化妆品中16α-羟基泼尼松龙的测定

化妆品中16α－羟基泼尼松龙的测定【摘要】目的：随着化妆品成为人们日常生活中必不可少的用品，化妆品中的成分检测变得尤为重要。本研究旨在检测化妆品中16α-羟基泼尼松龙的含量，为化妆品的安全性评估提供参考。方法：本实验我们将使用液相色谱质谱联用法进行分析，仪器型号：Agilent6495，色谱柱：C18柱（100mm×2.1mm，2.7μm）或等效色谱柱，以乙腈-水为流动相，流速：0.3mL/min，柱温：30℃，梯度洗脱。结果：该方法回收率为83.22%～115.79%，相对标准偏差为1.1%～2.7%(n=6)。方法检出限为0.01ug/g，线性相关系数大于0.999。结论：本实验方法专属性强，灵敏度高，可以用于测定化妆品中16α－羟基泼尼松龙的含量。【关键词】16α-羟基泼尼松龙；化妆品；高效液相色谱质谱联用Determinationof16α-HydroxyprednisoloneinCosmetics[Abstract]Purpose:Withcosmeticsbecominganessentialiteminpeople'sdailylives,ingredienttestingincosmeticshasbecomeparticularlyimportant.Thisstudyaimedtodetectthecontentof16α-hydroxyprednisoloneincosmetics,providingareferenceforthesafetyassessmentofcosmetics.Methods:Inthisexperiment,weusedliquidchromatography-tandemmassspectrometryforanalysis.TheinstrumentmodelwasAgilent6495,thechromatographiccolumnwasaC18column(100mm×2.1mm,2.7μm)oranequivalentchromatographiccolumn,withacetonitrile-waterasthemobilephase,aflowrateof0.3mL/min,acolumntemperatureof30℃,andgradientelution.Results:Therecoveryrateofthemethodwas83.22%to115.79%,andtherelativestandarddeviationwas1.1%to2.7%(n=6).Thedetectionlimitofthemethodwas0.01μg/g,andthelinearcorrelationcoefficientwasgreaterthan0.999.Conclusion:Thisexperimentalmethodhasstrongspecificityandhighsensitivity,andcanbeusedtodeterminethecontentof16α-hydroxyprednisoloneincosmetics.[Keywords]16α-hydroxyprednisolonecosmeticshighperformanceliquidchromatography-massspectrometry 目录1前言 12实验部分 32.1试剂和材料 32.2仪器和设备 32.3试样制备与保存 32.4分析步骤 32.4.1空白基质提取液 32.4.216α-羟基泼尼松龙标准溶液的配制 42.4.3基质标准中间液的配制 42.4.4基质标准系列溶液 42.4.5样品处理 42.4.6加样回收样品的制备 42.4.7色谱条件 42.4.8质谱条件 52.4.9定性判定 52.4.10定量测定 62.4.11平行试验 62.4.12空白试验 