含有天然多酚修饰的多肽自组装分子合成与制备分析研究 功能材料学专业

目录摘要 1Abstract 2内容提要 3第一章设计选题及构思 4第二章背景资料 52.1多肽分子自组装 62.3多肽水凝胶 102.2没食子酸和咖啡酸 13第三章设计目标及可行性分析 14第四章多肽的合成及修饰 154.1实验材料 154.1.1实验试剂： 154.1.2实验仪器 164.2实验步骤 174.2.1NapFFKYp的合成和纯化 174.2.3NapFFK(GA)Yp的合成 184.2.4NapFFK(CA)Yp的合成 194.3产物分子的化学分析与测试 204.3.1质谱 204.3.2核磁共振氢谱（1HNMR）表征 214.3.3核磁共振磷谱（31PNMR）表征 23第五章多肽分子自组装形成的水凝胶的性能研究 255.1实验材料 255.1.1实验试剂 255.1.2实验仪器 255.2实验步骤 255.2.1水凝胶的制备 255.2.2TEM制样 265.2.3SEM制样 265.2.4流变测试 275.3物理表征结果及分析 275.3.1TEM表征多肽自组装的微观形貌 275.3.2SEM表征水凝胶的多孔性形貌 275.3.3流变仪表征水凝胶的力学性能 28结论 30参考文献 31致谢 33摘要近几年来多肽成为制备超分子水凝胶的一种高效凝胶因子。多肽具有良好的生物相容性和可控的生物降解性能,除此之外，多肽侧链可能还含有氨基、羧基和羟基等官能团，易被其它生物功能分子修饰。本论文主要研究了含天然多酚没食子酸和咖啡酸修饰的多肽自组装分子NapFFK(GA)Yp和NapFFK(CA)Yp的制备和表征。我们研究发现，在pH=7.4时，NapFFK(GA)Yp和NapFFK(CA)Yp两种分子都可以在碱性磷酸酶（ALP）的作用下自组装形成具有纳米纤维结构的超分子水凝胶。关键词：超分子水凝胶，多肽自组装，咖啡酸，没食子酸

AbstractPeptidescanworkaseffectivehydrogelatorstopreparesupramolecularhydrogelsinrecentyears,becauseoftheirgoodbiocompatibilityandcontrollablebiodegradability.Inaddition,theirsidechainsmaycontainmanyfunctionalgroupssuchas,carboxylicacid,aminoandhydroxylgroups,sotheyareeasytobemodifiedwithotherbiofunctionalmoieties.ThisdissertationmainlystudiesthepreparationandcharacterizationofNapFFK(GA)YpandNapFFK(CA)Yp,whichcontaindifferentnaturalpolyphenolmoieties(e.g.,gallicacidandcaffeicacid).Wefoundthatthesetwomolecules(e.g.,NapFFK(GA)YpandNapFFK(CA)Yp)canself-assembletoformnanofiberstructuresandsupramolecularhydrogelstriggeredbyalkalinephosphatase(ALP)atpH7.4.Keywords:supramolecularhydrogel,peptideself-assembly,caffeicacid,gallicacid.

内容提要本文拟在多肽分子NapFFKYp上修饰没食子酸（GA）和咖啡酸（CA）合成两种新型的多肽自组装分子NapFFK(GA)Yp和NapFFK(CA)Yp。本文第一章介绍了本设计的选题及构思；第二章介绍了多肽自组装、多肽水凝胶、没食子酸和咖啡酸的研究现状；第三章分析了本课题实施的可行性；第四章通过固相合成法合成多肽分子NapFFKYp，然后在NapFFKYp上修饰GA和CA进一步合成NapFF(GA)Yp和NapFF(CA)Yp，最后对产物分子进行化学测试（质谱、核磁氢谱、核磁磷谱），确定产物的化学结构；第五章通过扫描电子显微镜（SEM）、透射电子显微镜（TEM）和流变仪探究NapFF(GA)Yp和NapFF(CA)Yp分子的自组装性能。

