二棕榈酰羟基脯氨酸纳米晶凝胶处方工艺的探索+最终稿

二棕榈酰羟基脯氨酸纳米晶凝胶处方工艺的探索【摘要】目的：制备二棕榈酰羟基脯氨酸纳米晶凝胶并对其进行质量评价。方法：采用高压均质法制备二棕榈酰羟基脯氨酸纳米晶，以其纳米晶粒径为评价指标，通过单因素筛选和正交实验法优选二棕榈酰羟基脯氨酸纳米晶最优处方，再将最优处方制得的纳米晶制备成凝胶剂，最后对其凝胶进行质量评价。结果：正交实验法优选出的最优处方为：均质压力1800bar、均质次数26次、HPMC使用量0.1%、泊洛沙姆188使用量0.3%。通过正交实验法优选后二棕榈酰羟基脯氨酸的平均粒径为270.8nm。DPHP纳米晶凝胶为乳白色、质地均匀细腻的半固体制剂，稠度适宜，涂展性好。结论：二棕榈酰羟基脯氨酸纳米晶凝胶的外观形状、pH值、稳定性、粘度、刺激性等质量指标均符合要求。【关键词】二棕榈酰羟基脯氨酸；高压均质法；纳米晶；凝胶。

Explorationofdipalmitoylhydroxyprolinenanocrystallinegelprescriptionprocess[Abstract]Objective:Toprepareandevaluatethequalityofdipalmitoylhydroxyprolinenanocrystallinegels.Methods:Dipalmitoylhydroxyprolinenanocrystalswerepreparedbyhigh-pressurehomogenizationmethod,andtheoptimalprescriptionofdipalmitoylhydroxyprolinenanocrystalswasselectedbysingle-factorscreeningandorthogonalexperimentalmethod,andthenthenanocrystalspreparedbytheoptimalprescriptionwerepreparedintogellingagent,andfinallythequalityofthegelwasevaluated.Results:Theoptimalprescriptionsselectedbyorthogonalexperimentalmethodwere:homogenizationpressureof1800bar,homogenizationtimesof26times,HPMCusageof0.1%,andpoloxamer188dosageof0.3%.Theaverageparticlesizeofdipalmitoylhydroxyprolineafteroptimizationbyorthogonalexperimentalmethodwas270.8nm.DPHPnanocrystallinegelisamilkywhitesemi-solidpreparationwithuniformandfinetexture,suitableconsistencyandgoodspreadability.Conclusion:Theappearanceshape,pHvalue,stability,viscosity,irritationandotherqualityindicatorsofdipalmitoylhydroxyprolinenanocrystallinegelmeettherequirements.[Keywords]DipalmitoylhydroxyprolineHighpressurehomogenizationmethodnanocrystalsGel.

