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第第页土壤N-乙酰-β-D-葡萄糖苷酶（S-NAG）试剂盒说明书土壤N乙酰βD葡萄糖苷酶（SolidNacetylβDglucosidase,SNAG）试剂盒说明书微量法100管/48样注意：正式测定前务必取23个预期差异较大的样本做预测定测定意义：SNAG是溶酶体中的一种酸性水解酶，由土壤微生物分泌。SNAG活性变化与机体某些病理状态密切相关。测定原理：SNAG分解βN乙酰氨基葡萄糖苷生成对硝基苯酚，后者在400nm有最大吸收峰，通过测定吸光值升高速率来计算NAG活性。自备用品：可见分光光度计/酶标仪、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、微量石英比色皿/96孔板、甲苯（不允许快递）和蒸馏水。试剂组成和配制：试剂一：甲苯5mL×1瓶，4℃保存；（自备）试剂二：粉剂×1瓶，20℃保存；临用前加入10mL蒸馏水，充分溶解备用，用不完的试剂仍20℃保存；试剂三：液体20mL×1瓶，4℃保存；试剂四：液体15mL×1瓶，4℃保存；样品处理：新鲜土样自然风干或37度烘箱风干，过30~50目筛。测定步骤：1、分光光度计或酶标仪预热30min以上，调节波长至400nm，蒸馏水调零。2、加样表试剂名称测定管对照管风干土样（g）0.020.02试剂一（μL）1010室温振荡混匀15min90℃振荡混匀15min试剂二（μL）130蒸馏水130试剂三（μL）160160混匀，37℃振荡反应1h后，90℃水浴5min（盖紧，防止水分散失），流水冷却。10000g25℃离心10min，取上清液（在EP管或96孔板中加入下列试剂）上清液（μL）7070试剂四（μL）130130充分混匀，室温静置2min后，400nm处测定吸光值A，计算ΔA=A测定管A对照管。每个测定管设一个对照管。SNAG活力计算：a.用微量石英比色皿测定的计算公式如下标准条件下测定的回归方程为y=0.00645x0.0054；x为标准品浓度（μmol/L），y为吸光值。单位的定义：每天每g土样中产生1μmol对硝基苯酚定义为一个酶活力单位。SNAG活力（μmol/d/g土样）＝(ΔA+0.0054)÷0.00645×V反总÷W÷T=55.81×(ΔA+0.0054)T：反应时间，1h=1/24d；V反总：反应体系总体积：3×104L；W：样本质量，0.02g。b.用96孔板测定的计算公式如下标准条件下测定的回归方程为y=0.0043x0.0054；x为标准品浓度（μmol/L），y为吸光值。单位的定义：每天每g土样中产生1μmol对硝基苯酚定义为一个酶活力单位。SNAG活力（μmol/d/g土样）＝(ΔA+0.0054)÷0.0043×V反总÷W÷T=83.72×(

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