血液及其成分的保存运输和领发

关于血液及其成分的保存运输和领发全血在保存时会发生什么样的变化？全血保存主要需要解决哪些问题？第2页,共98页，2024年2月25日，星期天第一节全血的保存血液在贮存中的变化(一)血浆的变化项目保存液保存天数07142135血浆pHACD7.006.796.736.71

CPD7.207.006.896.84

第3页,共98页，2024年2月25日，星期天第一节全血的保存三、血液在贮存中的变化(一)全血的变化项目保存液保存天数07142135血浆钠离子(mmol)ACD172158150146CPD175163155152血浆钾离子(mmol)ACD10202935CPD3.911.917.221CPDA-127.3血浆Hb(mg/L)ACD100220350530CPD1778125191CPDA-182

461第4页,共98页，2024年2月25日，星期天第一节全血的保存血液在贮存中的变化血小板白细胞5天之后逐渐死亡24h之后功能逐渐丧失第5页,共98页，2024年2月25日，星期天第一节全血的保存血液在贮存中的变化不稳定的凝血因子活性逐渐下降第6页,共98页，2024年2月25日，星期天第一节全血的保存血液在贮存中的变化红细胞膜蛋白、脂质发生变化，钾离子降低，钠、钙离子升高。双凹形变成球形或桑椹形，脆性增加，易发性溶血。第7页,共98页，2024年2月25日，星期天第一节全血的保存三、血液在贮存中的变化红细胞的变化项目保存液保存天数07142135ATP(%)CPD1009683CPDA-1100968370572,3-DPGACD100602310CPD100998044CPDA-11009980445红细胞存活率(%)ACD100988570CPD100988580CPDA-110098908579第8页,共98页，2024年2月25日，星期天成熟红细胞不仅无细胞核，而且也无线粒体、核蛋白体等细胞器，不能进行核酸和蛋白质的生物合成，也不能进行有氧氧化，不能利用脂肪酸。血糖是其唯一的能源。红细胞携带O2,自身不消耗O2,其内电解质以钾最多、钠含量较少,与血浆的钾钠含量相反。红细胞内Ca离子浓度低于血浆。红细胞的特点第9页,共98页，2024年2月25日，星期天主要途径磷酸戊糖旁路葡萄糖酵解合成ATP：合成2,3-DPG（2,3-二磷酸甘油酸）控制静脉侧氧气的释放和维持Hb二价铁，进行氧气的传递通过磷酸戊糖通路代谢，为红细胞提供另一种还原力，在红细胞氧化还原系统中发挥重要作用，具有保护膜蛋白、血红蛋白及酶蛋白的琉基不被氧化，还原高铁血红蛋白等多种功能。葡萄糖磷酸化、变构、裂解2分子乳酸＋2ATP红细胞能量代谢

第10页,共98页，2024年2月25日，星期天第11页,共98页，2024年2月25日，星期天成熟红细胞的糖酵解特点：红细胞糖酵解的特点是在酵解过程中有相当数量的1.3-DPG转变成2.3-DPG，后者再脱磷酸变成3-PG，并进一步酵解产生乳酸。此2.3-DPG侧支循环称2.3-DPG支路，产生支路的原因是红细胞中存在DPG变位酶和2.3-DPG磷酸酶，前者活性大于后者，故可使2.3-DPG堆积起来。2.3-DPG生成的主要生理意义在于降低Hb对氧的亲和力，在组织氧分压较低的情况下，HbO2放出氧适应组织需要。第12页,共98页，2024年2月25日，星期天血红蛋白与氧亲和性增加2,3-DPG含量减少氧解离曲线向左移组织氧供给不足P50是指血红蛋白氧饱和度为50%时的血氧分压，可以反映Hb与O2的亲和力。P50增大，氧离曲线右移，表示Hb与O2的亲和力小，P50减小，氧离曲线左移，说明亲和力大。

