液相色谱仪的维护与常见故障

关于液相色谱仪的维护与常见故障一液相色谱仪的

日常维护第2页,共45页，2024年2月25日，星期天储液器和流动相

使用HPLC试剂做流动相，用前最好过0.45μm膜,除去微粒物质;更换流动相时,应彻底清洗储液器，防止交叉污染，更换不互溶流动相时，选择好中间试剂。

流动相务必要脱气，否则出现气泡，引起输液不畅，使噪声漂移增大，影响检测限。

第3页,共45页，2024年2月25日，星期天储液器和流动相流动相的温度不要与室温相差太大，否则会产生气泡，导致基线漂移不稳。

使用缓冲盐溶液做流动相时，最好现用现配，用前过滤，避免在阳光下暴晒。定期清洁储液器及附件，防止长微生物堵塞吸滤器。第4页,共45页，2024年2月25日，星期天输液泵泵压力不要太高,要适当调整压力,一般压力上限在10-20MPa，下限为0.5MPa，注意防止因泵堵塞造成压力过高损坏柱塞杆或烧坏电机。

密封垫易损坏引起故障，每天实验结束一定要认真冲洗泵,注意防止堵塞,使用缓冲盐流动相时,更要小心。第5页,共45页，2024年2月25日，星期天进样器

样品溶液进样前应该用0.45μm膜过滤，减少颗粒对进样阀的磨损；

转动阀芯时不能太慢，更不能停留在中间位置，否则流动相受阻，会使泵压剧增，再转到进样位置时，过高的压力会使柱头受损；

第6页,共45页，2024年2月25日，星期天进样器

停机前一定冲洗干净进样器内残留的样品或缓冲盐，防止样品和无机盐沉积造成进样阀转子面磨损或堵塞。注射器最好使用仪器自配尖头、平头针，不要用其它仪器的。第7页,共45页，2024年2月25日，星期天进样器

自动进样器的清洗液，最好使用与流动相相同的溶液，若含盐分，要出去盐分；

清洗液最好也脱气使用，清洗液也要经常更换，避免出现气泡和沉淀。第8页,共45页，2024年2月25日，星期天柱—防止柱性能下降

1溶剂的化学腐蚀性不能太强；

2避免颗粒物在柱头沉降；

3柱压不能太高，防止冲击太大；

4流动相pH值小于7时，最好用

大粒度同种填料的予柱；

第9页,共45页，2024年2月25日，星期天柱—防止柱性能下降

5柱头加滤片（烧结不锈钢),需要时加保护柱；

6经常用不同的溶剂清洗柱；

7长时间不用时要保存好,一定要洗去缓冲盐,加入大于10%有机溶剂，将柱两端拧紧,保持柱填料湿润。第10页,共45页，2024年2月25日，星期天检测器

保持检测器清洁非常重要，每天用后与色谱柱一起反复清洗；不定期用强溶剂反向冲洗检测器；冲洗时使用脱过气的流动相，防止气泡滞留在池内；检测器光源（灯）有一定寿命，不用时可以不开灯。第11页,共45页，2024年2月25日，星期天记录器数据处理系统记录仪:

热敏式打印头要注意记录纸的质量,开机前注意检查走纸部件,不要卡纸.色谱工作站:

防止网上病毒损坏软件.第12页,共45页，2024年2月25日，星期天二常见故障的排除第13页,共45页，2024年2月25日，星期天1、储液器和流动相1）噪声大，出毛刺--脱气不充分超声脱气,

真空脱气,用He脱气,

加热回馏脱气,(混合流动相不宜)第14页,共45页，2024年2月25日，星期天1、储液器2）流动相供给不畅，泵压力不稳流动相接近用完过滤器堵塞（有颗粒，长霉）流速过高,阻力大,造成空化现象.解决的办法是:降低流速;换大孔过滤器;加大管路内径;抬高储液器.第15页,共45页，2024年2月25日，星期天1、储液器和流动相3）产生有规则的噪声；基线上升，梯度洗脱出鬼峰；原因:储液器或流动相被污染；

