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文档简介

一.考马斯亮蓝R250染色法观察微丝掌握观察动物细胞内微丝方法:考马斯亮蓝R250染色法

试验目标细胞骨架染色第1页真核细胞胞质中有错综复杂纤维网,称为细胞骨架。依据纤维直径分为微丝,微管和中间纤维。另外,还散布着一些比微丝还细纤维。本试验观察是由微丝平行排列组成纤维束,在动物细胞里称作”应力纤维”.应力纤维在体外培养贴壁细胞中尤其发达。普通当细胞充分铺展时,经考马斯亮蓝R250染色,可看到沿细胞长轴伸展粗大纤维束,此即应力纤维。试验原理细胞骨架染色第2页仪器、材料和试剂（一）仪器

光学显微镜,温箱,细胞培养设备（二）材料平皿,直径30mm小染缸,载玻片,盖玻片,体外培养贴壁细胞B-cap细胞。（三）试剂细胞培养基,磷酸缓冲液(PBS,PH7.4);0.2mol/L磷酸盐缓冲液(PH7.3);M-缓冲液;1％Triton×-100(用M-缓冲液配);0.2％考马斯亮蓝R250;3.0％戊二醛(用0.2mol/L磷酸盐缓冲液配制)。细胞骨架染色第3页试验步骤1.细胞培养在平皿中盖玻片上,还未致密时即可使用。取出盖玻片,用PBS洗涤3次。2.用1％Triton×-100处理25-30min,室温或37℃均可。3.马上用M-缓冲液轻轻洗细胞3次。4.略晾干后,用3.0％戊二醛固定细胞5-15min。细胞骨架染色第4页5.PBS洗数次,滤纸吸干。6.用0.2％考马斯亮蓝R250染片子1h。然后小心用水冲洗,蒸馏水冲洗,空气中略干燥。7.普通光学显微镜下用40×物镜或油镜观察。应力纤维成深蓝色。试验步骤细胞骨架染色第5页注意事项

1.洗片时要轻柔，以免把细胞从载片上洗去。

2.细胞盖片注意正反面。

3.染色后应冲洗盖片后面，防止损伤细胞。

细胞骨架染色第6页试验汇报1.画出你所观察到微丝图像。2.对试验成功失败原因进行讨论。细胞骨架染色第7页思索题微丝观察试验中,1％Triton×-100处理细胞作用是什么?此试验是否能看到微管,中间纤维?为何?M-缓冲液作用是什么?细胞骨架染色第8页二.甲基罗丹明标识鬼笔环肽染色法观察微丝掌握观察动物细胞内微丝方法:甲基罗丹明标识鬼笔环肽染色法。试验目标细胞骨架染色第9页鬼笔环肽是双环杆肽,与微丝有强烈亲和作用，能使F-actin稳定。用荧光燃料甲基罗丹明标识鬼笔环肽能够清楚地显示细胞中微丝。试验原理细胞骨架染色第10页（一）仪器

荧光显微镜（二）材料平皿,直径30mm小染缸,载玻片,盖玻片,铝盒,体外培养贴壁细胞如B-cap细胞。（三）试剂细胞培养基,3.7％甲醛-PEMD,磷酸缓冲液(

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