目录1前言 前言1.1研究背景衰老是人类始终关心的一个热点问题，机体衰老是所有生物体均不可逆的一种自然生命现象，它是指在生物发育成熟之后，随着机体年龄的增长，机体的各种组织器官以及器官结构会发生长期退行性结构变化，而逐步形成的一种不可逆的过程。皮肤衰老是身体衰老一种最直观的反映，它的特点是皮肤的弹性下降、水分的不断流失以及各类皱纹和斑点的不断生成[1-3]。目前的医学理论研究表明，如果人体皮肤中的自由基遭到了严重的破坏，那么皮肤深层细胞的自体免疫能力也会随之急剧下降，因此会对皮肤的机体功能造成严重的损害，导致皮肤老化[4]。皱纹、老年斑等皮肤衰老现象的出现，不但会给人们带来生理上的影响，还会引发焦虑、自卑和抑郁等一系列复杂的心理问题，抗衰老药因此受到了人们的广泛关注，抗衰老产品的开发以及抗衰老机制的研究也因此具有重要意义和广阔的发展前景。1.2二棕榈酰羟基脯氨酸的研究概述二棕榈酰羟基脯氨酸(Dipalmitoylhydroxyproline，DPHP)，分子式为C37H69NO5，分子量为607.95，结构式如图1-1所示，室温下其为白色粉末，溶于乙醇和甲醇等有机溶剂，难溶于水。图1-1二棕榈酰羟脯氨酸的结构式Figure1-1StructuralformulaofDipalmitoylhydroxyprolineDPHP是天然产物棕榈酰与天然氨基酸羟基脯氨酸合成的一种能够有效抗皱和抗衰老的添加剂，它可以与其他具有抗皱、抗衰老功效的成分结合在一起发挥更好的抗衰老作用，从而在化妆品中得到了广泛的应用。DPHP中的羟基脯氨酸可经生物化学转化生成脂溶性氨基酸，对皮肤有良好的亲和性，并能发挥良好的介体传递作用[5-6]。据研究，与维生素C相比，DPHP在促进胶原纤维收缩和抑制弹力蛋白酶活性方面更有优势，因此可以更好地保持皮肤弹性[7]。此外，已有研究发现，DPHP对皮肤有三重抗衰老功效，它可以改善胶原蛋白纤维的收缩、抑制弹性蛋白酶活性和阻止弹性纤维的分裂，它还能降低自由基的含量，从而改善皮肤的水合度[8]。徐果等人[9]对含DPHP的抗皱紧肤霜的效用进行了评估，结果表明，DPHP的抗皱紧肤霜有很好的保湿作用，能延缓肌肤老化，并能加速肌肤的修复，修复率在48%以上。汤文静等人[10]采用高压均质法制备DPHP-NLC，利用单因素试验及Box-Behnken设计响应面方法对处方进行了优化，获得了最优的处方，并对处方进行了表征。1.3纳米晶的研究概述纳米晶(Nanocrystals，NCs)是指药物以晶态或无定型态分散于含有稳定剂介质溶液中而获得的一种纳米或亚微米级胶体分散体系[11]，根据Noyes-Whitney方程，粒径在纳米级的药物颗粒，其比表面积会大幅度提高，因此其饱和溶解度和溶解速率也会相应提高。所以，相对于传统剂型，纳米晶在增加药物的溶解速度、改善药物的生物利用度与减少药物的毒性和副作用等方面有着明显的优势[12]。目前，国内外主要有三种合成纳米晶体的方法，分别是“Top-down”（自上而下）技术、“Bottom-up”（自下而上）技术以及组合技术。这三种方法分别利用了不同的方法来控制纳米晶体的大小和形状，使其在不同的应用中表现出最佳效果。此外，这三种方法还可以有效地控制纳米晶体的质量和形状，以满足不同的应用需求。“Top-down”使用了一定的机械过程，将大粒径的药物粉末粉碎成粒径在纳米范围内的药物晶体，从而达到控制颗粒尺寸的目的。这种技术不仅能够有效地减少药物颗粒尺寸，还能提高其生物利用度和稳定性，使其在更多的疾病治疗中发挥作用。在配制时，通常要加入某些稳定剂，以维持药物的稳定。例如：羟丙甲纤维素、泊洛沙姆、十二烷基硫酸钠和卵磷脂等[13]，常用方法有介质研磨法和高压均质法，目前大部分已上市的纳米晶体药物均是采用这两种方法制备。“Bottom-up”技术是通过控制药物的结晶和成核过程，即药物在一种溶液中被析出，从而形成均匀细小的沉淀或结晶，常用方法包括乳化法和沉淀法等。组合技术通过将预处理步骤和粒径减小步骤相结合来制备药物晶体，多个技术的协同应用，在一定程度上可以提高药物的粒径减小效果，并降低能耗[14]。1.4凝胶剂的研究概述凝胶剂是指药物与适宜的辅料制成的均一、透明或半透明的半固体或粘稠液体制剂，是一种常用的外用制剂，质地均匀细腻，具有透皮吸收快、易于涂布、无油腻感等特点[15]。凝胶剂根据凝胶基质可分为水性凝胶剂和油性凝胶剂，其中水性凝胶剂具有优良的理化性质和生物学特性。相比于传统的软膏剂、贴剂等外用制剂，水性凝胶剂易于清洗且不易污染衣物。除此之外，水溶性凝胶还可以对药物进行缓控释放，同时它还具备了良好的生物相容性、生物粘附性以及可降解性等特点[16]。