2,3-DPG的生理意义第13页,共98页，2024年2月25日，星期天维持Na+-K-ATP酶(钠泵)功能。通过ATP提供能量,维持K+的浓度在红细胞内比血浆高5倍。所以,红细胞产生的ATP主要用于维持红细胞膜Na+-K-ATP酶酶的正常功能,以保证红细胞的离子平衡。在保存过程中,红细胞膜和膜蛋白的损伤以及葡萄糖的持续消耗引起的ATP供能减少都会影响Na+-K-ATP酶功能的正常发挥,导致细胞内K+的逸出,从而使血浆K+浓度不断升高。红细胞ATP的功能（红细胞内糖代谢的意义）第14页,共98页，2024年2月25日，星期天2、维持红细胞膜上钙泵一的正常运转，将红细胞内的Ca2+泵入血浆以维持红细胞内的低钙状态。正常情况下，红细胞内的Ca2+浓度很低（20umol/L)。，而血浆Ca2+的浓度为2-3mmol/L。血浆内钙离子会被动扩散进入红细胞。缺乏ATP时，钙泵不能正常运行，钙将聚集并沉积于红细胞膜上，使膜失去柔韧性而趋于僵硬，使红细胞易被破坏红细胞ATP的功能（红细胞内糖代谢的意义）第15页,共98页，2024年2月25日，星期天维持红细胞膜上脂质与血浆脂蛋白中的脂质进行交换。红细胞膜的脂质处于不断更新中，此过程需消耗ATP。缺乏ATP时，脂质更新受阻，红细胞可塑性降低，易于破坏少量用于谷胱甘肽的生物合成。用于葡萄糖的活化，启动糖酵解过程。红细胞ATP的功能（红细胞内糖代谢的意义）第16页,共98页，2024年2月25日，星期天红细胞内的谷胱甘肽代谢红细胞内谷胱甘肽含量很高(2mmol/L)，而且几乎全是还原型的，主要生理功能是对抗氧化剂对巯基的氧化。第17页,共98页，2024年2月25日，星期天第一节全血的保存第18页,共98页，2024年2月25日，星期天第一节全血的保存对于需要短时间内纠正载氧能力的患者和特别经受不住组织缺氧的患者输入2,3-DPG水平低的血是无益的，应该给这些患者输注保存期不超过7~10天的血液。第19页,共98页，2024年2月25日，星期天第一节全血的保存二、血液保存需要解决的问题需解决的问题

血液凝固

红细胞溶血放氧能力下降抗凝剂红细胞营养代谢抗溶血剂改善放氧保存容器第20页,共98页，2024年2月25日，星期天红细胞保存液考虑的几个方面保护细胞的能量产生机构，使其维持正常结构和功能尽量减慢细胞代谢速度，减少能量消耗并供应能量物质。其他：抗氧化剂的作用？改善保存容器？第21页,共98页，2024年2月25日，星期天第一节全血的保存常用血液保存液的成分：1、抗凝剂血液抗凝剂是防止血液凝固和红细胞被破坏的化学物质

常用的抗凝剂有哪些？第22页,共98页，2024年2月25日，星期天第一节全血的保存血液保存液的成分

(一)血液抗凝剂

枸橼酸钠

肝素EDTA·2Na原理CaThrombinCa应用实验室检测血液标本的抗凝及外科体外循环手术的抗凝实验室检测血液标本的抗凝全血及血液成分保存的抗凝剂第23页,共98页，2024年2月25日，星期天第一节全血的保存葡萄糖的在血液中浓度应为0.5%~l%，以0.5%为宜

枸橼酸钠+

葡萄糖葡萄糖用于维持红细胞代谢，延长红细胞的保存时间血液保存液的成分：2、提供红细胞的能量代谢葡萄糖第24页,共98页，2024年2月25日，星期天第一节全血的保存腺嘌呤提高ATP水平和活性的另一办法就是在保存液中加入少量腺嘌呤腺嘌呤磷酸腺苷（AMP）磷酸化ATP血液保存液的成分：2、提供红细胞的能量代谢第25页,共98页，2024年2月25日，星期天第一节全血的保存血液保存液的成分：3、抗溶血剂目前国际上使用较多的是甘露醇，它的用量很小，一般在1％以下。

