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人椎间盘退变差异性表达microRNA的筛选及验证研究的开题报告一、研究背景和意义随着人们生活水平的提高和寿命的延长，椎间盘退变逐渐成为一个普遍而严重的健康问题。椎间盘是脊髓的重要结构，它起到支撑和保护脊髓的作用。然而，随着年龄的增长和外部环境的影响，椎间盘会出现退变现象，这会导致慢性腰痛、坐骨神经痛等各种病症的发生。因此，对于椎间盘退变的研究具有重要的临床意义。微小RNA（miRNA）是一类长度约为22个核苷酸的非编码RNA分子，具有干扰RNA的机制，可以通过调节基因表达来调控生物的生长、分化和凋亡等过程。最近的一些研究表明，miRNA在椎间盘退变过程中也可能发挥作用。例如，miR-101c可以抑制椎间盘细胞的增殖和迁移，防止椎间盘退变的进展。因此，对于miRNA在椎间盘退变中的作用及机制的研究，不仅可以深化我们对椎间盘退变发生的原因和机制的了解，而且还可以为未来的治疗探索提供新的思路和方法。二、研究内容和目的本课题旨在筛选和验证与椎间盘退变有关的差异表达miRNA，并探究其在椎间盘退变中的作用及机制。具体研究内容包括：1.构建椎间盘退变与正常组织miRNA差异表达谱根据实验需要，选择椎间盘退变样本及正常组织样本，提取miRNA并进行测序，构建miRNA差异表达谱。2.筛选与椎间盘退变有关的差异表达miRNA比较椎间盘退变与正常组织间的差异表达miRNA，筛选出与椎间盘退变有关的差异miRNA。3.验证差异表达miRNA的表达情况使用实时荧光定量PCR技术验证差异表达miRNA的表达情况，包括确定差异表达miRNA的表达量以及验证miRNA在椎间盘细胞中的定位。4.探究差异表达miRNA在椎间盘退变中的作用及机制APC/C介导的miRNA降解和靶标基因的表达水平分析以及功能富集分析来阐述筛选出的不同表达的miRNA在调控椎间盘细胞增殖和凋亡中所发挥的作用，探究其作用机制。三、研究方法1.实验材料本研究将采集椎间盘退变样本及正常组织样本，提取miRNA并进行测序分析。同时，使用实时荧光定量PCR技术验证差异表达miRNA的表达情况。此外，在研究差异表达miRNA在椎间盘退变中的作用机制方面，将进行miRNA降解和靶标基因的表达水平分析以及功能富集分析。2.实验步骤（1）提取椎间盘组织中的miRNA，并进行测序分析。（2）比较椎间盘退变与正常组织间的差异表达miRNA，并进行差异分析。（3）使用实时荧光定量PCR技术验证差异表达miRNA的表达情况，并在椎间盘细胞中验证miRNA的定位。（4）分析差异表达miRNA在椎间盘细胞中的靶标基因及其作用机制。四、预期成果本研究将为深入了解椎间盘退变的病因和机制提供新的思路和理论基础，为椎间盘退变的诊断与治疗提供一定的参考。预期成果包括：构建椎间盘退变与正常组织miRNA差异表达谱、

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