免疫学应用专题知识讲座

免疫学应用专题知识讲座免疫学应用专题知识讲座第1页

第一节免疫学诊疗一、抗原抗体检测二、淋巴细胞检测免疫学应用专题知识讲座第2页一、抗原抗体检测原理：

Ag与对应Ab在体内与体外可发生特异性结合检测标准：1.已知Ag检测未知Ab2.已知Ab检测未知Ag免疫学应用专题知识讲座第3页细菌学诊疗标本采集时应注意无菌操作，尽可能防止杂菌污染。依据致病菌在不一样病期体内分布和排出部位，采取不一样标本。应在使用抗菌药品前采集标本，不然在培养时应加入拮抗剂。尽可能采集病变显著部位材料。标本必须新鲜，采集后尽快送检。送检过程中要采取适当保留方式。标本采集与送检标准免疫学应用专题知识讲座第4页致病菌检验程序标本生化试验血清学试验动物试验药敏试验直接涂片检验分离培养分子生物学技术（核酸杂交、PCR）

其它(HPLC)免疫学应用专题知识讲座第5页人体受致病菌感染后，其免疫系统被刺激后发生免疫应答而产生特异性抗体。抗体量常随感染过程而增多，表现为效价（滴度）升高。所以，用已知细菌或其特异性抗原检测患者体液中有没有对应特异抗体和其效价动态改变，可作为一些传染病辅助诊疗。普通采取病人血清进行试验，故称为血清学诊疗(serologicaldiagnosis)。血清学诊疗试验最好取患者急性期和恢复期双份血清标本，当后者抗体效价比前者升高大于等于4倍时方有意义。常见方法：直接凝集试验、乳胶凝集试验、沉淀试验、补体结合试验、中和试验、ELISA。血清学诊疗免疫学应用专题知识讲座第6页体外抗原抗体反应免疫学应用专题知识讲座第7页

抗原抗体反应1、抗原抗体结合与析出2、抗原抗体反应特点3、抗原抗体反应影响原因免疫学应用专题知识讲座第8页引发抗原抗体结合作用力1、电荷引力（库仑引力）2、电子云引力（VanderWaals力）3、氢键结协力4、疏水作用力免疫学应用专题知识讲座第9页抗原抗体结合物析出原因析出+—

—++—

—+

—++—+—+—+—

—++—

—+

—++—+—+—电解质+—

—++—

—+

—++—+—+—+—

—++—

—+

—++—+—+—+—

—++—

—+

—++—+—+—+—

—++—

—+

—++—+—+—+—

—++—

—+

—++—+—+—+—

—++—

—+

—++—+—+—免疫学应用专题知识讲座第10页

抗原抗体反应特点1、特异性2、适合百分比性3、可逆性免疫学应用专题知识讲座第11页网格学说（latticetheory）抗体过剩抗原过剩抗体抗体百分比适当免疫学应用专题知识讲座第12页可逆性K（亲和常数）=Ag+AbAgAb免疫学应用专题知识讲座第13页

抗原抗体反应影响原因1、电解质2、酸碱度（pH值6-8）3、温度（37-42。C）免疫学应用专题知识讲座第14页经典血清学反应免疫学应用专题知识讲座第15页抗原或抗体检测方法类型抗原抗体辅助物敏感度（

g抗体氮）凝集反应颗粒性凝集素0.01沉淀反应可溶性沉淀素5-10补体溶血反应红细胞溶血素补体0.001-0.3G-细菌溶菌素补体（同上）补体结合反应固定补体抗体补体SRBC溶血素0.1

