DB32T3889-2020河滩冬青组织培养技术规程

ICS65.020.20

B61

DB32

江苏省地方标准

DB32/T3889—2020

河滩冬青组织培养技术规程

TechnicalregulationfortissuecultureofIlexmetabaptista

2020-10-13发布2020-11-13实施

江苏省市场监督管理局发布

DB32/T3899—2020

河滩冬青组织培养技术规程

1范围

本标准规定了河滩冬青组织培养的母株选择、外植体选择与处理、初代培养、继代增殖、瓶外生根

培养、增殖苗扦插、插后管理和记录。

本标准适用于河滩冬青的组培快繁。

2规范性引用文件

下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的

修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用

于本标准。

LY/T1882—2010林木组织培养育苗技术规程

3母株选择

选择河滩冬青优树株系或无性系分株。

4外植体选择与处理

4.1选择

在4月~6月，选择连续3d以上的晴天，从母株上剪取生长健壮无病虫害的当年生萌芽条作为外

植体，截取部位以萌芽条的中、下部为宜，规格以长度10cm~15cm、直径3mm左右为宜。

4.2灭菌

用中性洗洁精洗净外植体，并用自来水冲洗10min~15min。在超净工作台上，用75%乙醇溶液消

毒外植体30s，无菌水冲洗2次；再用10%次氯酸钠溶液浸泡外植体8min~10min，无菌水漂洗2次，

每次5min，随后置于灭菌处理过的滤纸上吸去表面水分。

5初代培养

5.1培养基

诱导培养基：MS+0.2mg/LZT+2.0mg/L6-BA+0.5g/L活性炭，pH5.7。培养基制备按照LY/T

1882—2010的规定进行。

5.2诱导培养

将经灭菌处理的外植体剪去接触灭菌液的伤口部位，切成约1.0cm带芽茎段，接种在含有诱导培

1

DB32/T3899—2020

养基的培养瓶中，培养温度为24℃~26℃，光照强度为1500lx~3000lx，光照时间为12h~15h。培养

30d，长成6cm~8cm高的无菌试管苗。

6继代增殖

6.1培养基

继代培养基：MS+4.0mg/LZT+0.2mg/LIBA+活性碳0.5g/L，pH5.7。培养基制备按照LY/T

1882—2010的规定进行。

6.2继代培养

将诱导培养的试管苗剪成1cm~2cm带芽茎段垂直接种于继代培养基。培养温度为24℃~26℃，

光照强度为1500lx~3000lx，光照时间为12h~15h。每隔50d继代1次。

7瓶外生根培养

7.1设施

宜在温室进行培养。

7.2容器

宜采用塑料穴盘，穴孔呈倒锥形，口径约4.5cm，高约5cm。旧穴盘需清洗消毒后才可使用。

7.3基质

基质选用pH6.2~pH6.8的草炭。

7.4基质的消毒处理

用0.2%高锰酸钾和0.2%多菌灵交替喷洒扦插基质至完全湿润，用薄膜覆盖堆捂，待使用前2d~3d

揭膜晾晒，装入容器后即可扦插。

8增殖苗扦插

8.1插条处理

选择生长健壮的增殖苗，剪去芽苗根部膨大部分，清水清洗根部，按单株剪下，每株剪成3cm~4cm

带芽茎段作为插条。

8.2扦插

插条基部采用500mg/LIBA浸泡30min，处理后用镊子将组培苗基部插入基质，深度为0.8cm~1.0

cm。

8.3覆膜

扦插后浇透水，在穴盘上覆盖保鲜膜，保温保湿。

2

DB32/T3899—2020

9插后管理

9.1环境控制

置于温度20℃~30℃、光照2000lx~2500lx、光周期16h/d、湿度80%的环境条件下培养，2周~

3周后揭膜。

9.2水肥管理

每隔3d浇一次水，每两周喷一次叶面肥，喷施浓度为0.1%~0.3%的尿素溶液。

9.3病害防治