63结果与结论 73.1线性考察： 73.2检出限 73.3样品测定 83.4加样回收率及重复性 83.5进样精密度 103.6色谱图与质谱图 114讨论 124.1实验结果分析 124.1.1基质标准曲线线性良好 124.1.2检出浓度与方法检出浓度相当 124.1.3回收率满足检验要求 124.1.4进样精密度良好 124.2实验结果的意义和价值 124.3实验结果的不足和改进方向 134.3.1样品来源的限制 134.3.2方法的优化和改进 134.3.3结果的验证和确认 134.4总结 14参考文献 15致谢 171前言随着人们生活水平的不断提高，化妆品已成为人们日常生活中必不可少的用品。但是，随着化妆品市场的不断扩大和消费者对化妆品安全性的重视，越来越多的人开始关注化妆品中的化学成分。因此，化妆品中的成分检测变得尤为重要。本研究旨在检测化妆品中16α-羟基泼尼松龙的含量，为化妆品的安全性评估提供参考。根据相关文献和报道，16α-羟基泼尼松龙是一种合成皮质类固醇激素，其分子结构与泼尼松龙类似，但它的化学结构中有一个羟基基团，这使得其具有更强的药理活性和生物利用度[1]。16α-羟基泼尼松龙的生物利用度是泼尼松龙的2倍左右，这意味着它可以在更小的剂量下产生更强的药理效果[2]。这也是为什么化妆品厂商愿意在其产品中添加16α-羟基泼尼松龙的原因之一。作为一种皮质类固醇激素，16α-羟基泼尼松龙具有广泛的药理活性，主要包括抗炎、抗过敏、止痒等作用。它可以通过抑制炎症反应和免疫反应来减轻皮肤炎症和过敏反应，从而缓解皮肤瘙痒、红肿等症状。同时，它还可以促进皮肤的愈合和修复，使肌肤更加光滑、柔软、健康[3]。尽管16α-羟基泼尼松龙具有诸多优点，但其使用也存在一些潜在的风险和副作用。长期大剂量使用可能会导致皮肤萎缩、色素沉着、毛细血管扩张等不良反应，甚至会影响肾上腺皮质功能[4]。因此，在使用含有16α-羟基泼尼松龙的化妆品时，需要注意控制使用量和使用频率，以避免不必要的副作用。近年来，化妆品市场需求逐渐增长，但化妆品中的化学成分也成为消费者和监管机构关注的热点问题，16α-羟基泼尼松龙显然也是其中一种。在中国，化妆品成分的检测和评估标准正在不断完善，但是16α-羟基泼尼松龙尚未制定具体的限量标准[5]。因此，开展该研究对于推动化妆品行业的规范化发展具有积极意义。在国际上，欧盟、美国、日本等许多国家和地区已经出台了有关化妆品成分的监管法规和标准，其中也包括对于16α-羟基泼尼松龙的限制要求[6]。这些监管措施的出台，有助于化妆品企业遵循规范，保障消费者的健康权益，提高产品质量，推动化妆品行业的可持续发展。相比之下，中国的化妆品监管标准相对滞后，需要进一步完善和加强。在检测方法方面，目前已有一些文献报道了16α-羟基泼尼松龙的测定方法，包括薄层色谱法[7]、超高效液相色谱法[8]、分光光度法[9]、气相色谱质谱法[10]等。本研究旨在针对化妆品中的16α-羟基泼尼松龙进行测定，并评估其含量是否符合国内外相关的监管标准和安全要求。在方法方面，我们将使用液相色谱质谱联用法进行分析，液相色谱质谱联用法是一种高度敏感且准确的分析技术，能够提供极高的分析精度和准确度。这种方法将高效液相色谱和质谱联合使用，以便更好地分离和鉴定复杂样品中的化学成分。这种方法已被广泛应用于化妆品成分的分析中，并被证明是一种非常有效的方法[11]。相对于其他方法，液相色谱质谱联用法具有许多显著的优势。首先，该方法对复杂样品中的分离和检测非常敏感，可以检测到非常低浓度的化合物，而其他方法可能无法检测到这些化合物[12]。其次，该方法具有非常高的精度和准确度，能够准确地确定化合物的分子量和结构，而其他方法可能无法提供如此准确的结果[13]。此外，该方法易于操作且快速，可以在短时间内处理大量样品，从而提高了检测效率[14]。