第一章设计选题及构思多肽分子NapFFKYp（结构式见1-1）是已经被证实的一种良好的酶响应型凝胶因子。Xu等人[[]ZhangY,KuangY,GaoY,etal.Versatilesmall-moleculemotifsforself-assemblyinwaterandtheformationofbiofunctionalsupramolecularhydrogels.[J].LangmuirtheAcsJournalofSurfaces&Colloids,2011,27(2):529.,[]YangZ,XuB.Asimplevisualassaybasedonsmallmoleculehydrogelsfordetectinginhibitorsofenzymes[J].ChemicalCommunications,2004,10(21):2424-2425.]发现NapFF可以作为凝胶因子的骨架，其含有萘基和两个苯丙氨酸残基，可以在低浓度下可以通过萘环和苯环的π-π堆积作用以及酰胺键上的氢键作用实现自组装。而Yp使NapFFKYp具有自组装可控的特点，可以用碱性磷酸酶(ALP)[]ZhangY,KuangY,GaoY,etal.Versatilesmall-moleculemotifsforself-assemblyinwaterandtheformationofbiofunctionalsupramolecularhydrogels.[J].LangmuirtheAcsJournalofSurfaces&Colloids,2011,27(2):529.[]YangZ,XuB.Asimplevisualassaybasedonsmallmoleculehydrogelsfordetectinginhibitorsofenzymes[J].ChemicalCommunications,2004,10(21):2424-2425.图1-1NapFFKYp的结构式NapFFKYp上的赖氨酸侧链上存在一个氨基残基，故此多肽分子可被其它生物功能分子修饰。而没食子酸（GA）和咖啡酸（CA）（结构式见第二章）具有良好的抗肿瘤和抗氧化性能，并且二者都含有羧基，可以与NapFFKYp侧链上的氨基反应，形成酰胺键。综上，本课题拟在多肽分子NapFFKYp上修饰GA和CA，设计合成两种新型凝胶因子NapFFK(GA)Yp（结构式见图1-2）和NapFFK(CA)Yp（结构式见图1-3）。并探究这两种分子的自组装性能。图1-2：NapFFK(GA)Yp结构式图1-3：NapFFK(CA)Yp结构式

第二章背景资料2.1多肽分子自组装多肽是氨基酸的衍生物。多肽分子可以通过肽键间的氢键作用以及氨基酸残基之间的疏水性作用、π-π堆积作用、静电作用等[[]EstroffLA,HamiltonAD.Watergelationbysmallorganicmolecules.ChemRev,2004,104:1201–1217][]EstroffLA,HamiltonAD.Watergelationbysmallorganicmolecules.ChemRev,2004,104:1201–1217如果多肽在不受外界条件影响下能够自发的形成超分子结构，我们称之为自发型自组装，如Karin等人[[]KornmuellerK,LehoferB,MeindlC,etal.PeptidesattheInterface:Self-AssemblyofAmphiphilicDesignerPeptidesandTheirMembraneInteractionPropensity[J].Biomacromolecules,2016,17(11):3591-3601.]设计合成了一种短阴离子肽A[]KornmuellerK,LehoferB,MeindlC,etal.PeptidesattheInterface:Self-AssemblyofAmphiphilicDesignerPeptidesandTheirMembraneInteractionPropensity[J].Biomacromolecules,2016,17(11):3591-3601.图2-1短阴离子肽A6YD的结构式和自组装体的TEM图但是如果多肽必须在外界因素（常见的因素有温度、pH、酶等）作用下，才能发生自组装，则我们称之为触发型自组装[[]许小丁,陈昌盛,陈荆晓,等.多肽分子自组装[J].中国科学:化学,2011,41(2):221-238.]。触发型自组装肽由于具有很好的环境响应性而可以在特定的位置和时间发生自组装，并且具有可逆性，可以在一定条件下破坏自组装体，因此更富有[]许小丁,陈昌盛,陈荆晓,等.多肽分子自组装[J].中国科学:化学,2011,41(2):221-238.pH通常是通过改变多肽所带的净电荷来调控多肽自组装行为的，净电荷越小，分子间的静电斥力也越小，越容易发生自组装。康艳晶等人[[]康艳晶,周希蕊,罗施中.pH响应性双亲性多肽水凝胶pal-RLRRLRARARA的合成及表征[J].中国科技论文,2012(6):437-441.]设计合成了pal-RLRRLRARARA，发现[]康艳晶,周希蕊,罗施中.pH响应性双亲性多肽水凝胶pal-RLRRLRARARA的合成及表征[J].中国科技论文,2012(6):437-441.图2-2不同的pH对p-RRL分子自组装的影响Rughani等人发现MLD多肽分子在不同的温度下，自组装行为不同。由图2-3可知，在较低的温度下MLD是未折叠的，当15℃时，才出现了β-折叠，证明这时MLD才发生自组装。