溶剂质量差（含杂质多）；配制流动相的玻璃器皿不清洁,有微生物影响；配制流动相的操作不当（过滤、脱气、搅拌)。第16页,共45页，2024年2月25日，星期天2、输液泵1）单向阀

a.球和阀座粘在一起，堵死，打不出溶剂，(特别是缓冲盐流动相)

用高质量（纯度高、脱过气）的不同极性的溶剂冲洗,如水、甲醇、异丙醇、二氯甲烷；

更换新单向阀。第17页,共45页，2024年2月25日，星期天2、输液泵b.球和阀座密封不严，压力不稳，气泡进入阀中，紧贴在阀体内，使球难以返回阀座，引起倒流，压力和流速变化大，可能有小晶体颗粒。清除气泡的办法：打开排液阀，大流量冲洗，用脱过气的甲醇冲洗，一般可解决问题。第18页,共45页，2024年2月25日，星期天2、输液泵2）泵垫圈磨损或破碎，高压下压力不稳，从泵头往外渗漏流动相，色谱峰的保留时间会改变。解决办法：更换新垫圈。更换方法按维修说明书上的方法一步步操作。第19页,共45页，2024年2月25日，星期天2、输液泵注意：输液泵的垫圈要和流动相匹配协调。多数垫圈和流动相是协调的,但有的垫圈适用于甲醇、水、乙腈，在四氢呋喃中溶解、变粘、变软。需换垫圈时,应向厂商咨询垫圈的规格型号。色谱工作者一般应学会换密封垫圈。第20页,共45页，2024年2月25日，星期天2、输液泵3）柱塞杆故障长期使用柱塞杆被磨损，漏液；因使用不当被折断；柱塞杆被卡住，不能运动。

解决的办法是更换新柱塞杆请维修工程师帮助解决，或参照专门的操作手册自己动手更换。第21页,共45页，2024年2月25日，星期天3、进样系统a.渗漏转子密封垫圈松紧不合适；垫圈不配套；组装不对。

手动进样系统器第22页,共45页，2024年2月25日，星期天3、进样系统

b.堵塞,

样品打不进去。样品管堵塞：环管用反冲法或超声清洗排除（或换新管).

手动进样系统第23页,共45页，2024年2月25日，星期天3、进样系统c.注样孔问题

1)装样时针头周围渗漏：孔道堵塞，或者放空管和样品管太细，阻力太大；针头密封管规格不对，针头太细。

手动进样系统第24页,共45页，2024年2月25日，星期天3、进样系统c.注样孔问题

2)注射孔渗漏：放空管有虹吸现象，转子密封面上孔之间有磨损。为防止虹吸,放空管末端应在放空瓶液面以上,更换磨损的转子.

手动进样系统第25页,共45页，2024年2月25日，星期天3、进样系统c.注样孔问题

3)样品滞留阀在进样位置停留时间不够。要求停留时间至少应让流动相流过的体积是环体积的10-20倍。

(一般是在下一针进样前才将阀扳到装样位置)

手动进样系统第26页,共45页，2024年2月25日，星期天3、进样系统3)样品滞留残留样品留在样品环中或注射器中，或从放空管中虹吸回来,污染下一个样品.此时可用5-10倍的流动相或新样品冲洗注射孔和注射器,若是虹吸,应加限制管。手动进样系统第27页,共45页，2024年2月25日，星期天3、进样系统3)样品滞留管路接头有死体积滞留样品，很难冲洗干净,此时应检查装配情况，确定是否需换新配件。手动进样系统第28页,共45页，2024年2月25日，星期天3、进样系统a.样品瓶不配套瓶小——针弯、折断瓶大——样品少，抽不上样瓶破碎更换合适的样品瓶。

自动进样系统第29页,共45页，2024年2月25日，星期天3、进样系统b.更换样品瓶隔垫，防止污染。c.进样器针头堵塞（样品、缓冲

盐、隔垫碎片、针头本身)，可用溶剂清洗，金属丝疏通，或换新针头。

自动进样系统第30页,共45页，2024年2月25日，星期天3、进样系统d.样品滞留：空白溶剂出色谱峰.

