药品微生物检验技术基础操作规范课件

药品微生物检验技术基础操作规范

药品微生物检验技术基础操作规范

微生物检验是一门微生物应用技术，也是一门综合的专业技术。它包括的范围非常广泛；基本分为；无菌技术和微生物检验技术两大类。药品微生物检验技术基础操作规范一、无菌技术

1、无菌技术概念

2、无菌环境⑴无菌室⑵无菌器材药品微生物检验技术基础操作规范3、无菌操作

无菌操作一般是指在无菌环境条件下，使用无菌器材进行检验，可保证检验物品不被二次污染、保证试验结果的真实性及检验人员的安全。无菌操作涉及的方面很广，现简述如下：药品微生物检验技术基础操作规范⑴试验前准备

消毒(工作台面和地面)↓

进行空间灭菌处理(开启净化系统和紫外线灯↓试验器具与供试品进入无菌室(通过物流)↓

操作人员进入第一缓冲间(洗手、消毒液消毒手)↓

操作人员进入第二缓冲间(穿戴无菌工作服、鞋、帽、口罩)↓

操作人员进入无菌室↓点燃酒精灯，消毒液的棉球消毒手↓进行试验操作。药品微生物检验技术基础操作规范⑵检验操作规程

①试验全过程应在近火焰处操作，动作要轻。②标记③使用接种环（针），灼烧灭菌。④用吸管吸取供试液或培养液等，用橡胶乳头吸取。⑤用过的玻璃器皿应立即放入消毒液缸（桶）内进行灭菌。⑥用注射器吸取供试品或培养物时，注射器内应无空气，从密封容器内抽取液体时，应通过火焰注入无菌空气。⑦在开启菌种管或其他供试品安瓿之前，应用碘伏溶液、碘酒棉球消毒容器。刻痕用的砂轮、锯刀也应消毒，截断时要防止污染，安瓿切口通过火焰灭菌。药品微生物检验技术基础操作规范

⑧在接种霉菌、放线菌时，应在铺有浸过消毒液的湿纱布上操作，以防孢子散落传播。⑨试验时使用的培养皿打开盖时开口朝向火焰，不得将盖放工作台上，拔出玻璃容器塞子时应用小指夹住塞子拔出，不得将塞子放在工作台上，以免造成污染。⑩在实验过程中观察平板培养物时，一般不宜开盖观。如取菌落或菌苔涂片、染色，或做玻片凝集实验时，在近火焰处操作，平皿盖可适当开启（45°），开口朝向火焰，挑取菌落。

⑩在涂片、染色时．应使用夹子夹持载玻片，切勿用手直接拿载玻片，用过的玻载片和盖玻片应置消毒液中消毒后，洗刷清洁的器皿经消毒后再洗刷，放置固定处，备用。药品微生物检验技术基础操作规范二、微生物检验操作技术

接种、分离、培养是微生物检验工作中应用最多的基本操作技术。药品微生物检验技术基础操作规范1、接种技术

接种方法有多种，根据接种的菌株不同所使用的培养基也不同，接种时经常使用接种环、接种针、无菌吸管或无菌注射器等。药品微生物检验技术基础操作规范

⑴接种方法斜面培养基接种法适用于纯培养、扩大培养及短时间保存菌种。

药品微生物检验技术基础操作规范2、分离技术

使用平板培养基进行分离达到分离出单个菌落的目的，以供微生物的鉴别、纯菌的保留，分离的方法有多种，常用的方法如下：⑴划线分离法⑵倾注分离法⑶涂布分离法药品微生物检验技术基础操作规范3、培养方法

细菌培养，要掌握温度、湿度、时间、环境等因素，《中国药典2010版》规定微生物限度检验细菌培养温度为30~35℃，此温度适于中温菌生长，某些高温菌在该温度下也可以生长。药品污染的控制菌多是中温菌。根据不同菌株及检验目的选择不同的培养时间。根据细菌对环境要求不同常用培养方法如下：药品微生物检验技术基础操作规范

需氧培养法

此为最常用的培养方法，适于需氧菌和兼性厌氧菌的培养。

厌氧培养法

厌氧菌的培养，必须在无氧的环境中进。厌氧培养箱法、抽气换气法、厌氧缸法、厌氧培养罐、厌氧袋。药品微生物检验技术基础操作规范

微需氧培养法

有些细菌为微需氧菌在微需氧环境（5％02、10％CO2、85％N2）生长良好，微需氧培养法常用的有以下几种：混合气体法、气袋法、双平板法、烛缸法

药品微生物检验技术基础操作规范微生物限度检查法

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供试液制备方法、抑菌成分的消除方法及细菌、霉菌及酵母菌计数方法应尽量选择微生物限度检查法中操作简便、快速的方法，且应避免损伤供试品中污染的微生物。对于抑菌作用较强的供试品，在供试品溶液性状允许的情况下，应尽量选用薄膜过滤法进行试验。药品微生物检验技术基础操作规范供试液的制备

根据供试品的理化特性与生物学特性，采取适宜的方法制备供试液。供试液制备若需加温时，应均匀加热，且温度不应超过45℃。供试液从制备至加入检验用培养基，不得超过1小时。除另有规定外，常用的供试液制备方法如下。药品微生物检验技术基础操作规范1.液体供试品2.固体、半固体或黏稠性供试品3.需用特殊供试液制备方法的供试品⑴非水溶性供试品⑵膜剂供试品⑶肠溶及结肠溶制剂供试品⑷气雾剂、喷雾剂供试品⑸贴剂供试