血清蛋白质醋酸纤维素薄膜电泳_第1页
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文档简介

关于血清蛋白质醋酸纤维素薄膜电泳一、实验目的1.了解电泳的基本原理；2.掌握电泳分离蛋白质的原理；3.熟悉醋酸纤维素薄膜电泳的方法。第2页,共13页，2024年2月25日，星期天二、实验原理1.电泳的基本原理

电泳——是带电粒子在电场中向其电性相反的电极发生移动的现象。

利用电泳技术可进行物质分离、纯化及鉴定。第3页,共13页，2024年2月25日，星期天影响带电粒子电泳速率的因素：带电量F=qE分子量形状第4页,共13页，2024年2月25日，星期天2.电泳分离蛋白质的原理蛋白质的两性解离：等电点——即

pI(isoelectricpoint）pIpH小于pIpH大于pI当pH距离pI越远时，所带电量越多。+OH-+OH-+H-+H-第5页,共13页，2024年2月25日，星期天

血清蛋白质的等电点为4.8~7.5，均低于8.6，因此电泳时常采用pH8.6的缓冲液。此时，蛋白质解离带负电荷，在电场中向正极移动。第6页,共13页，2024年2月25日，星期天3.醋酸纤膜薄膜电泳分离血清蛋白质原理醋酸纤维素薄膜电泳是采用醋酸纤维素薄膜作支持物的一种电泳技术。醋酸纤维素薄膜做区带电泳的支持物优点:1.用样量少，分离清晰，对染料无吸附作用;2.快速简便，应用范围广;3.染色后的薄膜可用乙醇和冰醋酸溶液浸泡透明，透明后的薄膜便于保存和定量分析。

目前被广泛用于血清蛋白、脂蛋白、血红蛋白、糖蛋白、酶的分离和免疫电泳等方面。第7页,共13页，2024年2月25日，星期天三、主要试剂与器材试剂：血清

巴比妥缓冲液

染色液，漂洗液器材：电泳仪，电泳槽

醋酸纤维素薄膜（2×8cm）

血清加样器第8页,共13页，2024年2月25日，星期天四、操作步骤1.浸膜：将裁好的醋酸纤维素薄膜浸泡于缓冲液中，充分浸透后用镊子取出（约3-5min，直到膜上没有斑点，中间没有气泡为止）。2.点样：毛面向上，用点样器，在距膜一端约1.5cm处，点加3-5μL待分离血清。注意取样适量、均匀；血清线位置适当，粗细均匀，不能有明显扩散现象。

1.5cm第9页,共13页，2024年2月25日，星期天3.搭桥：首先将双层纱布铺好，分别放置于电泳槽两端，其下端要浸入缓冲液中。然后，将点好样的薄膜光面向上平直地贴于电泳槽的支架上。注意桥的方向，点样的一端位于负极，点样线不能搭在滤纸上。醋酸纤维素薄膜电泳装置示意图第10页,共13页，2024年2月25日，星期天4.电泳：红正黑负。

电压120V。

电泳时间约40~

50min。5.染色：氨基黑10B,染色1-2min.6.脱色：2个表面皿，装入漂洗液，依次漂去多余染料，直到背景漂白为止。第11页,共13页，2024年2月25日，星期天五、结果与分析1.定性观察：染色后的薄膜上可显现清楚的五条区带。2.定量测定：光密度仪扫描法，洗脱比色法

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