水性凝胶剂目前常用的凝胶基质有卡波姆、羧甲基纤维素钠(CMC-Na)、聚乙烯吡咯烷酮(PVP)、聚乙烯醇(PVA)等。陈乃炳等人[17]以CMC-Na为基质，研制了诺氟沙星凝胶，该凝胶对绿脓杆菌所致的皮肤创伤和其他皮肤感染均有效，且无刺激性，克服了其他油性膏剂的不足。。谷杰等人[18]将盐酸洛美沙星用卡波姆940和PVP为基质制备成凝胶，用于治疗皮肤科感染，取得了良好的效果，并能使药物在皮肤中停留的时间更长。陈腾等人[19]以水溶胀性卡波姆940为基质制备出了司氟沙星凝胶，其不仅具有粘稠度适中、不含油脂、使用方便、适用于皮肤粘膜、起效快、作用时间长等优点，还可以降低口服药物引起的胃肠道反应，提高局部用药的药物浓度，在临床上应用于妇科感染，取得了较好的疗效。卡波姆为一类丙烯酸与丙烯基蔗糖交联的高分子聚合物，在国际上被广泛应用于医药、化妆品等领域，卡波姆除有很好的粘合性外，还具有良好的乳化性、助悬性和成膜性，被认为是一种极具发展潜力的多功能高分子材料。故本课题选用卡波姆为凝胶基质。1.5研究目的与意义DPHP由于分子量大、难以穿透表皮、水溶性和成药性差等缺点，其在皮肤外用制剂上的应用受到限制。纳米晶技术可以有效地改善难溶性药物的生物利用度[20]，通过将药物的颗粒尺寸缩小至纳米尺度，使其透皮给药的生物利用度得到明显的提高。纳米晶体技术可增大难溶性药物的比表面积，改变其药动学性质，改善其生物利用度[21]。凝胶剂是一种含有溶解状态药物的澄明的半固体制剂，它具有溶胀性、脱水收缩性、透过性和粘合性的特征[22]。此外，凝胶剂不仅具有交联结构，还具有部分的固体特性，其能够在较长的一段时间内与用药部位紧密地粘合在一起，且可以使半固体制剂在静止时保持一定的形状，而在外力的作用下又可以流动变形[23]。将DPHP纳米粒制成凝胶剂，可增加其在体表的滞留时间，增加其在体表的稳定性，从而达到延缓衰老的效果。

2仪器和试剂2.1仪器 实验所用仪器见表2-1。表2-1实验仪器Table2-1Experimentalinstruments仪器厂家WTC10002电子天平杭州万特衡器有限公司BSA224S-CW万分之一电子天平BSA423S-CW千分之一电子天平赛多利斯科学仪器(上海)有限公司赛多利斯科学仪器(上海)有限公司CP225D十万分之一电子天平赛多利斯科学仪器(上海)有限公司FE-28pH计梅特勒-托利多仪器(上海)有限公司L0701151超高压连续流微量均质机广州聚能纳米生物科技股份有限公司CX41RF偏光显微镜奥林巴斯(北京)科技有限公司纳米粒度ZETA点位分析仪贝克曼库尔特商贸(中国)有限公司TGL-20B高速离心机上海安亭科学仪器厂DV2TLV粘度仪美国博勒飞公司DJJ-50豆浆机中山市海马电器有限公司2.2试剂 实验所用试剂见表2-2。表2-2实验试剂Table2-2Experimentalreagents试剂厂家DPHP广州朋远化工有限公司HPMC泊洛沙姆188陶氏化学中国有限公司北京凤礼精求医药股份有限公司卡波姆940上海麦克林生化科技有限公司甘油广州辰星生物科技发展有限公司舒美PE9010浙江联硕生物科技有限公司EDTA-2Na天津市大茂化学试剂厂三乙醇胺天津市致远化学试剂有限公司蒸馏水屈臣氏集团(香港)有限公司

3实验方法与结果3.1DPHP纳米晶的制备 3.1.1DPHP纳米晶处方组成：DPHP纳米晶的处方组成为：DPHP、HPMC、泊洛沙姆188、蒸馏水。3.1.2DPHP纳米晶的制备工艺 将HPMC加入到80℃的热水中分散均匀，不断搅拌至室温，加入泊洛沙姆188，混匀后加入DPHP原料药，混匀后研细，过100目筛，在一定压力下均质，制得DPHP纳米晶。3.2DPHP纳米晶单因素的考察3.2.1均质压力的考察 按DPHP纳米晶的处方和制备工艺，考察不同的均质压力(1200，1600，2000bar)对DPHP纳米晶粒径的影响。结果如表3-1所示，均质压力在1600bar时DPHP纳米晶的粒径最小。