蔗糖山梨醇甘露醇具有缓解红细胞溶血的功能和加固细胞膜的作用，而不影响红细胞代谢第26页,共98页，2024年2月25日，星期天第一节全血的保存血液保存液的成分：4、改善红细胞的放氧能力ACD或CPD血液保存到l周和2周后，其红细胞放氧能力均降到50%，对于即刻需要纠正缺氧的患者，输注保存时间长的血液是不适宜的。第27页,共98页，2024年2月25日，星期天第一节全血的保存血液保存液的成分：4、改善红细胞的放氧能力血红蛋白的解离度红细胞的放氧能力影响因素：CO2分压、O2分压、pH和2,3-DPG含量及其生成有关酶系有关第28页,共98页，2024年2月25日，星期天第一节全血的保存一、全血在(4±2)℃时的保存

4、改善红细胞的放氧能力解决的方法：1、保存液中加NaHCO3，所产生的C02，可由内在的Ca(OH)2来消除，避免pH降低，有利于2,3-DPG的合成2、加磷酸二羟丙酮，可以增加2,3-DPG含量。3、加丙酮酸盐、通过辅酶Ⅰ系统增加1,3-二磷酸甘油酸（1,3-DPG），然后变成2,3-DPG。4、加维生素C，增加还原力，进而维持有关酶的活性。第29页,共98页，2024年2月25日，星期天第一节全血的保存全血在(4±2)℃时的保存

保存温度低温保存排放整齐红细胞代谢缓慢，乳酸生成速度下降，pH下降速度也变缓慢。维持红细胞正常代谢，血袋要排放整齐，避免重叠堆积。第30页,共98页，2024年2月25日，星期天温度对红细胞保存的影响6℃以上时,无法保证血液成分的活性和有效性。高于10℃红细胞破坏增加,10℃以上超过30min游离血红蛋白的含量逐渐增加,pH下降,血钾浓度也逐渐上升。保存温度低于下限2℃时,红细胞可能溶解破裂,输给患者可能造成输血不良反应。储存温度≦6℃可最大限度地抑制血液中的细菌生长。在不正确的条件下储存30min以上的血液有发生细菌污染和(或)细胞功能丧失的可能第31页,共98页，2024年2月25日，星期天第一节全血的保存一、全血在(4±2)℃时的保存

保存容器聚乙烯烃袋聚氯乙烯（PVC)袋全血、红细胞等的保存血小板的保存第32页,共98页，2024年2月25日，星期天第一节全血的保存血液保存液

ACD保养液（枸櫞酸盐-葡萄糖-枸橼酸）pH5.0321天CPD保养液（枸櫞酸盐-葡萄糖-枸橼酸-磷酸盐）pH5.6321天CPDA保养液(枸櫞酸盐-葡萄糖-枸橼酸-磷酸盐-腺嘌呤)pH5.6335天加入磷酸盐加入腺嘌呤第33页,共98页，2024年2月25日，星期天第一节全血的保存二、血液保存液

第34页,共98页，2024年2月25日，星期天第一节全血的保存三、血液在贮存中的变化(二)贮存期（shelflife）全血，聚氯乙烯塑料袋，4℃条件下贮存：ACD或CPD保存液：贮存期为21天CPDA-1保存液：贮存期为35天第35页,共98页，2024年2月25日，星期天

第二节红细胞的保存一、浓缩红细胞保存4℃保存保存液是全血保存液从采血日起，与相应的保存液的储存期一致第36页,共98页，2024年2月25日，星期天

第二节红细胞的保存二、添加剂红细胞保存浓缩红细胞剩余营养物质少黏稠贮存中易发生溶血第37页,共98页，2024年2月25日，星期天

第二节红细胞的保存二、添加剂红细胞保存1、浓缩红细胞加羟乙基淀粉（分子量3万）溶液在(4±2)℃贮存可保存14天。2、浓缩红细胞加磷酸腺嘌呤及庆大霉素的新维代浆血，在(4±2)℃可保存35天。(一)含胶体的红细胞悬液（胶体代浆血）第38页,共98页，2024年2月25日，星期天