在样品的制备和处理方面，我们将参考相关文献和标准，并根据样品的性质和特点选择适当的提取、净化和富集方法[15]。我们将确保样品的处理和制备过程中不会引入任何干扰物，从而保证测定结果的准确性和可靠性。我们的方法将采用国内外相关的监管标准和安全要求[6，16-18]，以确保我们的测定结果符合相关标准和要求，从而为消费者提供更加安全和可靠的化妆品产品。通过本研究的开展，我们期望能够为化妆品行业提供有力的监管和保障，促进行业的可持续发展。同时，我们也希望能够引起更多人对于化妆品成分的关注和重视，倡导消费者正确使用化妆品，加强对于化妆品安全和质量的监督和管理。2实验部分2.1试剂和材料本实验中所用试剂均为分析纯及以上规格，水为符合GB/T6682规定的一级水；乙腈为色谱纯；50％乙腈：取纯乙腈、水按体积比1：1混合，摇匀；标准品：16α﹣羟基泼尼松龙（16alpha-hydroxyprednisolone）标准品，纯度≥98%。2.2仪器和设备高效液相色谱﹣三重四极杆质谱联用仪；分析天平：感量0.0001g和0.00001g；超声波清洗器；涡旋混合仪；高速离心机。2.3试样制备与保存为了确保化妆品中16α-羟基泼尼松龙的准确检测，样品应按照标签标示的贮存条件进行保存。在取样之前，需要检查封口的完整性，观察样品的性状和特征，并将样品混匀以确保代表性。当取出所需测定的部分时，应避免直接接触手部或其他可能污染样品的物品，如化妆品刷或化妆棉。应使用洁净的取样器具将样品取出，并避免将取样器具带入其他样品中。取出的样品应及时密封，避免暴露在空气中，以免影响样品的稳定性和准确性。在样品的密封保存过程中，应使用适当的贮存容器，如密封袋、玻璃瓶或塑料瓶，并确保贮存容器的密封性能良好。在贮存容器内，样品应保存在低温、阴凉、干燥的环境中，以防止湿度、光线、温度等外界因素对样品的影响。同时，应将样品存放在远离有害物质和异味的地方，避免污染样品。另外，为了确保检测结果的准确性和可重复性，应定期检查保存的样品，特别是在长期贮存或多次取用后。如有异常，应及时调整贮存条件或重新制备样品。2.4分析步骤2.4.1空白基质提取液称取空白试样0.2g（精确到0.0001g），置于10mL具塞比色管中，自“加入50%乙腈约9mL”起与样品同法处理，作为空白基质提取液。2.4.216α-羟基泼尼松龙标准溶液的配制精密量取16α-羟基泼尼松龙标准品20mg（精确到0.00001g），置于10mL容量瓶中，用乙腈溶解并定容至刻度，摇匀。取0.5ml置于100mL容量瓶中，用乙腈溶解并定容至刻度，摇匀，得质量浓度为10μg/ml的16α-羟基泼尼松龙标准溶液。2.4.3基质标准中间液的配制精密量取16α-羟基泼尼松龙标准溶液0.1mL，置于10mL容量瓶中，用空白基质提取液稀释至刻度，摇匀，制成16α-羟基泼尼松龙浓度为100ng/mL的基质标准中间液。基质标准中间液现用现配。2.4.4基质标准系列溶液量取基质标准中间液0.05、0.1、0.2、0.5、1ml，分别置于10mL容量瓶中，用空白基质提取液稀释至刻度，摇匀，制成浓度为0.5、1、2、5、10ng/mL基质标准系列溶液。基质标准系列溶液现用现配。2.4.5样品处理称取样品0.2g（精确到0.0001g），置于10mL具塞比色管中，加入50%乙腈约9mL，涡旋振荡，使试样与提取溶剂充分混匀。超声提取10min，静置至室温，用50%乙腈定容至刻度，摇匀，以10000r/min转速离心10min，取上清液经0.22μm有机滤膜过滤，滤液作为供试品溶液备用。同法制备随行空白溶液。2.4.6加样回收样品的制备称取样品0.2g（精确到0.0001g），置于10mL具塞比色管中，分别加入适量的基质标准中间液，混匀后按样品的制备方法处理，制成三个浓度水平的样品加标回收溶液，每个浓度制作6份。2.4.7色谱条件仪器型号：Agilent6495；色谱柱：C18柱（100mm×2.1mm，2.7μm），或等效色谱柱；流动相：A为水，B为乙腈。