每月喷一次杀菌剂，宜采用0.1%的多菌灵和百菌清混合药剂。

9.4出苗

苗高10cm~15cm，根系发达，无病虫害，即可出苗。

10记录

根据组织培养技术规程内容进行记录，按时填写，做到准确无误，记录保存2年以上。

_________________________________

3

DB32/T3889—2020

前  言

本标准按照GB/T1.1—2009给出的规则起草。

本标准由江苏省林业局提出并归口。

本标准由江苏省林业科学研究院起草。

本标准主要起草人：张敏、陈庆生、周鹏、黄婧、郝明灼、李飞。

I

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河滩冬青组织培养技术规程

1范围

本标准规定了河滩冬青组织培养的母株选择、外植体选择与处理、初代培养、继代增殖、瓶外生根

培养、增殖苗扦插、插后管理和记录。

本标准适用于河滩冬青的组培快繁。

2规范性引用文件

下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的

修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用

于本标准。

LY/T1882—2010林木组织培养育苗技术规程

3母株选择

选择河滩冬青优树株系或无性系分株。

4外植体选择与处理

4.1选择

在4月~6月，选择连续3d以上的晴天，从母株上剪取生长健壮无病虫害的当年生萌芽条作为外

植体，截取部位以萌芽条的中、下部为宜，规格以长度10cm~15cm、直径3mm左右为宜。

4.2灭菌

用中性洗洁精洗净外植体，并用自来水冲洗10min~15min。在超净工作台上，用75%乙醇溶液消

毒外植体30s，无菌水冲洗2次；再用10%次氯酸钠溶液浸泡外植体8min~10min，无菌水漂洗2次，

每次5min，随后置于灭菌处理过的滤纸上吸去表面水分。

5初代培养

5.1培养基

诱导培养基：MS+0.2mg/LZT+2.0mg/L6-BA+0.5g/L活性炭，pH5.7。培养基制备按照LY/T

1882—2010的规定进行。

5.2诱导培养

将经灭菌处理的外植体剪去接触灭菌液的伤口部位，切成约1.0cm带芽茎段，接种在含有诱导培

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DB32/T3899—2020

养基的培养瓶中，培养温度为24℃~26℃，光照强度为1500lx~3000lx，光照时间为12h~15h。培养

30d，长成6cm~8cm高的无菌试管苗。

6继代增殖

6.1培养基

继代培养基：MS+4.0mg/LZT+0.2mg/LIBA+活性碳0.5g/L，pH5.7。培养基制备按照LY/T

1882—2010的规定进行。

6.2继代培养

将诱导培养的试管苗剪成1cm~2cm带芽茎段垂直接种于继代培养基。培养温度为24℃~26℃，

光照强度为1500lx~3000lx，光照时间为12h~15h。每隔50d继代1次。

7瓶外生根培养

7.1设施

宜在温室进行培养。

7.2容器

宜采用塑料穴盘，穴孔呈倒锥形，口径约4.5cm，高约5cm。旧穴盘需清洗消毒后才可使用。

7.3基质

基质选用pH6.2~pH6.8的草炭。

7.4基质的消毒处理

用0.2%高锰酸钾和0.2%多菌灵交替喷洒扦插基质至完全湿润，用薄膜覆盖堆捂，待使用前2d~3d

揭膜晾晒，装入容器后即可扦插。

8增殖苗扦插

8.1插条处理

选择生长健壮的增殖苗，剪去芽苗根部膨大部分，清水清洗根部，按单株剪下，每株剪成3cm~4cm

带芽茎段作为插条。

8.2扦插

插条基部采用500mg/LIBA浸泡30min，处理后用镊子将组培苗基部插入基质，深度为0.8cm~1.0

cm。

8.3覆膜

扦插后浇透水，在穴盘上覆盖保鲜膜，保温保湿。