第二节红细胞的保存二、添加剂红细胞保存(二)晶体盐红细胞悬液（晶体盐代浆血）添加剂成分保存期备注生理盐水24dSAGNaCl、腺嘌呤、葡萄糖35dSAGMNaCl、腺嘌呤、葡萄糖、甘露醇35d甘露醇－抗溶血剂SAGSNaCl、腺嘌呤、葡萄糖、蔗糖35d更低溶血率MAPNaCl、腺嘌呤、葡萄糖、甘露醇、磷酸盐35d补充抗凝低渗NH4ClNH4Cl、腺嘌呤、葡萄糖、甘露醇、枸橼酸盐120d输注前需洗涤，临床未使用SAGM－麦芽糖NaCl、腺嘌呤、葡萄糖、甘露醇、麦芽糖12w五联袋，每4周更换保存液第39页,共98页，2024年2月25日，星期天目前还不能断定高水平的ATP是否为氯化氨的作用,有关理论也有待于进一步研究。但作者深信新溶液的保存作用,且有可能是氨的存在是基于这种溶液的非渗透性低渗的原因并得以维持ATP的含量和延长红细胞的贮存期。第40页,共98页，2024年2月25日，星期天

第二节红细胞的保存二、添加剂红细胞保存(三)红细胞复苏液复苏液（丙酮酸盐、肌苷、葡萄糖、磷酸盐、腺嘌呤及NaCl）加入浓缩红细胞37℃保温1小时红细胞复苏：ATP和2,3-DPG恢复到正常水平输注前要去除复苏液第41页,共98页，2024年2月25日，星期天第三节保存血的肉眼观察和临床应用鉴定血液应在充分的自然光线或日光灯下进行（必要时可用放大镜检查）第42页,共98页，2024年2月25日，星期天第三节保存血的肉眼观察和临床应用一、正常血的肉眼观察血液流入袋内多呈暗红色，有时呈鲜红色血浆呈草黄色或淡黄色者为多见分层红细胞层呈暗红色白膜层分层界面清晰第43页,共98页，2024年2月25日，星期天第三节保存血的肉眼观察和临床应用一、正常血的肉眼观察血浆层内不应有肉眼可见的血块、絮状物或漂浮物。有时出现不同程度的均匀乳黄色或乳白色脂肪颗粒样漂浮物，在37℃加温时易溶解呈透明状若细菌污染则加热后不透明。第44页,共98页，2024年2月25日，星期天第三节保存血的肉眼观察和临床应用一、正常血的肉眼观察白膜层(buffycoat)，荷叶状、放射波浪状、雪花状、龟裂状等第45页,共98页，2024年2月25日，星期天第三节保存血的肉眼观察和临床应用一、正常血的肉眼观察红细胞层暗红色不含肉眼可见的血凝块或其他异常物质。如果有气泡：1周后逐渐消失正常在保存中如气泡日渐增多，则有污染产气杆菌的可能。第46页,共98页，2024年2月25日，星期天第三节保存血的肉眼观察和临床应用一、正常血的肉眼观察血液发出前，要仔细检查，观察是否有红细胞微小凝块，即冷凝集现象。冷凝集的血输用前加温，一般37℃5~10分钟经保温的血液若有溶血发生则应放弃。第47页,共98页，2024年2月25日，星期天第三节保存血的肉眼观察和临床应用二、异常血的肉眼观察一般库存血红细胞为暗红色，如果颜色变成暗紫色（高锰酸钾溶液颜色），则常常是细菌污染造成红细胞溶血的结果。这种血不能输用，必须进行细菌培养。(一)血液颜色变化第48页,共98页，2024年2月25日，星期天第三节保存血的肉眼观察和临床应用二、异常血的肉眼观察溶血：发生溶血的初期，血浆层底部首先变为红色或白细胞层出现玫瑰色的小环，这些现象是溶血初期的特征。溶血加重后，红色血浆部分则越来越多，并向上部扩展，最后全部血浆变为红色。(二)血浆层与红细胞层分界不清第49页,共98页，2024年2月25日，星期天第三节保存血的肉眼观察和临床应用二、异常血的肉眼观察抗凝不佳：形成肉眼见到的小凝块，严重时可形成整个大块血凝块往往沉降在血细胞层内，可使整齐的表面变成凹凸不平。(三)大量血块存在第50页,共98页，2024年2月25日，星期天第三节保存血的肉眼观察和临床应用二、异常血的肉眼观察库存血亦可能发生大小不等的纤维蛋白絮状凝块，漂浮于血浆层表面或悬浮在血浆层中。多量、大块的血凝块或纤维蛋白块的存在，均表明血液质量不佳，不仅输血困难，也可能发生输血反应。原来血液没有凝块，保存后产生了血凝块，则应怀疑可能是细菌污染所致。(三)大量血块存在第51页,共98页，2024年2月25日，星期天第52页,共98页，2024年2月25日，星期天第三节保存血的肉眼观察和临床应用二、异常血的肉眼观察乳糜：血浆内含过多脂肪。库存血如发生血浆明胶化现象，可能细菌污染，不能发出使用。(四)血浆层呈乳糜或明胶化第53页,共98页，2024年2月25日，星期天第四节血液的冷冻保存