梯度洗脱程序见表2-1；流速：0.3mL/min；柱温：30℃；进样量：1μL。表2-1梯度洗脱程序时间（min）流动相A（%）流动相B（%）0.0080207.0080207.50109012.00109012.50802017.0080202.4.8质谱条件离子源：电喷雾离子源（ESI源）；监测模式：负离子多反应监测模式（MRM）。2.4.9定性判定首先，需要准备供试品溶液和标准溶液，并在相同的分析条件下对它们进行测定。这些条件包括但不限于：色谱柱类型和尺寸、流动相组成、温度、流速和检测器类型等。这样可以确保在实验过程中测量到的信号是可比较的。然后，需要观察样品中的色谱图，并寻找与16α-羟基泼尼松龙特征离子相关的色谱峰。如果存在这些色谱峰，需要测量它们的保留时间并与标准溶液的保留时间进行比较。如果它们的保留时间相同，这表明样品中可能存在16α-羟基泼尼松龙。此外，还需要选择一个或多个监测离子对，并测量它们在样品和标准溶液中的相对丰度比。这些监测离子对应该是与16α-羟基泼尼松龙特征离子相关的。如果样品中的相对丰度比与标准溶液的相对丰度比的最大偏差不超过表2-2规定的限制，则可以判定样品中存在16α-羟基泼尼松龙。总之，定性判定是在研究过程中确定化妆品中是否存在16α-羟基泼尼松龙的一个重要步骤。通过测量样品和标准溶液中的保留时间和相对丰度比，并将它们进行比较，可以判断样品中是否存在该化合物。表2-2定性确证时相对离子丰度比的最大允许偏差相对离子丰度（k）k＞50%50%≥k＞20%20%≥k＞10%k≤10%允许的最大偏差±20%±25%±30%±50%2.4.10定量测定取基质标准系列溶液依次测定，对于每个浓度的标准溶液，取一定量的溶液，然后进行待测组分的离子对的色谱分析，记录该浓度下的色谱峰面积。将待测组分的系列浓度作为横坐标，对应的色谱峰面积作为纵坐标，进行线性回归分析，得到基质标准曲线。为了保证曲线的准确性和可靠性，线性相关系数应大于0.99。接下来，需要取待测的化妆品供试品溶液，进行离子对的色谱分析，记录对应的色谱峰面积。然后将该色谱峰面积代入基质标准曲线中，根据回归方程计算出样品中待测组分的含量。需要注意的是，为了保证实验的准确性，需要进行多次测定，取平均值作为最终结果。同时，在实验过程中还需进行一系列的质量控制措施，例如重现性、准确度和精密度等的检测和控制，以确保实验结果的可靠性和可重复性。2.4.11平行试验按以上步骤，对同一样品进行双平行实验测定。2.4.12空白试验除不加试样外，均按上述测定条件和步骤进行。3结果与结论3.1线性考察：取基质标准中间液0.05、0.1、0.2、0.5、1ml，分别置于10mL容量瓶中，用空白基质提取液稀释至刻度，摇匀，制成浓度约为0.5、1、2、5、10ng/ml基质标准系列溶液。表3-1基质标准系列溶液浓度组分含量称样量（mg）基质标准中间液（ng/ml）STD1（ng/ml）STD2（ng/ml）STD3（ng/ml）STD4（ng/ml）STD5（ng/ml）16α-羟基泼尼松龙0.9820.21899.070.49530.99071.9814.9539.907表3-2基质标准曲线及线性组分线性范围（ng/mL）标准曲线线性方程相关系数（r）16α-羟基泼尼松龙（水基质）0.5~10y=8849.299650x-739.8970930.999716α-羟基泼尼松龙（乳液基质）0.5~10y=6995.074735x-620.7435070.9992由表3-2数据可知，在0.5~10ng/mL线性范围内，相关系数大于0.999，表明各化合物均具有良好的线性关系。3.2检出限检出限溶液制备：无基质检出限溶液：取质量浓度为10μg/ml的16α-羟基泼尼松龙标准溶液1ml，置于100mL容量瓶中，用50%乙腈溶解并定容至刻度，摇匀，取0.2ml置于100mL容量瓶中，用50%乙腈溶解并定容至刻度，摇匀，得浓度约为0.2ng/ml的无基质检出限溶液。