非鲍曼不动杆菌）、铜绿假单胞菌，近几年出现耐碳青霉烯类抗生素的肠杆菌科，需引起重视。41呼吸系统呼吸系统常见实验检测及常见疾病实验诊断5/8/2024

耐甲氧西林葡萄球菌（methecillinresistancestaphylococcus，MRS）

CLSI规定，葡萄球菌如对苯唑西林（或甲氧西林）耐药：对青霉素类、头孢菌素类、碳青霉烯类和含酶抑制剂的复方制剂均应报告耐药，而不考虑体外药敏结果。42呼吸系统呼吸系统常见实验检测及常见疾病实验诊断5/8/2024

耐高浓度庆大霉素肠球菌（HighlevelaminoglycosidesresistanceinEnterococcus）

CLSI规定，肠球菌引起的全身性严重感染，常联合应用β-内酰胺类和氨基糖苷类抗生素，如果肠球菌对高浓度庆大霉素耐药，则联合用药无效。耐万古霉素肠球菌（VRE），用E-test法验证。43呼吸系统呼吸系统常见实验检测及常见疾病实验诊断5/8/2024上述多重耐药菌、泛耐药菌，要求每天在检验单审核结束后，及时向临床科室和医院感染控制科报告，以及时采取相应的防控措施，避免多重耐药菌、泛耐药菌的扩散、流行或暴发。44呼吸系统呼吸系统常见实验检测及常见疾病实验诊断5/8/2024第五部分真菌G和GM实验45呼吸系统呼吸系统常见实验检测及常见疾病实验诊断5/8/2024真菌（1-3）-β-D-葡聚糖检测

（真菌G试验）46呼吸系统呼吸系统常见实验检测及常见疾病实验诊断5/8/2024葡聚糖位于真菌细胞壁，1,3-β-D-葡聚糖占真菌壁成分50%以上，是真菌细胞壁上的特有成分。47呼吸系统呼吸系统常见实验检测及常见疾病实验诊断5/8/2024当真菌进入人体血液或深部组织后，经吞噬细胞吞噬及消化，1-3-β-D-葡聚糖可从胞壁中释放出来，从而使血液或穿刺液中含量增高，并与真菌感染量相关。在浅部真菌感染中，(1-3)-β-D-葡聚糖不被释放出来，故其在血液中含量不增高。真菌（1-3）-β-D-葡聚糖特性48呼吸系统呼吸系统常见实验检测及常见疾病实验诊断5/8/2024在念珠菌和曲霉菌细胞壁中含量较多。能用于检测念珠菌、毛孢子菌、曲霉菌、镰刀菌、卡氏肺孢子菌深部真菌感染。不能检测隐球菌、接合菌（根霉/毛霉等）。真菌（1-3）-β-D-葡聚糖特性49呼吸系统呼吸系统常见实验检测及常见疾病实验诊断5/8/2024采用无热原采血管；抽血后2h内送检；血标本4-8℃最多存放48h；检测环境应保持清洁。分析前注意事项50呼吸系统呼吸系统常见实验检测及常见疾病实验诊断5/8/2024使用纤维素膜进行血透，标本或患者暴露于纱布或其他含有葡聚糖的材料；静脉输注免疫球蛋白、白蛋白、凝血因子或血液制品；

以下情况可1,3-β-D-葡聚糖假阳性51呼吸系统呼吸系统常见实验检测及常见疾病实验诊断5/8/2024链球菌血症；使用多糖类抗癌药物、放化疗造成的粘膜损伤导致食物中的葡聚糖或定植的念珠菌经胃肠道进入血液等也可能造成假阳性。

以下情况可1,3-β-D-葡聚糖假阳性52呼吸系统呼吸系统常见实验检测及常见疾病实验诊断5/8/2024早期诊断：侵袭性真菌感染增多且复杂，早期症状无特异性，往往被原发病掩盖，病程长，发现较晚，死亡率高。因此对深部真菌感染治疗成败的关键在于早期诊断。指导用药：快速确定真菌感染后，选择好治疗方案,有针对性使用抗真菌类药物。为临床选用副作用小，疗效高，价格适宜的药物提供准确的依据。真菌G试验临床价值53呼吸系统呼吸系统常见实验检测及常见疾病实验诊断5/8/2024评价效果：应用抗真菌药物后，定期检测血浆中葡聚糖浓度变化，评价选用药物的有效性。监护病程：监护深部真菌感染易感人群的病发状态。真菌G试验临床价值54呼吸系统呼吸系统常见实验检测及常见疾病实验诊断5/8/2024真菌半乳甘露聚糖抗原检测（GM试验）主要用于侵袭性曲霉菌感染的早期诊断；曲霉菌特有的细胞壁多糖成分是β（1-5）呋喃半乳糖残基，菌丝生长时，半乳甘露聚糖从薄弱的菌丝顶端释放，是最早释放的抗原；GM释放量与菌量成正比，可以反映感染程度；连续检测GM可作为治疗疗效的监测。55呼吸系统呼吸系统常见实验检测及常见疾病实验诊断5/8/2024第六部分败血症患者血液培养56呼吸系统呼吸系统常见实验检测及常见疾病实验诊断5/8/2024目前我国社会老龄化日趋严重，慢性病及恶性肿瘤、器官移植、爱滋病和结核病病人不断增多，侵袭性诊疗技术广泛应用，败血症发病率不断增加。败血症病死率30%以上；早期病原学诊断和合理抗生素治疗，明显降低败血症病死率。57呼吸系统呼吸系统常见实验检测及常见疾病实验诊断5/8/2024血液培养的送检指征：发热>38℃，或低温<36℃；白细胞增多>10×109/L，“核左移”白细胞增多；粒细胞减少，成熟的多核白细胞<1×109/L；血小板减少；皮肤粘膜出血；心率>90次/分；呼吸频率>20次/分；二氧化碳分压<32mmHg；昏迷；多器官衰竭；血清降钙素原和C反应蛋白升高；严重局部感染（如严重肺炎同时采痰液和血液）。58呼吸系统呼吸系统常见实验检测及常见疾病实验诊断5/8/2024最好在抗生素使用前采集，若已用抗菌药须，则尽量避开血药浓度的高峰期，最好在下次用药前。血液标本采集时间59呼吸系统呼吸系统常见实验检测及常见疾病实验诊断5/8/2024建议第一次可在病人发热初期或高峰期采集，