离子交换法提取溶菌酶

岗位演练离子交换法提取溶菌酶1任务四人干扰素α2b的离子交换层析查阅资料，熟悉溶菌酶等电点和溶解性等性质。查阅设计《离子交换法提取溶菌酶操作记录》，在任务实施过程中同步填写。以鸡蛋蛋清为原材料，利用离子交换层析法等，制得溶菌酶粗品。设计实操设计（一）任务描述2（二）实训材料1.材料、试剂新鲜市售鸡蛋、精密pH试纸、纱布。层析介质（724树脂）、洗涤液（磷酸缓冲液：Na2HPO4-NaH2PO4缓冲液，pH6.5，0.15mol/L）、洗脱液（10%硫酸铵溶液）、浓盐酸、氢氧化钠、磷酸氢二钠、磷酸二氢钠。

2.仪器设备恒温水浴锅、干燥器、抽滤设备、磁力搅拌装置。3生产前准备预处理离子交换树脂预处理鸡蛋清吸附固液分离疏水洗涤除杂洗脱盐析12345678（三）实训操作清场94步骤一

配制试剂（1）配制7mol/L盐酸。（2）配制2mol/L氢氧化钠。（3）磷酸缓冲液（pH6.5，0.15mol/L）：分别配制0.15mol/L的Na2HPO4母液和NaH2PO4母液，再按体积比31.5∶68.5取Na2HPO4母液和NaH2PO4母液，混合，调节pH至6.5。（三）实训操作5步骤二

预处理离子交换树脂1.浸泡清洗

大体积蒸馏水浸泡新购的724树脂，反复漂洗，浮选法除去细小颗粒。倾倒除水，用80%～90%乙醇浸泡2h，倾倒去乙醇，除去树脂中的醇溶性杂质。加入45℃蒸馏水保温浸泡，恒温2h，然后用蒸馏水多次漂洗，除去水溶性杂质。2.转型

用树脂4倍体积的7mol/L，盐酸溶液浸泡2h，然后倾倒去盐酸，用蒸馏水漂洗至中性，倾倒去水。再用4倍体积的2mol/1氢氧化钠溶液浸泡2h，然后倾倒去碱液，用蒸馏水漂洗至中性，倾倒去水。3.浸泡平衡

用树脂4倍体积磷酸缓冲液浸泡24h，平衡树脂，浸泡待用。使用前倾倒法除去缓冲液。（三）实训操作6步骤三

预处理鸡蛋清（1）在鸡蛋顶端敲一个小洞，使蛋清全部流出，装于量筒称量体积。置容器中测定蛋清的pH，如果pH低于8则重新选择鸡蛋取蛋清。（2）用玻璃棒将蛋清轻轻搅动，使蛋清液黏稠均匀。搅拌过程中注意不能起泡，搅拌不宜过快，防止蛋白变性影响溶菌酶的提取率。（3）用双层纱布过滤除去蛋清液中的脐带块或蛋壳等杂质。（三）实训操作7步骤四

吸附

将处理过的蛋清液转移至烧杯中，冷至5℃，然后按照蛋清：树脂=10∶1的质量比边搅拌边加入724离子交换树脂，置于0～5℃搅拌吸附5h。然后将树脂和蛋清液的混合物在0～5℃继续过夜吸附。（三）实训操作8步骤五

固液分离

过滤树脂和蛋清液混合物，收集下层固体树脂。步骤六

洗涤除杂

用蒸馏水反复漂洗树脂，至树脂无白沫且洗涤液澄清为止。向树脂中加入磷酸缓冲液，搅拌洗涤15min，过滤除去液体收集树脂。按同样方法再处理两次。步骤七

洗脱

抽滤除去树脂的水分，加入30mL10%硫酸铵溶液洗脱溶菌酶，搅拌洗脱30min，过滤得到洗脱液。同法洗脱处理3次，合并3次的洗脱液，即为含溶菌酶的洗脱液。（三）实训操作9步骤八

盐析

测定洗脱液的总体积，每100mL洗脱液中缓慢加入硫酸铵粉末32g，边加边搅拌，使硫酸铵含量达到40%。搅拌均匀后置于4～10℃过夜。可见白色沉淀生成，4℃，10000r/min离心20min，弃上清，沉淀干燥后即制得含有硫酸铵的溶菌酶粗品。称量质量。（三）实训操作步骤九

清场

检查、整理各项记录。规范地存放生产用试剂，清洗器具，维护设备，处置废物和废液，清洁、消毒工作台和洁净室。最后，填写清场合格证。10（四）任务分析与总结1.简述溶酶体的概念。请根据溶菌酶性质和离子交换操作中溶液的pH判断，724树脂是阴离子交换树脂还是阳离子交换树脂。2.简述离子交换洗脱的方法和方式。计算10%硫酸铵溶液的物质的量浓度，分析该溶液为什么能将溶菌酶洗脱下来。3.小组讨论：离子交换层析法的操作步骤及要点，选取代表汇报讨论结果。4.选择题。请归类总结新型多糖基离子交换剂的类型。为弱碱性阴离子交换剂的是（

），为强碱性阴离子交换剂的是（

），为弱酸性阳离子交换剂的是（

），为强酸性阳离子交换