图2-3pH=7.4时，浓度为150mM的多肽溶液在波长为218nm时测定的CD光谱随温度的变化。Ulijn[[]ToledanoS,WilliamsRJ,JayawarnaV,etal.Enzyme-triggeredself-assemblyofpeptidehydrogelsviareversedhydrolysis[J].JournaloftheAmericanChemicalSociety,2006,128(4):1070-1071.]通过蛋白酶将Fmoc氨基酸与二肽偶联以形成三肽，其可以通过芴基之间的π-π堆积作用自组装成超分子结构，如图2-4所示。[]ToledanoS,WilliamsRJ,JayawarnaV,etal.Enzyme-triggeredself-assemblyofpeptidehydrogelsviareversedhydrolysis[J].JournaloftheAmericanChemicalSociety,2006,128(4):1070-1071.图2-4（A）实验反应机制图，（B）各种分子的结构式上述两种多肽都是基于多肽的二级结构或者多肽分子的两亲性。多肽的一级结构是由氨基酸通过肽键连接而成的链状平面结构。当多肽溶于溶剂中时，多肽可以通过这些作用力从一级结构向二级结构（α-螺旋，β-折叠，β-发夹）转变，这种构象的变化会导致多肽发生自组装。Lego肽是一种典型的例子。它由极性和非极性氨基酸交替排列而成，可以通过形成β-折叠发生自组装。RADA16-I肽[[]YokoiH,KinoshitaT,ZhangS.DynamicreassemblyofpeptideRADA16nanofiberscaffold.[J].ProceedingsoftheNationalAcademyofSciencesoftheUnitedStatesofAmerica,2005,102(24):8414-8419.[]YokoiH,KinoshitaT,ZhangS.DynamicreassemblyofpeptideRADA16nanofiberscaffold.[J].ProceedingsoftheNationalAcademyofSciencesoftheUnitedStatesofAmerica,2005,102(24):8414-8419.图2-5RADA16-I肽的结构以及自组装形成的纳米纤维基于分子的两亲性发生的自组装的例子很多，上述文中提到的Ulijn和徐兵等人合成的多肽都是两亲性多肽分子，这种分子一般较短，通常以烷基链或芳香族基团为端基，这类分子可以通过烷基的疏水性或芳香环的π-π堆积作用和多肽酰胺键之间的氢键共同作用发生自组装。现在很多人都选用Fmoc基团作为芳香族基团引入多肽序列实现自组装。但研究表明，很多其它芳香族基团也可以提供π-π堆积作用，如萘乙酸[[]YangZ,LiangG,MaM,etal.D-glucosamine-basedsupramolecularhydrogelstoimprovewoundhealing[J].ChemicalCommunications,2007,8(8):843-845.]、芘丁酸[[]ZhangY,YangZ,YuanF,etal.Molecularrecognitionremoldstheself-assemblyofhydrogelatorsandincreasestheelasticityofthehydrogelby10(6)-fold.[J].JournaloftheAmericanChemicalSociety,2004,126(46):15028-15029.]等相继被引入多肽序列中，实现了多肽的自组装。徐兵等人[[]YangZ,LiangG,MaM,etal.D-glucosamine-basedsupramolecularhydrogelstoimprovewoundhealing[J].ChemicalCommunications,2007,8(8):843-845.[]ZhangY,YangZ,YuanF,etal.Molecularrecognitionremoldstheself-assemblyofhydrogelatorsandincreasestheelasticityofthehydrogelby10(6)-fold.[J].JournaloftheAmericanChemicalSociety,2004,126(46):15028-15029.[]ZhangY,KuangY,GaoY,etal.Versatilesmall-moleculemotifsforself-assemblyinwaterandtheformationofbiofunctionalsupramolecularhydrogels.[J].LangmuirtheAcsJournalofSurfaces&Colloids,2011,27(2):529.图2-6基于NapFF的多肽自组装分子2.3多肽水凝胶当多肽分子发生自组装时，不仅在微观上能形成纳米纤维等聚集体，而且在宏观上可以观察到溶液到凝胶的状态转变。凝胶是由凝胶因子形成的具有弹性的交联网状结构和溶剂分子共同组成的粘弹性固体。水凝胶是以水作为溶剂的凝胶，制备水凝胶的原料主要是多糖、蛋白质等天然生物材料和合成高分子。虽然聚合物水凝胶现在应用广泛，但是作为组织工程支架材料，聚合物水凝胶的微观孔径尺寸无法满足细胞生长所需要的微观环境，而且聚合物水凝胶生物相容性差，难降解。小分子多肽水凝胶除了生物相容性好和易降解外，还具有良好的溶胀性、粘弹性和环境响应性，近几年来引起了许多研究人员的关注。多肽水凝胶可以分为化学交联的水凝胶和物理交联的水凝胶，化学交联的水凝和物理水凝胶的区别主要是形成水凝胶时分子间作用力的不同，前者是依靠的是化学键等化学作用力，凝胶过程不可逆。而后者是通过氢键、疏水作用和静电作用力等物理作用交联得到的，凝胶过程可逆；物理水凝胶形成的主要方式就是多肽分子的自组装。19世纪90年代，张曙光等人发现多肽EAK16[[]ZhangS,