血液的冷冻保存研究开始于20世纪40年代1949年Polge和Smith等人发现甘油对牛精子的冷冻保存有保护作用，从中得到启示第二年，Smith应用甘油作保护剂冷冻红细胞获得成功其后，血液冷冻保存的研究迅速发展，但是由于没能解决去除防冻保护剂的问题，临床尚未能得到广泛应用。第54页,共98页，2024年2月25日，星期天第四节血液的冷冻保存1956年，Tullis应用Cohn分离器将防冻剂甘油去除，从而使冷冻红细胞成功地应用于临床。1963年，Huggins发现红细胞在糖溶液中有可逆性的聚集反应，利用此反应原理，可用糖液洗涤法去除防冻保护剂—甘油。Meryman等人利用不同浓度梯度的氯化钠洗涤红细胞去除防冻剂第55页,共98页，2024年2月25日，星期天第四节血液的冷冻保存一、血细胞的低温损伤机制低温损伤机制why？第56页,共98页，2024年2月25日，星期天第四节血液的冷冻保存一、血细胞的低温损伤机制相变温度区间：细胞在冷冻或复溶过程中，发生液相和固相转变的温度区间在相变过程中，通常伴随吸热或者放热反应，以及体积的改变第57页,共98页，2024年2月25日，星期天第四节血液的冷冻保存一、血细胞的低温损伤机制降温过程的低温损伤：来自于降温、复温过程中必须经过的一个温度区间，即－15℃至－60℃之间。该温度区间对细胞具有杀伤性。第58页,共98页，2024年2月25日，星期天第四节血液的冷冻保存一、血细胞的低温损伤机制(一)盐变性学说慢速冷冻细胞损伤的主要原因：Lovelock等人提出，细胞外水结冰时，细胞收缩、脱水使细胞内外产生的高浓度电解质，作用于细胞膜，引起脂蛋白复合物的变性和部分类脂质的丢失，增加了细胞对阳离子的通透性，并使细胞膜上形成一些小孔，冰融化时水进入细胞内引起渗透休克第59页,共98页，2024年2月25日，星期天第四节血液的冷冻保存一、血细胞的低温损伤机制(二)冰晶的机械作用快速冷冻时细胞损伤的主要原因：在快速冷冻时，细胞内形成许多冰晶，冰晶作用于细胞膜，并使细胞膜上产生小孔，使得细胞膜不可逆地丧失其半透性第60页,共98页，2024年2月25日，星期天第四节血液的冷冻保存一、血细胞的低温损伤机制(二)冰晶的机械作用降温过快或过慢，都会杀死细胞在慢的降温速率下，细胞的低温损伤源于“盐变性”在高降温速率下，细胞的低温损伤源于“胞内冰”细胞冰冻保存的最佳降温速率，应该是慢到足以防止“胞内冰”，同时又快到使“盐变性”最小不同的细胞，由于细胞膜的生物特性不同，对最佳降温速率的要求也不同。第61页,共98页，2024年2月25日，星期天第四节血液的冷冻保存一、血细胞的低温损伤机制(三)化学损伤Levitt提出：冷冻时，在细胞脱水和溶质浓缩过程中，蛋白质组分异常靠近，最终使蛋白质分子中巯基(SH)和二硫键(SS)发生相互不可逆的反应，形成新的化学键，导致蛋白质变性而引起细胞死亡。第62页,共98页，2024年2月25日，星期天第四节血液的冷冻保存一、血细胞的低温损伤机制(四)细胞的融化反应细胞复融过程中的损伤：融化反应尚不明确第63页,共98页，2024年2月25日，星期天第四节血液的冷冻保存一、血细胞的低温损伤机制(四)细胞的融化反应经验总结：慢速冷冻的标本应慢速融化快速冷冻的标本则应采用快速融化的方法第64页,共98页，2024年2月25日，星期天第四节血液的冷冻保存二、冷冻保护剂冷冻保护剂可根据它们能否穿透细胞膜分为两种细胞内保护剂细胞外保护剂加入保护剂后，可降低溶液的冰点，并增加未冻水量小分子大分子能自由地通过细胞膜不能穿透细胞第65页,共98页，2024年2月25日，星期天第四节血液的冷冻保存二、冷冻保护剂胞内外盐数量一定未冻水量增加盐的浓度降低使细胞处于盐浓度较低的环境中第66页,共98页，2024年2月25日，星期天第四节血液的冷冻保存二、冷冻保护剂(二)冷冻保护剂的种类细胞内保护剂：甘油、DMSO、葡萄糖、乙二醇、丙三醇、甲醇、乙醇、乙酸胺、甲酞胺等。细胞外保护剂：乳糖、麦芽糖、木糖、聚乙烯吡咯烷酮(PVP)、右旋糖酐、白蛋白、羟乙基淀粉（HES）、聚乙二醇（PEG）、甘露醇等。第67页,共98页，2024年2月25日，星期天第四节血液的冷冻保存三、低温血液保存与玻璃化玻璃化就是生物材料在由液态向固态转化过程中没有相变热产生，也就是没有晶体生成。有人认为冷却速率达到10℃/秒，颗粒小于5~l0nm就不会使生物材料受到冷冻损伤，这就叫玻璃化。第68页,共98页，2024年2月25日，星期天第四节血液的冷冻保存三、低温血液保存与玻璃化添加冷冻保护剂或快速冷冻生物材料的目的就是使生物材料中的水处于容易达到玻璃化的状态。第69页,共98页，2024年2月25日，星期天第四节血液的冷冻保存四、红细胞甘油化、冷冻、融化和去甘油的方法高浓度甘油慢速冷冻低浓度甘油快速冷冻解冻：慢速融化去除甘油试剂可用糖液聚集法或不同浓度梯度氯化钠洗涤法解冻：快速融化去除甘油试剂可用不同浓度梯度氯化钠溶液，由高渗逐渐过渡到等渗分次洗涤第70页,共98页，2024年2月25日，星期天第四节血液的冷冻保存五、冷冻红细胞的制备方法在我国普遍使用高浓度甘油慢速冷冻第71页,共98页，2024年2月25日，星期天第四节血液的冷冻保存五、冷冻红细胞的制备方法高浓度甘油慢速冷冻盐液离心洗涤法糖液聚集洗涤法按解冻后洗脱甘油的方法：