（n为测量次数）表3-1不同均质压力对DPHP纳米晶粒径的影响（n=3）Table3-1EffectofdifferenthomogenizationpressuresonDPHPnanograinsize（n=3）粒径(nm)PDI1200bar500.30.2171600bar352.70.1662000bar381.20.1733.2.2均质次数的考察 按DPHP纳米晶的处方和制备工艺，均质压力保持不变（1600bar），考察不同的均质次数(25，30，35次)对DPHP纳米晶粒径的影响，结果如表3-2所示，均质次数在35次时DPHP纳米晶的粒径最小，结合预实验的结果，最终确定均值次数为30次。表3-2不同均质次数对DPHP纳米晶粒径的影响（n=3）Table3-2EffectofdifferenthomogenizationtimesonDPHPnanocrystallinesize（n=3）粒径(nm)PDI25次309.80.25230次352.70.16635次287.10.2323.2.3HPMC使用量的考察 按DPHP纳米晶的制备工艺，均质压力（1600bar）和均质次数（30次）保持不变，考察不同使用量HPMC(0.2%、0.4%和0.6%)对DPHP纳米晶粒径的影响，结果如表3-3所示，HPMC使用量在0.2%时DPHP纳米晶的粒径最小。表3-3不同HPMC使用量对DPHP纳米晶粒径的影响（n=3）Table3-3EffectofdifferentHPMCusageonDPHPnanograinsize（n=3）粒径(nm)PDI0.6%329.60.2180.4%498.10.2200.2%320.30.2483.2.4泊洛沙姆188使用量的考察 按DPHP纳米晶的制备工艺，均质压力（1600bar）、均质次数（30次）和HPMC使用量（0.2%）保持不变，考察不同使用量泊洛沙姆188(0.1%、0.3%和0.5%)对DPHP纳米晶粒径的影响，结果如表3-4所示，泊洛沙姆188使用量分别0.1%，0.3%和0.5%时DPHP纳米晶的粒径差异不明显，结合预实验的结果，最终确定泊洛沙姆188的使用量为0.3%。表3-4不同泊洛沙姆188使用量对DPHP纳米晶粒径的影响（n=3）Table3-4Effectofdifferentamountsofpoloxamer188onDPHPnanocrystalsize（n=3）粒径(nm)PDI0.1%284.40.2470.3%287.50.2760.5%290.60.2283.3正交实验优选DPHP纳米晶3.3.1考察因素和水平 选择影响工艺条件的高压均质压力(A)、高压均质次数(B)、HPMC使用量(C)为三个因素，每个因素选取三个水平，以粒径为主要评价指标，按L9(33)正交试验设计表进行工艺筛选实验。正交设计因素水平表见表3-5。表3-5L9(33)正交试验因素水平表Table3-5L9(33)Orthogonaltestfactorleveltable水平因素高压均质压力(bar)A高压均质次数(次)BHPMC使用量(%)C11400260.321600300.231800340.13.3.2正交实验结果及优化方案将“3.3.1”项下中9组材料按“3.1.2”项下方法制得DPHP混悬液后，各取适量DPHP混悬液，用蒸馏水稀释到10mL后，用粒径分析仪测定DPHP纳米晶的粒径，正交实验结果如表3-6所示，极差反映各因素对指标的影响程度，其值越大，表明因素对指标的影响越大。K1、K2、K3表示各因素水平对应的均数。对实验结果进行直观分析可知，三个因素的影响水平为:C>A>B，以粒径为衡量指标得出的最佳处方为A3B1C3，即高压均质的压力为1800bar，高压均质的次数为26次，HPMC的使用量为0.1%。