基质检出限溶液：取100ng/mL的16α-羟基泼尼松龙基质标准中间液0.2ml，置于100mL容量瓶中，用空白基质提取液稀释至刻度，摇匀，得浓度约为0.2ng/ml的基质检出限溶液。表3-3检出限名称检出限溶液配制浓度(ng/ml)检出限溶液浓度方法检出浓度(µg/g)相对于溶液（ng/ml）相对于样品（μg/g）16α-羟基泼尼松龙0.19810.19810.00990.01本次实验配制的检出浓度为0.0099μg/g，与方法检出浓度0.01μg/g相当，且信噪比S/N>3，满足检验要求。3.3样品测定称取样品0.2g（精确到0.0001g），置于10mL具塞比色管中，加入50%乙腈约9mL，涡旋振荡，使试样与提取溶剂充分混匀。超声提取10min，静置至室温，用50%乙腈定容至刻度，摇匀，以10000r/min转速离心10min，取上清液经0.22μm有机滤膜过滤，滤液作为供试品溶液备用。同法制备随行空白溶液。表3-4样品测定结果组分编号结果(µg/g)16α-羟基泼尼松龙水＜0.01（检出浓度0.01）乳液＜0.01（检出浓度0.01）两份样品检测结果均小于0.01μg/g，均未检出16α-羟基泼尼松龙。3.4加样回收率及重复性称取样品0.2g（精确到0.0001g），置于10mL具塞比色管中，分别加入0.07、0.2、0.7ml的基质标准中间液（100ng/ml），混匀后按样品的制备方法处理，制成三个浓度水平的样品加标回收溶液，每个浓度制作6份。表3-5水基质加样回收率及重复性组分编号称样量（g）测得浓度（ng/ml）回收加入浓度（ng/ml）回收率（%）平均回收率（%）RSD（%）16α-羟基泼尼松龙水-D10.21070.65250.693594.0995.231.4水-D20.20160.656094.59水-D30.20040.670596.68水-D40.20330.666796.14水-D50.21240.647893.41水-D60.21150.669096.47水-Z10.20541.75001.98188.3489.282.8水-Z20.21091.795490.63水-Z30.20721.798190.77水-Z40.20671.820191.88水-Z50.21281.680684.84水-Z60.21471.768089.25水-G10.20336.64786.93595.8698.503.8水-G20.20826.471693.32水-G30.20916.934299.99水-G40.20506.753897.39水-G5020267.1850103.60水-G60.20036.9936100.84注：水基质样品中未检出16α-羟基泼尼松龙，样品平均含量按“0”计。表3-6乳液基质加样回收率及重复性组分编号称样量（g）测得浓度（ng/ml）回收加入浓度（ng/ml）回收率（%）平均回收率（%）RSD（%）16α-羟基泼尼松龙乳-D10.20740.64300.693592.72106.708.3乳-D20.21550.8030115.79乳-D30.21040.7457107.53乳-D40.20720.7778112.16乳-D50.22070.689599.42乳-D60.21660.7807112.57乳-Z10.21322.24281.981113.2297.4510.5乳-Z20.21662.0101101.47乳-Z30.22311.648583.22乳-Z40.21921.9955100.73乳-Z50.22921.816491.69乳-Z60.22061.869194.35乳-G10.22886.96136.935100.38107.514.9乳-G20.22567.1224102.70乳-G30.20877.5352108.65乳-G40.20967.4522107.46乳-G50.20497.9570114.74乳-G60.20617.7061111.12注：乳液基质样品中未检出16α-羟基泼尼松龙，样品平均含量按“0”计。