HolmesT,

LockshinC,

RichA.

Spontaneous

assemblyofa

self-complementaryoligopeptidetoformastablemacroscopicmembrane.

ProcNatlAcadSciUSA

1993;90:3334–8.]能够形成β-折叠的二级结构，[]ZhangS,

HolmesT,

LockshinC,

RichA.

Spontaneous

assemblyofa

self-complementaryoligopeptidetoformastablemacroscopicmembrane.

ProcNatlAcadSciUSA

1993;90:3334–8.LuoY等人[[]LuoY,ShoichetMS.Aphotolabilehydrogelforguidedthree-dimensionalcellgrowthandmigration[J].NatureMaterials,2004,3(4):249.]旨在三维水凝胶基质中建立生物化学通道以引导轴突生长，并由此设计合成了多肽分子GRGDS。这种将生物分子固定在三维基质中的方法通常可以应用于所有光学透明的水凝胶，在组织工程[]LuoY,ShoichetMS.Aphotolabilehydrogelforguidedthree-dimensionalcellgrowthandmigration[J].NatureMaterials,2004,3(4):249.图2-7GRGDS的设计合成图抗氧化剂Mito-2,2,6,6-四甲基哌啶-N-氧自由基（TEMPO）（MT）已经被证实可以有效治疗急性肾损伤（AKI），但其效率受限于短暂的半衰期和副作用。MengZhao等人旨在开发一种基于自组装肽（SAP）的载体来减缓MT的释放，从而增强其对AKI的长期治疗效果。他们在KLD中插入天冬氨酸，设计合成了KLDD（图2-8）。结果表明，KLDD可以自组装成具有交联纳米纤维结构水凝胶，并且用KLDD作为载体，MT的释放速率较低，而且进行小鼠实验后发现，注射SAP-MT的小鼠线粒体活性较高，副作用较小[[]ZhaoM,ZhouY,LiuS,etal.Controlreleaseofmitochondria-targetedantioxidantbyinjectableself-assemblingpeptidehydrogelamelioratedpersistentmitochondrialdysfunctionandinflammationafteracutekidneyinjury[J].DrugDelivery,2018:546-554.][]ZhaoM,ZhouY,LiuS,etal.Controlreleaseofmitochondria-targetedantioxidantbyinjectableself-assemblingpeptidehydrogelamelioratedpersistentmitochondrialdysfunctionandinflammationafteracutekidneyinjury[J].DrugDelivery,2018:546-554.图2-8阳离子KLDD肽的设计和表征图除了设计不同的多肽序列外，很多研究人员还通过在已知的多肽序列上修饰其它小分子，以获得具有不同性能的多肽水凝胶。李新明等人[[]LiJ,LiX,YiK,etal.Self‐DeliveryMultifunctionalAnti‐HIVHydrogelsforSustainedRelease[J].AdvancedHealthcareMaterials,2013,2(12):1586-1590.]在分别在NapFFKYp和NxpFFKYp上修饰抗HIV药物拉米夫定（3TC）和齐多夫定（AZT）合成四种新型凝胶因子NapFFK(3TC)Yp、NapFFK(AZT)Yp、NxpFFK(3TC)Yp和NxpFFK(AZT)Yp（图2-9[]LiJ,LiX,YiK,etal.Self‐DeliveryMultifunctionalAnti‐HIVHydrogelsforSustainedRelease[J].AdvancedHealthcareMaterials,2013,2(12):1586-1590.图2-9含有抗HIV药物的凝胶因子的合成图本课题也同样是在NapFFKYp上修饰功能性分子，下节将简单介绍一下本课题用到的天然多酚没食子酸和咖啡酸。2.2没食子酸和咖啡酸没食子酸（3,4,5-三羟基苯甲酸，简称GA，如图2-9a所示）和咖啡酸（3-(3,4-二羟基苯基)-丙烯酸，简称CA，如图2-9b所示）同属天然多酚类物质，主要由植物中提取而来。没食子酸主要存在于五倍子植物中，咖啡酸则大量存在于麝香草等中草药植物中。二者都具有一定的抗肿瘤和抗氧化作用[[]张雅丽,李建科,刘柳,等.五倍子没食子酸研究进展[J].食品工业科技,2013,34(10):386-390.,[]孙皓熠,郝宝燕,张浩超,等.咖啡酸研究概况[J].食品与药品,2017,19(2):151-152.][]张雅丽,李建科,刘柳,等.五倍子没食子酸研究进展[J].食品工业科技,2013,34(10):386-390.[]孙皓熠,郝宝燕,张浩超,等.咖啡酸研究概况[J].食品与药品,2017,19(2):151-152.图2-9aGA的结构式图2-9bCA的结构式

第三章设计目标及可行性分析首先，本实验先利用固相合成法合成NapFFKYp，其主要流程如图1-1所示。实验中加入的活化剂（DIEA和HBTU来）吸引羰基C上的电荷，降低C上的电荷密度，便于氨基的亲核进攻，形成肽键。重复操作，直到得到目标多肽序列。以上述固相合成法合成NapFFKYp多肽分子后，利用缩合剂HOBT和DIC活化没食子酸或咖啡酸上的羧基，使其易与NapFFKYp上的侧链氨基发生反应。其中HOBt的作用是将DIC与羧基反应形成的活泼中间体转化为另一比较稳定的中间体，防止发生消旋化。用碱式磷酸酶（ALP）水解两种凝胶因子NapFFK(GA)Yp和NapFFK(CA)Yp上的磷酯键，两种分子的亲疏水平衡发生改变而自组装形成水凝胶。最后进一步探究NapFF(GA)Yp和NapFF(CA)Yp分子的自组装性能