中和反应外毒素抗毒素靶细胞0.01

病毒中和抗体靶细胞（同上）免疫学应用专题知识讲座第16页凝集反应免疫学应用专题知识讲座第17页直接凝集反应

玻片法：ABO血型判定试管法：肥达试验颗粒性抗原抗体（凝集素）免疫学应用专题知识讲座第18页正向间接凝集反应如：类风湿因子检测可溶性抗原载体颗粒抗体（凝集素）免疫学应用专题知识讲座第19页反向间接凝集反应抗体可溶性抗原载体颗粒免疫学应用专题知识讲座第20页间接凝集抑制反应如妊娠诊疗试验检测HCG凝集凝集抑制待检样品待检样品免疫学应用专题知识讲座第21页沉淀反应免疫学应用专题知识讲座第22页液相内沉淀反应絮状沉淀反应环状沉淀反应如法医学血迹判定++——抗血清抗原抗原抗体免疫学应用专题知识讲座第23页凝胶内沉淀反应免疫扩散技术免疫电泳技术单向扩散试验双向扩散试验火箭电泳对流电泳免疫电泳免疫学应用专题知识讲座第24页免疫标识技术免疫学应用专题知识讲座第25页主要免疫标识物类别标识物用途荧光素

FITC、RB200、TRITC免疫组化镧系元素螯合物免疫分析测定放射性核素

3H、14C、32P、57Gr免疫分析测定

125I、131I酶

HRP、AP免疫组化免疫分析测定化学发光物Luminol、lucigenin免疫分析测定金属颗粒胶体金、铁蛋白免疫组化免疫分析测定

免疫学应用专题知识讲座第26页标识免疫技术分类一、按测定用途分类：1、免疫组化技术2、免疫测定技术二、按标识物分类：1、酶免疫技术2、荧光免疫技术3、放射免疫技术4、发光免疫技术5、金免疫技术免疫学应用专题知识讲座第27页免疫荧光技术免疫学应用专题知识讲座第28页直接法间接法补体法双标识法免疫学应用专题知识讲座第29页放射免疫分析免疫学应用专题知识讲座第30页结合相游离相免疫学应用专题知识讲座第31页酶联免疫吸附试验ELISA免疫学应用专题知识讲座第32页间接法免疫学应用专题知识讲座第33页夹心法免疫学应用专题知识讲座第34页竞争法免疫学应用专题知识讲座第35页二、免疫细胞检测技术1、细胞表面标志检测2、细胞功效检测3、细胞因子检测免疫学应用专题知识讲座第36页表面标志检测免疫学应用专题知识讲座第37页常见免疫细胞表面标志检测技术一、免疫标识检测1、荧光抗体法2、酶免疫检测法3、免疫金银染色法二、补体依赖细胞毒试验（CDC）三、E花环形成试验免疫学应用专题知识讲座第38页SmIg荧光抗体检测法免疫学应用专题知识讲座第39页SmIg酶免疫检测法免疫学应用专题知识讲座第40页补体依赖细胞毒试验（CDC）染料补体免疫学应用专题知识讲座第41页E-花环T细胞B细胞花环形成细胞绵羊红细胞免疫学应用专题知识讲座第42页细胞功效检测免疫学应用专题知识讲座第43页一、转化、增殖试验1、淋巴细胞转化试验2、混合淋巴细胞培养二、细胞毒检测1、T细胞介导细胞毒试验2、NK活性测定3、ADCC作用测定常见免疫细胞功效检测技术免疫学应用专题知识讲座第44页放射性测定3H-TdR丝裂原（抗原）刺激淋巴细胞转化试验原理示意免疫学应用专题知识讲座第45页放射性测定细胞毒试验原理示意靶细胞效应细胞分离上清免疫学应用专题知识讲座第46页细胞因子检测免疫学应用专题知识讲座第47页可检测细胞因子白细胞介素（Interleukin）——IL-1、IL-2、……IL-18干扰素（Interferon）——IFN-