回收率（%）=由表3-5和表3-6中的回收率数据可知，水基质样品回收率在84.84%~103.60%，乳液基质样品回收率在83.22%~115.79%，方法准确。3.5进样精密度取基质标准溶液连续进样6针，计算响应值的RSD（%）。表3-7水基质进样精密度组分编号响应值RSD（%）16α-羟基泼尼松龙（水基质）JMD1893241.1JMD292074JMD391253JMD491734JMD591899JMD691663表3-8乳液基质进样精密度组分编号响应值RSD（%）16α-羟基泼尼松龙（乳液基质）JMD1685792.7JMD270791JMD371339JMD471513JMD572688JMD674456表3-7和表3-8中的数据表明，相对标准偏差为1.1%～2.7%，精密度良好。3.6色谱图与质谱图图3-1对照品高效液相色谱图图3-2对照品质谱图根据图3-1和图3-2可知，液相色谱图和质谱图均十分准确清晰，本方法可以有效判断样品中是否存在待检品，以及进行定量分析。4讨论4.1实验结果分析4.1.1基质标准曲线线性良好由表3-2数据可知，基质标准曲线的线性良好。表明了该方法对目标物的测定具有良好的可靠性和准确性，从而为后续的实验提供了重要保障。4.1.2检出浓度与方法检出浓度相当检出浓度是一个指标，用于评估一种检测方法的灵敏度。由表3-3数据可知，检出浓度与方法检出浓度相当，说明该方法具有较高的灵敏度，能够有效地检测目标物。4.1.3回收率满足检验要求回收率是评估一种检测方法准确性和可靠性的重要指标。在本实验中，由表3-5和表3-6可知，水基质和乳液基质的样品回收率均在83.22%~115.79%之间，说明该方法的准确性较高，并且可以适用于不同类型的样品。4.1.4进样精密度良好由表3-7和表3-8可知，本实验中的方法准确性和进样精密度良好，说明该方法具有较高的重现性和稳定性，可以有效地应用于实际检测工作中。4.2实验结果的意义和价值当代社会，随着科技的不断进步和人类对健康与环境问题的日益关注，16α-羟基泼尼松龙成为了备受关注的化合物之一。它具有重要的生物学和医学意义，在药物研发、环境监测等领域有着广泛的应用。而检测16α-羟基泼尼松龙的含量，也成为了相关领域研究的必要前提。本实验探讨了化妆品中16α-羟基泼尼松龙的检测问题，采用液相色谱质谱联用法成功地测定了其含量。这一结果对于化妆品生产和监管方面有着重要的意义。首先，深入了解16α-羟基泼尼松龙的生物学和医学意义，有助于更好地理解其检测的重要性。作为一种重要的内分泌干扰物，16α-羟基泼尼松龙可以干扰动物和人的内分泌系统，影响许多生理过程。同时，它也是一种常用的激素类药物，例如用于治疗皮肤炎症、哮喘、关节炎等疾病。因此，对16α-羟基泼尼松龙含量的检测具有非常重要的临床和科研价值。其次，液相色谱质谱联用法作为一种目前广泛应用于化学和生物分析的高效、精确和灵敏的分析方法，对于16α-羟基泼尼松龙的检测也有着很大的优势。本实验成功地应用了这一方法，证明了其灵敏度高、准确性好、重复性好等优点，为相关领域的研究提供了重要的支持。进一步地，本实验结果也可帮助人们更好地了解16α-羟基泼尼松龙在化妆品中的含量情况。本方法可以应用于化妆品行业，对于化妆品生产企业和监管机构来说，对于检测产品质量和安全有着非常重要的作用。此外，本实验结果也可以拓展到其他领域，例如在食品、环境等方面的检测中也可以发挥重要作用。4.3实验结果的不足和改进方向4.3.1样品来源的限制本实验中仅采用了水基质和乳液基质的样品，未来可以进一步扩大样品来源范围，以更加全面地评估该方法的适用性和准确性。