方法：先采用高张溶液使融化的高渗红细胞渗透压达到平衡，接着用逐渐减低的高张溶液进行分次洗涤，最后用含有葡萄糖的等渗NaCl悬浮第72页,共98页，2024年2月25日，星期天第四节血液的冷冻保存五、冷冻红细胞的制备方法等张溶液是指不引起红细胞膜变形的溶液，这个概念是从生理角度考虑的。有些溶质的等渗浓度与等张浓度相同或相近，如0.9%的氯化钠溶液，既是等渗溶液又是等张溶液。第73页,共98页，2024年2月25日，星期天第四节血液的冷冻保存五、冷冻红细胞的制备方法有些溶质如盐酸普鲁卡因、甘油、尿素等，等渗溶液不等于等张溶液。例如2.6%的甘油溶液与0.9%的氯化钠溶液具有相同的渗透压，但是2.6%的甘油100%溶血，所以是不等张的。高张溶液会使红细胞脱水皱缩，低张溶液会使红细胞吸水膨胀。第74页,共98页，2024年2月25日，星期天第四节血液的冷冻保存五、冷冻红细胞的制备方法先采用高张溶液使融化的高渗红细胞渗透压达到平衡，接着用逐渐减低的高张溶液进行分次洗涤，最后用含有葡萄糖的等渗NaCl悬浮内外高渗水高张水第75页,共98页，2024年2月25日，星期天第四节血液的冷冻保存五、冷冻红细胞的制备方法(一)慢速冷冻糖液聚集洗涤制备法1、糖液聚集洗涤法去甘油原理在pH5.2~6.1的范围内，血浆中的丙种球蛋白与红细胞膜的脂蛋白之间可形成一种可逆性的复合物第76页,共98页，2024年2月25日，星期天第四节血液的冷冻保存五、冷冻红细胞的制备方法(一)慢速冷冻糖液聚集洗涤制备法1、糖液聚集洗涤法去甘油原理当加入非电解质溶液时，如果糖、葡萄糖、蔗糖等，由于离子强度减小，与脂蛋白结合的球蛋白之间又可结合，使红细胞聚集成团块沉下来，除去甘油上清液第77页,共98页，2024年2月25日，星期天第四节血液的冷冻保存五、冷冻红细胞的制备方法(一)慢速冷冻糖液聚集洗涤制备法1、糖液聚集洗涤法去甘油原理当加入电解质如生理盐水或升高pH值，可使球蛋白之间的结合断开，也可使丙种球蛋白与红细胞膜脂蛋白之间的结合断开，使红细胞重新悬浮第78页,共98页，2024年2月25日，星期天加等体积甘油化试剂第四节血液的冷冻保存五、冷冻红细胞的制备方法(一)慢速冷冻糖液聚集洗涤制备法2、制备方法（国内改进）