、IFN-、IFN-肿瘤坏死因子（Tumornecrosisfactor）——TNF-、TNF-集落刺激因子（Colony-stimulatingfactor）——M-CSF、G-CSF转化生长因子（Transforminggrowthfactor）——TGF-趋化因子（Chemokine）——IL-8、GROs、MCP-1生长因子（Growthfactor）——EGF、FGF、IGF、PDGF免疫学应用专题知识讲座第48页细胞因子检测特点1、免疫原性较弱2、样品含量低3、样品含有时效性4、生物效应特异性差免疫学应用专题知识讲座第49页细胞因子检测方法1、免疫标识技术检测——抗原性测定2、细胞生物学方法检测——生物活性测定3、分子生物学技术检测——mRNA表示测定免疫学应用专题知识讲座第50页特异性免疫取得方式：自然免疫、人工免疫自然被动免疫：如胎儿从母体取得IgG婴儿从母体取得IgM自然自动免疫：感染病原体后取得免疫力人工自动免疫:接种类毒素、疫苗等人工被动免疫：注射抗毒素、丙种球蛋白等第二节

免疫预防免疫学应用专题知识讲座第51页

思索题：1.你知道注射“乙肝疫苗、卡介苗、白白破三联疫苗”目标是什么？机制？属于何种免疫？2.你知道注射“丙球、胎盘球蛋白、抗毒素、IL-2、IFN”目标是什么？机制？属于何种免疫？3.注射疫苗和注射丙球等制剂取得免疫力方式各有什么特点？4．请你举一个实例说明何时使用疫苗、何时使用丙球等制剂？理由及注意事项。免疫学应用专题知识讲座第52页人工免疫定义：依据特异性免疫应答原理，采取人工方法将Ag/Ab制成各种制剂，接种于人体，使其产生/取得特异性免疫力，到达预防一些疾病目标。分类：1、人工主动免疫用疫苗或类毒素等抗原接种机体，使之产生特异免疫，从而预防感染办法。

2、人工被动免疫用抗体或细胞因子等制剂，使之取得特异免疫，以治疗或紧急预防感染办法。免疫学应用专题知识讲座第53页一、人工主动免疫

(artificialactiveimmunity)：定义：人工主动免疫将疫苗(vaccine)或类毒素接种于人体，使机体产生取得性免疫力一个防治微生物感染办法，主要用于预防。免疫学应用专题知识讲座第54页人工主动免疫生物制剂：灭活疫苗（死疫苗）：选取免疫原性强细菌，经人工大量培养后，用理化方法杀死而成。减毒活疫苗：用减毒或无毒力活病原体制成。类毒素：细菌外毒素经0.3%-0.4%甲醛液作用3-4周后，毒性消失但仍保持免疫原性。亚单位疫苗：依据细菌抗原分析，查明不一样致病菌主要保护性免疫原存在组分，然后将之制成疫苗。DNA重组疫苗：经过DNA重组技术制备所需疫苗。核酸疫苗：或称DNA疫苗、基因疫苗，是将能编码引发保护性免疫应答病原体免疫原基因片段和质粒载体直接注射入宿主体以表示目标免疫原，进而诱导出体液和细胞免疫新型疫苗。治疗性疫苗免疫学应用专题知识讲座第55页

1、疫苗

死疫苗与活疫苗比较种类死疫苗活疫苗制剂性状杀死病原体毒力减弱（无毒）活病原体接种次数及量2-3次，用量大（间隔7-10天）1次，用量小稳定性稳定，易保留稳定性差，不易保留副作用无毒力回复突变有毒力回复突变免疫学应用专题知识讲座第56页

2、类毒素（接种2次，吸收迟缓，间隔4-6周）

外毒素0.3-0.4%甲醛类毒素如：百-白-破精巧吸附类毒素

3、新型疫苗1）亚单位疫苗：提取有效免疫原成份。(降低不良反应，排除致癌可能性）如HA、NA，HBSAg

免疫学应用专题知识讲座第57页2）合成肽疫苗：人工合成抗原肽。（无需培养微生物，可大量生产，无致癌、返祖危险性）3）基因工程疫苗图示：编码免疫原基因→载体→体内 ↓ 酵母菌、大肠杆菌（体外培养）如：重组抗原疫苗、重组载体疫苗、DNA疫苗、转基因植物疫苗等免疫学应用专题知识讲座第58页人工主动免疫注意事项接种对象：凡免疫力差、与病原体接触机会多、疾病危害大、流行地域易感者。接种剂量、次数和间隔时间（计划免疫程序表）接种路径：皮内、皮下、吸入、口服接种后反应：24h内局部红肿、疼痛、淋巴结大；全身发烧、头痛、恶心，数天恢复。禁忌症：高热、急性传染病、严重心血管病、本身免疫病、免疫缺点病。免疫学应用专题知识讲座第59页免疫学应用专题知识讲座第60页二、人工被动免疫