第四章多肽的合成及修饰4.1实验材料4.1.1实验试剂：表4-1多肽合成及修饰所用试剂药品纯度/简称生产厂家2-氯三苯甲基氯树脂A.R.吉尔生化Fmoc氨基酸(F、K、Yp)A.R.1-羟基苯并三氮唑A.R./HOBT1，1，3，3-四甲基脲六氟磷酸盐A.R./HBTU2-萘乙酸A.R./Nap阿拉丁试剂（上海）有限公司没食子酸A.R./GA上海源叶咖啡酸A.R./CAN,N-二异丙基碳二亚胺98%/DIC上海竺钥化工有限公司二异丙基乙胺99%/DIEA上海泰坦科技股份有限公司二氯甲烷A.R./DCM江苏强盛甲醇A.R./MeOH乙腈A.R./CH3CN盐酸G.C./HClN，N-二甲基甲酰胺G.C./DMF上海麦克林生化科技有限公司正己烷A.R.国药集团哌啶A.R.碳酸钠A.R./Na2CO3西陇化工股份有限公司三氟乙酸C.P./TFA上海强顺化学试剂有限公司表4-2合成多肽用到的氨基酸及其简称名称英文缩写结构式苯丙氨酸phenylalaninePheF赖氨酸LysineLysK酪氨酸tyrosineTyrY4.1.2实验仪器表4-3：多肽合成及修饰所用仪器名称型号厂家冷冻干燥机SCIENTZ-10N宁波新芝生物科技股份有限责任公司数控高超声波清洗器KQ3200DE昆山市超声仪器有限公司旋转蒸发仪N-1100EYELA公司高效液相色谱仪Waters2487苏州科沃安生物科技有限公司MALDI-TOF质谱仪AgilentAgilent公司超导核磁共振波谱仪INOVA-400MHZ安捷伦（瓦里安）公司

4.2实验步骤4.2.1NapFFKYp的合成和纯化本章采用固相合成法合成NapFFKYp多肽分子。实验开始前，应保证所用溶剂无水。（i）将2-氯三苯甲基氯树脂（0.5g，0.7mmol活性位点）溶解在无水DMF中，通氮气鼓气震荡30min，活化树脂（调整氮气流速保证树脂不沉积在反应器底部），除去反应液，用无水DMF冲洗5次。（ii）将Fmoc-Tyr(PO3H2)-OH（845.44mg，1.75mmol）的DMF溶液加入反应器中，通氮气鼓气震荡1.5h，除去反应液，用无水DMF冲洗4次。（iii）将猝灭试剂（体积比DCM:MeOH:DIEA=16:3:1的混合液）加入反应器中，通氮气鼓气震荡15min，除去反应液，再将上述淬灭试剂加入反应器中，通氮气鼓气震荡15min，除去反应液，用无水DMF冲洗4次。（iv）将含20%哌啶的DMF溶液（脱保护剂）加入反应器中，通氮气鼓气震荡30min，除去反应液，用脱保护剂冲洗3次，用无水DMF冲洗4次。