![耐药结核病诊断新技术_第1页](http://file4.renrendoc.com/view2/M02/19/38/wKhkFmYWwsaAb_sRAAB51hCK7WU319.jpg)
![耐药结核病诊断新技术_第2页](http://file4.renrendoc.com/view2/M02/19/38/wKhkFmYWwsaAb_sRAAB51hCK7WU3192.jpg)
![耐药结核病诊断新技术_第3页](http://file4.renrendoc.com/view2/M02/19/38/wKhkFmYWwsaAb_sRAAB51hCK7WU3193.jpg)
![耐药结核病诊断新技术_第4页](http://file4.renrendoc.com/view2/M02/19/38/wKhkFmYWwsaAb_sRAAB51hCK7WU3194.jpg)
![耐药结核病诊断新技术_第5页](http://file4.renrendoc.com/view2/M02/19/38/wKhkFmYWwsaAb_sRAAB51hCK7WU3195.jpg)
版权说明:本文档由用户提供并上传,收益归属内容提供方,若内容存在侵权,请进行举报或认领
文档简介
关于耐药结核病诊断新技术全球范围内结核病疫情严重
患病率高:新发患者1040万/年,其中有120万(11%)HIV患者;
死亡率高:每年死亡人数达140万(13.46%),HIV/TB:死亡人数40万(33.33%);
耐药率高:48万新发的MDR-TB病例和10万耐利福平结核病(RR-TB)病例;
接受MDR检测、报告和治疗的MDR-TB不足1/3,接受治疗的MDR-TB治愈成功率只有50%
2016年全球结核病报告第2页,共39页,2024年2月25日,星期天第3页,共39页,2024年2月25日,星期天2015年全球估计MDR-TB患者数第4页,共39页,2024年2月25日,星期天结核病快速及时诊断是结核病防控
重要因素第5页,共39页,2024年2月25日,星期天灵敏准确操作简便检测时间短闭管检测检测位点全面对新型耐药检测技术的要求第6页,共39页,2024年2月25日,星期天第7页,共39页,2024年2月25日,星期天基因芯片技术第8页,共39页,2024年2月25日,星期天结核病耐药与基因64-68%
rpsL基因突变70%embB基因突变70%65%耐药基因93%95%95%
rpoB基因突变利福平异烟肼50-70%
katG基因突变5-10%
inhA基因突变6-13%
ahpC基因启动子区域突变链霉素乙胺丁醇
多数研究报告提示:耐药的发生与结核杆菌的基因突变有关。总体上是基因一个或几个核苷酸突变(表现增加、缺失、替代),造成核苷酸编码错误致氨基酸错位排列,影响药物与靶位酶结合产生耐药第9页,共39页,2024年2月25日,星期天第10页,共39页,2024年2月25日,星期天基因芯片(原理)激光共焦扫描仪软件判读样品制备仪杂交仪
基因芯片方法是基于结核杆菌的利福平和异烟肼耐药性相关的rpoB/katG/inhA的基因位点发生突变,通过PCR扩增、和固定于尼龙膜上的寡核苷酸探针进行杂交、扫描,检测荧光信号的有无,判断特定位点的突变情况和结核菌耐药性。基因芯片仪和试剂获国家SFDA和欧盟CE认证11第11页,共39页,2024年2月25日,星期天基因芯片法第12页,共39页,2024年2月25日,星期天第13页,共39页,2024年2月25日,星期天利福平的耐药位点第14页,共39页,2024年2月25日,星期天同时鉴定MTC与21种NTM第15页,共39页,2024年2月25日,星期天非结核分枝杆菌第16页,共39页,2024年2月25日,星期天在国内4个省的4个地市级CDC进行了评估。第17页,共39页,2024年2月25日,星期天结核病和非结核的诊断第18页,共39页,2024年2月25日,星期天特点标本:菌株、涂阳痰标本时间:约8小时优点:高通量灵敏度、特异度高第19页,共39页,2024年2月25日,星期天国家结核病参比实验室推荐建议基因芯片可以用于:
可疑耐药结核病患者筛查,它有望代替利福平和异烟肼的传统药敏试验推荐理由:在我国获得注册证书;国内研究显示其敏感性和特异性较好;民族品牌数据显示在我国具有可行性,符合成本效果;可能使用层级:
地市和省级(医疗机构和疾病预防机构)第20页,共39页,2024年2月25日,星期天探针熔解曲线技术第21页,共39页,2024年2月25日,星期天工作原理
