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第第页植物叶绿素（chlorophyll）含量试剂盒说明书植物叶绿素（chlorophyll）含量试剂盒说明书微量法100T/96S注意：正式测定之前选择23个预期差异大的样本做预测定。测定意义：植物叶绿素广泛存在于绿色植物组织中，其含量与光合作用、营养状况密切相关，是反应植物生长状况的重要指标。测定原理：叶绿素a和叶绿素b在645nm和663nm处有最大吸收，根据经验公式可计算得叶绿素a和叶绿素b以及总叶绿素含量。自备实验用品及仪器：天平、研钵、可见分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96孔板、10mL玻璃试管、锡箔纸、丙酮。试剂组成和配制：试剂一：粉剂×1瓶，4℃保存。测定操作：1.称取约新鲜植物叶片或其它绿色组织，去掉中脉，称取约0.1g，剪碎，用蒸馏水洗干净。2.提取液的准备：取240mL蒸馏水和960mL丙酮，充分混匀待用。3.加入1mL蒸馏水，少量试剂一（约50mg），在黑暗或弱光条件下充分研磨，转入10mL玻璃试管。4.用提取液冲洗研钵，将所有冲洗液转入玻璃试管，用提取液补充至10mL，玻璃试管置于黑暗条件下或者包上锡箔纸浸提3h，观察试管底部组织残渣wan全变白则提取wan全，若组织残渣未wan全变白，继续浸提至其wan全变白。5.取浸提液200μL于微量石英比色皿/96孔板，提取液调零，测定663nm和645nm处吸光值，分别记为A663和A645。计算公式：叶绿素a含量（mg/g鲜重）=（12.7×A663–2.69×A645）×V提×D÷m÷1000=0.01×（12.7×A663–2.69×A645）×D÷m叶绿素b含量（mg/g鲜重）=（22.9×A645–4.68×A663）×V提×D÷m÷1000=0.01×（22.9×A645–4.68×A663）×D÷m叶绿素总含量（mg/g鲜重）=（20.21×A645+8.02×A663）×V提×D÷m÷1000=0.01×（20.21×A645+8.02×A663）×D÷mV提：提取液体积，10mL；D：稀释倍数；m：样本质量，g注意事项：1.叶绿素对光敏感，研磨和提取等操作尽量避光或者在弱光下进行。2.一定要浸提至组织残渣wan全变白，否则提取不充分。3.用提取液

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