（v）将含Fmoc-Lys-OH（819.875mg，1.75mmol）、HBTU（657.14mg，1.73mmol）、DIEA（0.76mL）的DMF溶液加入反应器中，通氮气鼓气震荡1h，除去反应液，用无水DMF冲洗4次。（vi）重复（iv）、（v）步骤，将Fmoc-Phe-OH（678.04mg，1.75mmol）和Fmoc-Phe-OH（678.04mg，1.75mmol）和Nap（325.87mg，1.75mmol）接到多肽序列上。除去反应液，用DMF、DCM、MeOH、正己烷各冲洗5次，然后用泵吹干。（vii）将95%的三氟乙酸(TFA)加入反应器中，通氮气2~3h，切去树脂，然后用泵吹干得到粗产物。将粗产物用水溶解，调节pH到8左右，待粗产物完全溶解后再将pH调到6~7，低温下保存待纯化。（viii）取适量粗产物用水溶解，用Na2CO3调节pH到8~9，待粗产物完全溶解后再将pH调至7，高效液相色谱（HPLC）分离。图4-1NapFFKYp的固相合成路线图4.2.3NapFFK(GA)Yp的合成将GA（20mg，0.118mmol）溶于DMF和DCM的混合溶液（DMF:DCM=1:4）中，加入HOBT（31.76mg，0.235mmol）溶解，再滴加36.41μLDIC，搅拌12h，薄层色谱（TCL）检测活化效果（展开剂为CH3CN:H2O=10:1）。将NapFFKYp(83.4mg，0.095mmol)溶于水，加入Na2CO3调节至pH=8~9，再加入适量DMF。将活化好的GA溶液用旋蒸仪旋蒸，将旋蒸后的溶液缓慢滴加到NapFFKYp中，过夜反应，TCL检测反应程度。反应结束后，调节pH=7，用泵吹干，高效液相色谱分离。图4-2NapFFK(GA)Yp的合成路线图4.2.4NapFFK(CA)Yp的合成将CA（20mg，0.111mmol）溶于DMF和DCM的混合溶液（DMF:DCM=1:4）中，加入HOBT（30mg，0.222mmol）溶解，再滴加34.38μLDIC，搅拌12h，薄层色谱（TCL）检测活化效果（展开剂为CH3CN:H2O=10:1）。将NapFFKYp(83.4mg，0.090mmol)溶于水，加入Na2CO3调节至pH=8~9，再加入DMF。将活化好的CA溶液用旋蒸仪旋蒸，将旋蒸后的溶液缓慢滴加到NapFFKYp中，过夜反应，TCL检测反应程度。反应结束后，调节pH=7，用泵吹干，高效液相色谱分离。图4-3NapFFK(CA)Yp的合成路线图