对上述结果进行方差分析和F检验，结果如表3-7所示，因素A和因素C的P<0.01，有显著性差异；因素B的P>0.05，没有统计学差异，综合各因素，处方的组成为A3B1表3-6L9(33)正交试验及结果（n=9）Table3-6L9(33)Orthogonaltestandresults（n=9）序号ABC粒径(nm)1111300.42122321.33133280.44212271.95223269.76231320.37313271.88321282.59332268.8K1902.1844.1903.2K2861.9873.5862.0K3823.1869.5821.9K300.7281.4301.1K287.3291.2287.3K274.4289.8274.0极差26.39.827.1表3-7方差分析和F检验的结果Table3-7ANOVAandF-testresults因素偏差平方和自由度F值PA3312.80227.3430.004B552.37621.2240.315C3117.39626.9100.005误差4511.273203.3.3验证性试验 选用正交试验设计中筛选出的最优处方制备3批样品，考查其粒径大小。结果如表3-8所示，三批DPHP纳米晶的粒径均在260nm至290nm之间，三批样品粒径的平均值为270.8nm，处于正常范围。表3-8最优处方下制备的DPHP纳米晶粒径大小（n=3）Table3-8SizeofDPHPnanocrystalspreparedunderoptimalprescription（n=3）粒径(nm)PDI第一批284.10.293第二批267.90.263第三批260.40.231平均值270.80.2623.4DPHP纳米晶凝胶的制备3.4.1DPHP纳米晶凝胶处方组成DPHP纳米晶凝胶的处方组成为：DPHP纳米晶混悬液、卡波姆940、甘油、舒美PE9010、EDTA-2Na、三乙醇胺和蒸馏水。3.4.2DPHP纳米晶凝胶处方组成工艺 提前一晚将处方量的卡波姆940加入到蒸馏水中并不断搅拌，待其充分分散后停止搅拌，放置过夜使其充分溶胀，配置成浓度为1.2%的卡波姆水凝胶液。取处方量的DPHP纳米晶混悬液，常温搅拌下缓慢加入处方量甘油，搅拌均匀后加入处方量的舒美PE9010，搅拌均匀，后加入处方量的EDTA-2Na，不断搅拌使其充分溶解，最后加入处方量的卡波姆940，搅拌均匀后滴加适量的三乙醇胺调节pH至6~7使其形成凝胶状，即得DPHP纳米晶凝胶。3.5DPHP纳米晶凝胶的质量评价3.5.1外观性状取DPHP纳米晶凝胶，在黑色背景下观察，结果如图3-1和3-2所示，DPHP纳米晶凝胶为乳白色、质地均匀细腻的半固体制剂，稠度适宜，涂展性好。图3-1DPHP纳米晶凝胶俯视图Figure3-1TopviewofDPHPnanocrystallinegel图3-2DPHP纳米晶凝胶正视图Figure3-2FrontviewofDPHPnanocrystallinegel3.5.2pH值取DPHP纳米晶凝胶1.0g于10mL烧杯中，加入蒸馏水至10.0g，用玻璃棒充分搅拌至完全溶解后用pH计测定其pH值，测得DPHP纳米晶凝胶的pH值为6.600.02，pH适中，在皮肤适宜的pH范围内。3.5.3稳定性考察分别取适量相等的DPHP纳米晶凝胶于2支10mL离心管中，在3000rpm下离心30min后，2批样品均无分层现象，表明DPHP纳米晶凝胶稳定性良好。3.5.4粘度取适量DPHP纳米晶凝胶，用粘度仪在64转子、10rpm下测定其粘度，结果见表9。表9DPHP纳米晶凝胶的粘度测定结果Table9ViscositydeterminationresultsofDPHPnanocrystallinegels粘度(mPa·s)扭矩(%)第一次4944082.4第二次4854080.9第三次4890081.53.5.5刺激性实验取适量DPHP纳米晶凝胶涂于4只大白鼠的皮肤表面一侧，分别在给药1，12，24，36和72h后观察大白鼠皮肤，与不涂抹该药处的皮肤另一侧比较，涂抹药处1，12，24，36和72h后均无红斑等异常现象，结果表明该凝胶涂于大鼠皮肤表面时不会产生刺激性。取少量DPHP纳米晶凝胶涂于4个人的皮肤表面，在给药1，12，24，36和72h后观察人体皮肤，与不涂抹该药处的皮肤比较，涂抹药处1，12，24，36和72h后无红斑等异常现象。且人体皮肤涂抹DPHP纳米晶凝胶处1小时内会产生冰凉的感觉，结果表明该凝胶涂于人体皮肤表面时不会产生刺激性。