加倍清洗，或调整样品瓶顺序，（从低浓度开始，高浓度放后面）或在样品瓶前放清洗液瓶.

自动进样系统第31页,共45页，2024年2月25日，星期天4、色谱柱

1)塔板数下降

a.样品处理不合适，选择适当的样品净化方法，选择合适流动相。

b.柱头塌陷，填装修补。

第32页,共45页，2024年2月25日，星期天4、色谱柱2)峰形变坏，出现拖尾峰，分叉峰，非高斯峰,

与塔板数下降有关;峰形坏保留时间不变可能是柱堵塞(筛板堵塞、缓冲盐析出、强保留物累积)，或柱头有空穴。缓冲盐、离子对试剂，可用甲醇-水冲洗，强保留物累积，可用甲醇-乙腈冲洗，筛板堵塞，可用甲醇-水反冲，更换筛板。第33页,共45页，2024年2月25日，星期天4、色谱柱

3)柱压突然增大样品沉积在柱内,用能溶解样品的溶剂冲洗（将检测器和柱断开）可正向冲，反向冲。柱内硬件有问题： 滤片堵塞，换新滤片;

柱头塌陷,用相同填料填充、修补。第34页,共45页，2024年2月25日，星期天4、色谱柱4)保留时间改变

不同柱保留时间的变化,主要是填料差异造成的,不同牌号柱出峰顺序不变，保留时间有小的变化。若峰顺序变化，保留时间变化较大，应考虑换柱或优化分离条件。对专门的分析最好用同一批号的柱子。第35页,共45页，2024年2月25日，星期天由色谱柱引起的故障故障现象解决办法过滤片堵塞

压力增高、N下降、峰形差倒柱冲洗或换过滤片柱头塌陷峰分叉、N下降修补柱头健合相流失保留值改变、峰形差、N下降换柱样品堵塞压力高用能溶解样品的溶剂冲洗强吸收样品N下降、保留值小强溶剂反冲第36页,共45页，2024年2月25日，星期天5、检测器基线噪声大,灵敏度低,灯（光源）的故障；

氘灯寿命:1000h

汞灯和钨灯寿命:2000h

一般使用6个月以上可能接近寿命期限,可以考虑更换新灯.

紫外—可见光检测器第37页,共45页，2024年2月25日，星期天5、检测器b.流动池内有气泡用脱气甲醇，不同流量冲洗。c.池堵塞（入口、出口、池内）用可溶堵塞物的溶剂冲洗（缓冲盐用水冲洗),d.池污染用异丙醇、二氯甲烷、6mol/LHNO3

冲洗.

紫外—可见光检测器第38页,共45页，2024年2月25日，星期天5、检测器e.测量池和参比池失配

UV以空气为参比，一般不扣流动相本底，若用有紫外吸收的流动相，参比信号不为零，会出现倒峰和伪峰,此时，选择合适的流动相。

紫外—可见光检测器第39页,共45页，2024年2月25日，星期天5、检测器f.时间常数选择(过滤噪声）有的仪器有固定的时间常数，有的需设置时间常数。时间常数太小,噪声增大;时间常数太大,出现宽峰、拖尾或矮峰。时间常数的设置一般根据经验估计，小颗粒柱常数小，可选最窄峰宽的1/10作为时间常数,对4.6×(150-250)mm，5um柱，可选0.5sor1s

紫外—可见光检测器第40页,共45页，2024年2月25日，星期天5检测器

紫外—可见光检测器

g.非线性响