4.3.2方法的优化和改进未来可以通过优化和改进该方法的条件，进一步提高其检测灵敏度和准确性。例如，可以考虑改变柱温、流速、柱型等参数，优化分离条件和检测参数，从而提高方法的分离效果和检测灵敏度。此外，本实验中使用的是负模式，在图3-2中不难发现，质谱中定性离子的响应值较低，可以考虑使用正模式，以提高定性离子的响应效果。4.3.3结果的验证和确认本实验中仅通过样品平均回收率等指标评估了方法的准确性和可靠性，未来还可以通过其他手段进行验证和确认，例如参考物质的纯度、结构鉴定等，从而更加全面地评估该方法的优缺点和适用性。4.4总结本实验使用液相色谱质谱联用法成功地检测了化妆品中16α-羟基泼尼松龙的含量。结果表明，该方法具有良好的灵敏度、准确性和重复性，能够为相关领域的研究提供有力支持。这是一个具有很高应用价值的研究，因为16α-羟基泼尼松龙是一种常用的皮肤炎症治疗药物，因此，对其在化妆品中的检测具有重要的现实意义。然而，这个方法仍然需要进一步优化和改进，以提高其检测灵敏度和准确性。例如，可以尝试使用其他检测方法和技术来验证和确认结果，并进一步评估其适用性和可靠性。此外，需要加强对样品的前处理步骤，以避免潜在的样品污染或样品破坏。同时，需要进行更广泛的样品测试，以确保该方法的普适性和稳定性。总之，本实验为16α-羟基泼尼松龙的检测提供了一个可靠的方法，并为相关领域的研究提供了有力支持。通过进一步优化和改进，这个方法有望在未来成为一个更加全面、准确、灵敏和可靠的检测手段，从而更好地服务于化妆品行业和公众健康。参考文献[1]张文权，崔励，郑桂兰，等.生物转化法合成16α-羟基泼尼松龙的发酵工艺研究[J].生物技术，2012,22(3):81-86.[2]吴倩，刘亚洲，曾志刚.玫瑰产色链霉菌P450酶体外催化合成16α-羟基泼尼松龙[J].精细化工，2019,36(12):2418-2424.[3]杨坤,何辉贤,蒋华容,等.一种16α-羟基泼尼松龙的制备方法:CN,104262440A[P].2015-1-7.[4]马强，王超，王星，等.超高效液相色谱法同时测定化妆品中的15种激素[J].色谱，2007,25(4):541-545.[5]国家食品药品监督管理总局化妆品标准专家委员会.化妆品安全技术规范[M].北京：人民卫生出版社，2015:5-71.[6]OdileFrancescaRestaino,SimonaBarbutoFerraiuolo,AddolorataPerna,MarcellaCammarota,MariaGiovannaBorzacchiello,AntonioFiorentino,ChiaraSchiraldi.BiotechnologicalTransformationofHydrocortisoneinto16α-HydroxyprednisolonebyCouplingArthrobactersimplexandStreptomycesroseochromogenes[J].Molecules2020,25(21).[7]中华人民共和国国家质量监督检验检疫局中国国家标准化管理委员会.GB/T24800.2-2009化妆品中四十一种糖皮质激素的测定液相色谱/串联质谱法和薄层层析法[S].北京：中国标准出版社，2009.[8]吴大南，郑和辉，王萍，等.超高效液相色谱法检测化妆品中8种糖皮质激素[J].中国卫生检验杂志，2008,8(2):197.[9]刘军.分光光度法测定化妆品中甾体激素含量[J].中国卫生检验杂志，2000,10(5):571.[10]吴维群，沈朝烨，杨玉林，等.GC-MS联用技术检测水性化妆品中性激素成分的方法研究[J].环境与职业医学，2004,21(4):307.[11]李强，张晓光，马俊美，等.超高效液相色谱-高分辨率质谱法筛查化妆品中12种糖皮质激素[J