3.5.6耐热实验取本品适量，装于密闭小瓶中，放于40℃恒温箱中恒温24h后，观察凝胶，凝胶由原先的乳白色变成灰白色，如图3-3和3-4所示，表明DPHP纳米晶凝胶不适宜放置在较高的温度。图3-340℃放置前的DPHP纳米晶凝胶Figure3-3DPHPnanocrystallinegelbeforeplacementat40°C图3-440℃下放置24h后的DPHP纳米晶凝胶Figure3-4DPHPnanocrystallinegelafter24hplacementat40°C3.5.7耐寒实验取本品适量，装于密闭小瓶中，如图3-5所示，于-10℃冰箱中放置24h后，观察凝胶，凝胶处于结冰状态，如图3-6所示，放置室温后恢复凝胶状，颜色为乳白色，如图3-7所示，无异常现象。图3-5-10℃放置前的DPHP纳米晶凝胶Figure3-5-10°CDPHPnanocrystallinegelbeforeplacement图3-6-10℃放置24h后的DPHP纳米晶凝胶Figure3-6-10°CafterplacingtheDPHPnanocrystallinegelfor24h图3-7-10℃放置24h后恢复至室温的DPHP纳米晶凝胶Figure3-7-10°Cfor24hafterreturningtoroomtemperatureDPHPnanocrystallinegel

4讨论本实验选用HPMC和泊洛沙姆188作为稳定剂，HPMC作为稳定剂具有如下特点:(1)可在不溶于水的颗粒周围形成一层保护膜，防止颗粒凝结成块，并可减缓颗粒沉淀，沉淀后的颗粒可通过振动快速重新均匀地分散开来。(2)可以提高液相分散剂的粘度，减小固-液界面的张力，减小颗粒的表面自由能，从而使混悬液趋于稳态。(3)可使该外用混悬液容易涂抹于受感染的肌肤上，而且不容易擦洗或损失，以确保该药剂的效果。(4)能够有效地将疏水性药物完全浸润在水中，以克服因吸收空气而引起的微粒浮起的问题。(5)可将固体颗粒均匀地分散，便于倾倒出，并可精确地进行剂量分配[24]。选择泊洛沙姆188为稳定剂，是由于泊洛沙姆188可以吸附于纳米颗粒的表面，使其分子链具有舒展性，能阻止纳米粒子在空间上彼此靠近。不同配比的稳定剂对增溶效果有不同的影响，配比过小，颗粒容易团聚。但在达到临界胶束浓度后，再提高其用量，其对润湿性的影响不明显，说明了过量添加对其润湿性的影响不大[25]。本课题进行预实验时，先将DPHP混悬液在1800bar下分别均质5，10，15，20，25，30，35次，初步判定高压均质次数对DPHP混悬液粒径的影响。正式实验进行单因素筛选时，保持预实验中粒径最小的均质次数和其它制备工艺不变，先探究均质压力对粒径的影响，接着再逐步探究均质次数、HPMC使用量和泊洛沙姆188使用量对粒径的影响，结果发现泊洛沙姆188的使用量为0.1%、0.3%和0.5%时DPHP纳米晶的粒径差异不明显，故选择均质压力、均质次数和HPMC使用量三个因素进行正交实验。

5结论本课题利用高压均质法制备了DPHP纳米晶，并且基于单因素法和正交实验法优选出的最优处方为：均质压力1800bar、均质次数26次、HPMC使用量0.1%、泊洛沙姆188使用量0.3%。本实验制备DPHP纳米晶凝胶的工艺简便、可行，其质量评价符合要求，可为其它药物纳米晶体制备和优化提供借鉴和技术参考。

参考文献刘嘉玮,张馨芸,林慧娇,等.安五脂素对衰老小鼠抗疲劳作用研究[J].食品工业科技,2020,41(18):319-323.陈祥宁,刘洋,纪俊峰.清除衰老细胞在衰老与老龄化相关疾病中的研究进展[J].生物化学与生物物理进展,2019,46(12):1150-1161.马凤君,颜晓,潘亚辉,等.近十年中医药抗衰老疗法研究概况[J].山东中医杂志,2020,39(04):407-412.谢璟.杨梅黄酮对紫外线诱导的皮肤光老化保护作用及潜在机制研究[D].山东大学,2019.林单,金振涛,宋国勇,等.胶原蛋白肽产品中羟脯氨酸检测方法研究[J].食品科技,2019,44(11):334-338.徐晓珍.海带多糖对自然衰老小鼠皮肤胶原蛋白影响的实验研究[D].广西医科大学,2016