在一定环境下,DNA双链在其长度和序列一定时,Tm值也一定,当发生错配时,Tm值下降,下降的幅度与发生错配的碱基数目、类型和位置有关。ΔTm第22页,共39页,2024年2月25日,星期天96%利福平耐药突变发生在rpoB507-533共81bp区域内利福平耐药突变检测体系示意图根据靶序列熔点的变化,检测rpoB基因
是否含有突变,获得利福平耐药信息第23页,共39页,2024年2月25日,星期天根据不同的ΔTm值可以判断出ropB可能不同的碱基发生突变第24页,共39页,2024年2月25日,星期天第25页,共39页,2024年2月25日,星期天根据不同的ΔTm值可以判断出ropB可能不同的碱基发生突变第26页,共39页,2024年2月25日,星期天异烟肼耐药突变检测体系示意图通过检测katG315、inhA启动子和、ahpC启动子区、inhA94、密码子的突变与否确定样品对异烟肼的耐药性。第27页,共39页,2024年2月25日,星期天根据不同的ΔTm值可以判断出异烟肼不同的碱基序列发生突变第28页,共39页,2024年2月25日,星期天根据不同的ΔTm值可以判断出异烟肼不同的碱基序列发生突变第29页,共39页,2024年2月25日,星期天乙胺丁醇链霉素氟喹诺酮每个突变都表现出特有的谱线对应独特的熔点,软件可以自动地给出突变类型,即使发生不均一突变的情况,也可以分辨出来.第30页,共39页,2024年2月25日,星期天步骤二加入1-96个提取样本到检测管中步骤三集成多重PCR和结果自动报告步骤一自动提取1-24份样本操作流程总耗时约3小时,手工操作时间约15分钟第31页,共39页,2024年2月25日,星期天(一)DNA提取~40min高质量的样本DNA第32页,共39页,2024年2月25日,星期天(二)加入PCR反应管第33页,共39页,2024年2月25日,星期天(三)PCR过程和自动判读第34页,共39页,2024年2月25日,星期天痰标本纯化DNAqPCR检测结果靶序列扩增曲线:内参扩增曲线:不同标本的内参扩增结果一致,显示纯化后的DNA溶液对扩增无抑制。高纯度模板DNA是分子检测可靠性的关键!第35页,共39页,2024年2月25日,星期天临床试验结果此外,在北京胸科医院、广州胸科医院、沈阳胸科医院、乌鲁木齐胸科医院、山东省胸科医院、河南省CDC、厦门市CDC等单位进行临床应用或验证,均获得满意结果。第36页
温馨提示
- 1. 本站所有资源如无特殊说明,都需要本地电脑安装OFFICE2007和PDF阅读器。图纸软件为CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.压缩文件请下载最新的WinRAR软件解压。
- 2. 本站的文档不包含任何第三方提供的附件图纸等,如果需要附件,请联系上传者。文件的所有权益归上传用户所有。
- 3. 本站RAR压缩包中若带图纸,网页内容里面会有图纸预览,若没有图纸预览就没有图纸。
- 4. 未经权益所有人同意不得将文件中的内容挪作商业或盈利用途。
- 5. 人人文库网仅提供信息存储空间,仅对用户上传内容的表现方式做保护处理,对用户上传分享的文档内容本身不做任何修改或编辑,并不能对任何下载内容负责。
- 6. 下载文件中如有侵权或不适当内容,请与我们联系,我们立即纠正。
- 7. 本站不保证下载资源的准确性、安全性和完整性, 同时也不承担用户因使用这些下载资源对自己和他人造成任何形式的伤害或损失。
最新文档
- 生物学科德育渗透计划
- 社区服务交流计划
- 学校社团与社会的联系计划
- 2025年Γ-球蛋白三类项目建议书
- 2025年垃圾分类项目发展计划
- 2025年青霉素类抗菌药物项目建议书
- 关于提升工作效率的内部培训通知
- 高中生数学思维训练故事解读
- 2025年保健旅游项目合作计划书
- 公司员工福利与激励机制实施细则
- 2022年北京海淀区高三一模物理试题和答案
- 施工工法的编写与申报(完整版)
- 歇后语大全500条
- 学前儿童表演游戏的组织与指导(学前儿童游戏课件)
- 中小学教师校园安全培训
- 2024年北京法院聘用制审判辅助人员招聘笔试参考题库附带答案详解
- 建筑用真空陶瓷微珠绝热系统应用技术规程
- (高清版)DZT 0276.13-2015 岩石物理力学性质试验规程 第13部分:岩石比热试验
- (高清版)DZT 0214-2020 矿产地质勘查规范 铜、铅、锌、银、镍、钼
- (高清版)DZT 0017-2023 工程地质钻探规程
- 华为狼性培训课件
评论
0/150
提交评论