4.3产物分子的化学分析与测试4.3.1质谱首先将样品溶解到CHCl3中，制成浓度为10mg/mL的溶液，采用常用的三明治点样法进行点样[[]向弘,朱斌,徐昕荣,等.基质辅助激光解析电离-飞行时间质谱在高分子聚合物研究应用中的样品制备方法[J].广东化工,2009,36(8):85-86.]，[]向弘,朱斌,徐昕荣,等.基质辅助激光解析电离-飞行时间质谱在高分子聚合物研究应用中的样品制备方法[J].广东化工,2009,36(8):85-86.图4-6NapFFKYp的质谱图图4-7NapFFK(GA)Yp的质谱图图4-8NapFFK(CA)Yp的质谱图表4-6所得产物的理论分子量与实测分子量(M+Na)+的比较分子理论分子量实测(M+Na)+NapFFKYp874.320874.568NapFFK(GA)Yp1026.3301026.329NapFFK(CA)Yp1036.3511036.307由表4-6可知，合成产物质谱的(M+Na)+特征峰明显且符合理论值，达到实验要求。4.3.2核磁共振氢谱（1HNMR）表征以氘代二甲基亚砜(DMSO-d6)作为溶剂，送样到苏州大学分析测试中心检测,测得的1HNMR谱图如下：

图4-9NapFFKYp的1HNMR谱图图4-10NapFFK(GA)Yp的1HNMR谱图图4-11NapFFK(CA)Yp的1HNMR谱图由1HNMR谱图知，产物中不同化学环境的氢的个数和化学位移与目标产物中的相似。4.3.3核磁共振磷谱（31PNMR）表征图4-12NapFFKYp的31PNMR谱图图4-13NapFFK(GA)Yp的31PNMR谱图图4-14NapFFK(CA)Yp的31PNMR谱图由31PNMR谱图知，产物中始终存在磷酯键，并且化学位移相似，符合目标产物结构要求，结合质谱和氢谱的测试结果可证实本实验成功合成了NapFFK(GA)Yp和NapFFK(CA)Yp第五章多肽分子自组装形成的水凝胶的性能研究5.1实验材料5.1.1实验试剂表5-1水凝胶的性能研究用到的试剂试剂纯度厂家磷钨酸负染液2%上海源叶生物科技有限公司碱式磷酸酶1U/μL赛默飞世尔科技(中国)有限公司5.1.2实验仪器表5-2水凝胶的性能研究用到的仪器仪器型号厂家流变仪HAAKERheoStress6000ThermoScient