实验一生长谱法

关于实验一生长谱法实验一

用生长谱法测定微生物的营养要求第2页,共12页，2024年2月25日，星期天一、目的要求学习并掌握生长谱法测定微生物营养需求的基本原理和方法。第3页,共12页，2024年2月25日，星期天二、基本原理微生物的生长繁殖需要适宜的营养环境；在缺乏某种营养物质的、含有指示剂的培养基上接入某种微生物，再在接菌平板上置入这种营养物质，经一定条件培养后,即可通过指示剂变化情况来判断对不同营养物质的利用情况。该法可以定性、定量地测定微生物对各种营养物质的要求，在微生物育种、营养缺陷型鉴定以及饮食制品质量检测等诸多方面具有重要用途。第4页,共12页，2024年2月25日，星期天三、实验器材菌种大肠杆菌(Escherichiacoli)、枯草芽孢杆菌(Bacillussubtilis)、金黄色葡萄球菌(Staphylococcusaureus)培养基（合成培养基）

(NH4)3PO41g,KCl0.2g,MgSO4·7H2O0.2g,豆芽汁10mL,琼脂20g,蒸馏水定容至1LpH7.05,加入12mL0.04%的溴甲酚紫作指示剂(pH5.2～6.8),将颜色由黄色调为紫色。1×105Pa灭菌25min。溶液和试剂

A—葡萄糖、B—乳糖、C—麦芽糖、D—蔗糖、E—木糖、F—半乳糖。器具无菌培养皿、吸管、镊子、牙签、酒精灯、接种环等,另备试管无菌水6支。第5页,共12页，2024年2月25日，星期天四、操作步骤配制培养基制作糖浸片将圆形打孔器(d=0.8cm)打下的滤纸片,置入不同糖的饱和溶液中浸泡10min后,取出置28℃培养箱中烘干备用(最好置紫外灯下灭菌20～30min)。制备菌悬液在已培养24h的大肠杆菌(E.coli)等3种斜面内分别倒入5ml无菌水，用接种环轻轻刮下菌苔，振荡，制成菌悬液。制平板混菌法——在无菌平板内加入上述菌悬液(1ml菌悬液/10ml培养基），倒入溶化冷却至50OC左右的合成培养基，轻轻摇匀。涂布法——将溶化冷却至50OC左右的合成培养基倒入无菌培养皿，待其凝固后，加入0.5ml菌悬液，用玻棒涂布均匀。第6页,共12页，2024年2月25日，星期天对照：培养基+菌0+糖0（1）处理：培养基+菌+糖（3混菌，3涂布）培养基+菌+糖0（3，混菌或涂布）培养基+菌0+糖（1）第7页,共12页，2024年2月25日，星期天分小区植糖在冷凝后的平皿背面,用记号笔画出6个均匀的植糖区域(图1),用无菌镊子分别取代号为A、B、C、D、E、F的6种糖浸片各1张对号放入用两种方法接菌的平板的对应区域中,并轻轻按压,以免在进行倒置培养时糖片脱离培养基平板。培养及观察将已放置糖浸片后的平皿置于37℃条件下,培养18～24h后,观察滤纸片周围有无菌落生长以及指示剂变色程度。四、操作步骤图1平板分区示意图第8页,共12页，2024年2月25日，星期天五、实验报告结果绘图，表示大肠杆菌等三种菌在平板上的生长状况。分析绘制表格，说明大肠杆菌等三种菌利用六种糖的情况。如何保证实验结果的准确性？第9页,共12页，2024年2月25日，星期天实验安排及分组情况第一次课（第四周）：讲述实验内容，完成实验步骤1：配培养基，灭菌第二次课（第六周）：完成实验步骤2、3、4、5、6等撰写实验报告分组4个人一组，分成6组，每组作两种制平板方式。第10页,共12页，2024年2月25日，星期天注意事项1.做实验之前要想好要准备哪些东西，准备多少；灭菌时要想好要灭哪些东西，要灭多少。2.要严格无菌操作。3.加入菌悬液后要趁培养基尚未凝固及时倒平板，否则将会出现平板尚未倒好培养基已经凝固于三角瓶中。4.放滤纸片时要对号入座并轻轻按压,以免在进行倒