2024年-唾液淀粉酶活性的观察

1实验三唾液淀粉酶活性的观察动物医学院动物生化教研室2掌握酶的催化活性，酶的高效性和特异性了解各种因素（如温度、pH及一些化学物质）对酶活性的影响唾液淀粉酶的制备和活性观察一、实验目的3二、实验原理酶是生物体内具有催化功能的生物大分子，也叫生物催化剂。酶活性:酶的催化能力,用催化化学反应的速度表示酶活性的测定方法：1）定底物2）定时间影响酶活性的因素是多方面的，如温度、pH,激活剂和抑制剂等都会影响酶的催化活性。二、实验原理pH值的影响:能使酶活性达到最高时的pH值，称为该酶的最适pH。温度的影响:在一定温度范围内，随着温度的升高，酶促反应速度增加，直至达到最大值。在一定条件下，能使酶活性达到最高的温度即酶的最适温度。激活剂和抑制剂的影响:

能增高酶活性的物质即称为酶的激活剂，能降低酶活性却又不使酶变性的物质叫酶的抑制剂。4

本实验以淀粉为底物,淀粉酶作用下得到各种糊精乃至麦芽糖、少量葡萄糖等水解产物。用碘液检查酶促淀粉的水解程度，来说明温度、pH及化学物质对酶活力的影响。

淀粉酶

淀粉酶淀粉——————→糊精—————→麦芽糖+少量葡萄糖加碘后；（兰色）（紫红色、暗褐色或红色等）（棕黄色，碘本身颜色）5二、实验原理影响酶活性的因素

1）温度2）pH3）激活剂和抑制剂酶的特性（专一性）

还原糖和斑氏（Benedict）试剂的反应原理

C6H12O6+2Cu(OH)2C5H11O5.COOH+Cu2O+2H2OOH-加热实验原理6三、试剂及器材1.试剂•（1）0.5%(w/v)淀粉溶液•（2）稀碘溶液•（3）不同pH缓冲液(pH5.0、6.8、8.0)•（4）1%(w/v)NaCl溶液•（5）1%(w/v)CuSO4溶液2.器材•比色板、水浴锅、刻度吸管及滴管7四、操作步骤1.温度对酶活力的影响

取3支试管，编号后按下表操作:8试管编号1230.5%淀粉555pH6.8缓冲液0.50.50.5反应条件置冰水浴中置37℃水浴中置沸水浴中稀释唾液111单位：mL在干净的比色板上，于各孔穴中分别滴加2滴碘液。每隔1min从第2支试管中取反应液1滴，与比色板孔穴中的碘液混合，观察颜色的变化。待第2支试管中的反应液与比色板孔穴中的碘液混合后颜色呈棕色时，取出试管，并将在沸水浴中处理的试管用冷水冷却，然后向各试管中滴加碘液1-3滴。摇匀后观察并记录各管颜色，比较各管中淀粉水解的程度，说明温度对酶活性的影响。92.pH值对酶活力的影响取3支试管，按下表编号后进行实验。10四、操作步骤单位：mL试剂1230.5%淀粉222pH5.0缓冲液2——pH6.8缓冲液—2—pH8.0缓冲液——2稀释唾液111摇匀后，将各管置于37℃水浴中处理。（1）每隔1min从pH6.8的试管中取出1滴反应液滴于预先滴加稀碘液的白瓷板上，观察其颜色变化。（2）待颜色呈棕色时，向各管中加稀碘液1-3滴。观察各管颜色，比较各管中淀粉水解的程度，解释pH对酶活性的影响。113.酶反应的特异性取2支试管，按下表编号后进行实验。12四、操作步骤单位：mL试剂120.5%淀粉2—0.5%蔗糖—2稀释唾液11将各管摇匀后，一起放入37℃水浴中保温10min。取出试管，分别加入斑氏试剂1mL，混匀。将各管置于沸水浴中煮沸2-5min。观察并解释结果。134.激活剂与抑制剂对酶活力的影响取3支试管，按下表编号后进行实验。14四、操作步骤单位：mL试剂1230.5%淀粉333pH6.8缓冲液0.50.50.5