ACD或CPD全血(200ml)

浓缩红细胞(90~120ml)

离心移出血浆

甘油化红细胞(室温平衡半小时)

甘油化：分浆后所得的浓缩红细胞转移到专用洗涤塑料袋中，袋内装有一由塑料管密封的电磁搅拌器。在电磁搅拌器的搅拌下缓缓加入等体积的甘油试剂。

第79页,共98页，2024年2月25日，星期天37~40℃水浴中融化第四节血液的冷冻保存冷冻红细胞解冻红细胞置-80℃冰箱或干冰中贮存去甘油红细胞加入等体积50%的葡萄糖溶液后，分别再用10%蔗糖溶液500mL洗脱3次。分别去除上清第80页,共98页，2024年2月25日，星期天临床输用测上清血红蛋白合格后第四节血液的冷冻保存悬浮红细胞加100mL0.9%NaCl洗涤，离心去上清，再加100mL0.9%NaCl重新悬浮红细胞第81页,共98页，2024年2月25日，星期天第四节血液的冷冻保存五、冷冻红细胞的制备方法(一)慢速冷冻糖液聚集洗涤制备法洗脱甘油：国外均采用5%果糖进行洗脱甘油，因果糖价格昂贵，我国用蔗糖代替果糖比较经济。第82页,共98页，2024年2月25日，星期天第四节血液的冷冻保存五、冷冻红细胞的制备方法(二)慢速冷冻盐液洗涤制备法使用不同浓度梯度的NaCl溶液先由高渗逐渐过度到等渗，可用大容量离心机反复离心或用连续离心机分离、洗脱掉冷冻红细胞的防冻剂，达到去甘油的目的。此方法比糖液洗涤法经济，红细胞回收率高，并且质量好第83页,共98页，2024年2月25日，星期天第四节血液的冷冻保存五、冷冻红细胞的制备方法(二)慢速冷冻盐液洗涤制备法1、制备方法加入160mL57.1％甘油化试剂ACD或CPD全血(200ml)

浓缩红细胞(90~120ml)

离心移出血浆

甘油化红细胞第84页,共98页，2024年2月25日，星期天37~40℃水浴中解冻第四节血液的冷冻保存冷冻红细胞解冻红细胞室温平衡半小时，置－80℃冰箱或干冰中贮存去甘油红细胞加入40mL9%NaCl，再加0.9％NaCl250ml，离心去上清，再加0.9%NaCl400~500mL离心去上清，再用0.9%NaCl洗涤一次第85页,共98页，2024年2月25日，星期天临床输用测上清血红蛋白合格后第四节血液的冷冻保存悬浮红细胞加100mL0.9%NaCl第86页,共98页，2024年2月25日，星期天第四节血液的冷冻保存五、冷冻红细胞的制备方法(三)快速冷冻红细胞制备方法1、制备方法加入等体积甘油化试剂ACD或CPD全血(200ml)

浓缩红细胞(90~120ml)

离心移出血浆

甘油化红细胞第87页,共98页，2024年2月25日，星期天45℃水浴中3分钟内完全融化第四节血液的冷冻保存冷冻红细胞解冻红细胞－196℃冰冻，液