(artificialpasstiveimmunity)人工被动免疫定义：注射含有特异性抗体免疫血清或纯化免疫球蛋白，或细胞因子等免疫制剂，使机体即刻取得特异性免疫，因而作用及时。但这些免疫物质不是病人自己产生，故维持时间短。主要用于治疗或紧急预防。免疫学应用专题知识讲座第61页人工被动免疫生物制品：抗毒素(antitoxin)：外/类毒素→马→Ab丙种球蛋白：正常人血清或健康产妇胎盘中提取人特异性Ig：1.含高效价特异性抗体且超敏反应发生率低

2.起源①恢复期病人，含高效价特异性抗体供血者血浆②接种疫苗/类毒素免疫者血浆。免疫学应用专题知识讲座第62页人工被动免疫注意事项：注意预防超敏反应早期和足量不滥用丙球应用范围：易感人群、患者免疫学应用专题知识讲座第63页人工主动免疫与人工被动免疫区分区分关键点人工主动免疫人工被动免疫输入物质抗原抗体或细胞因子免疫生效时间慢，2-4周快，马上免疫维持时间长，数月-数年短，2-3周主要用途预防治疗或紧急预防区分点免疫学应用专题知识讲座第64页第三节免疫治疗

概念：依据免疫学原理，应用物理、化学和生物学方法增强或抑制机体免疫机能，人为地纠正免疫异常状态，到达治疗目标办法。

免疫学应用专题知识讲座第65页分类（作用机制）：1、免疫增强疗法免疫抑制疗法2、特异性免疫治疗非特异性免疫治疗3、主动免疫治疗：主动增强，“疫苗”，直接作用 被动免疫治疗：被动增强，抗体、免疫效应细胞、小分子免疫肽，间接作用，过继免疫免疫学应用专题知识讲座第66页一抗体为基础免疫治疗二抗原为基础免疫治疗三细胞因子及其拮抗剂为基础免疫治疗四细胞为基础免疫治疗五免疫调整剂治疗六免疫重建免疫学应用专题知识讲座第67页一、特异性被动免疫治疗

（抗体为基础免疫治疗）定义：输入特异性免疫效应物质，使机体马上取得某种特定免疫力，以到达治疗目标。特点：见效快，维持时间短作用：紧急预防和治疗传染病、抗肿瘤和抗移植物排斥反应。如：破伤风、白喉抗毒素，丙种球蛋白抗病毒血清、抗淋巴细胞丙种球蛋白肿瘤特异性McAb（免疫导向疗法）免疫学应用专题知识讲座第68页二、特异性主动免疫治疗

（抗原为基础免疫治疗）定义：利用抗原性疫苗对机体进行免疫接种，诱导产生特异性免疫应答或免疫耐受，到达治疗目标。特点：见效慢，维持时间长作用：预防传染病、抗肿瘤。如：卡介苗、乙肝V多肽疫苗、流感V亚单位疫苗、肿瘤疫苗免疫学应用专题知识讲座第69页三、非特异性免疫治疗

（细胞因子及其拮抗剂为基础免疫治疗）定义：采取非特异性免疫调整剂（如细胞因子及其拮抗剂）来调整机体免疫功效失衡情况，以到达治疗或辅助治疗目标。BRM：（生物应答调整剂）调整机体免疫功效，抵抗病原微生物或癌细胞侵袭。免疫学应用专题知识讲座第70页免疫学应用专题知识讲座第71页四、过继性细胞免疫治疗

（细胞为基础免疫治疗）

定义：将自体或同种异体免疫细胞，经体外激活诱导