3.1.2微生物的培养技术及应用（二）课件-高二下学期生物人教版选择性必修三

3.1.2微生物的培养技术及应用（二）想从自然界中分离出需要的特定微生物并不容易，尤其当需要分离的微生物在混合的菌群中不是优势种群时，仅通过一般的微生物纯培养很难实现。PCR需要耐高温的DNA聚合酶。理论上，自然界微生物中存在耐高温的DNA聚合酶，但是这样的微生物类型并不常见。微生物学中，将允许特定种类的微生物生长，同时抑制或阻止其它种类生长的培养基，称为选择培养基3.1.2.4选择培养基思考讨论——选择培养基配方的设计尿素[CO（NH2）2]含氮量高，化学性质相对稳定，是现代农业产生中一种重要的氮肥。尿素施入土壤后，会被土壤中的某些细菌分解为NH3，NH3再转化为NO3-、NH4+等被植物吸收。而这些细菌之所以能分解尿素，是因为它们能合成脲酶，脲酶催化尿素分解产生NH3，NH3可作为细菌生长的氮源。讨论1．如果让你配制一种培养基，将土壤稀释液中能分解尿素的细菌分离出来，培养基的配方该如何设计？2．该培养基与普通培养基有哪些共同点和不同点？微生物的选择培养即通过选择培养基（液体/固体）培养微生物，使特定菌群的比例提高，从而引向纯培养纯培养物的获取除了采用平板划线法接种还可以采用稀释涂布平板法接种3.1.2.5微生物的选择培养1．取样将10g土样加入盛有90mL无菌水的锥形瓶中，充分摇匀。取1mL上清液加入盛有9mL无菌水的试管中，依次等比稀释。铲取土样，将样品装入纸袋中。2．梯度稀释①取0.1mL菌液，滴加到培养基表面。②将涂布器浸在盛有酒精的烧杯中。③将涂布器放在火焰上灼烧，待酒精燃尽、涂布器冷却后，再进行涂布。④用涂布器将菌液均匀地涂布在选择培养基表面。涂布时可转动培养皿，使涂布均匀。3．涂布平板（接种）待涂布的菌液被选择培养基吸收后，将平板倒置，放入30～37℃培养1～2d。在适宜稀释度的平板上可以分离得到单菌落。（观察记录菌落特征）4．培养5．观察3.1.2.6微生物的数量测定用稀释涂布平板法进行纯培养，可用来统计样品中活菌的数目当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个单菌落，来源于样品稀释液中的一个活菌。通过统计平板上的菌落数，推测出样品中大约有多少活菌统计的菌落数往往比活菌的实际数目少，这是因为当两个或多个细胞连在一起时，平板上看到的只是一个菌落一般选择菌落数为30～300的平板进行计数样品稀释度直接影响平板上的菌落数目同一稀释度下，应至少对3个平板进行重复计数，然后求平均值3.1.2.6微生物的数量测定若105倍稀释下三个平板上的菌落数依次为26、30、31，接近计数临界值。此时可以设置新的稀释倍数：5×104，使平板上的菌落计数结果更加准确。若105倍稀释下三个平板上的菌落数依次为38、42、195。由于三个平板上的计数结果偏差过大，应考虑重新实验。借助血细胞/细菌计数板，利用显微镜直接计数3.1.2.6微生物的数量测定血细胞计数板（厚、深）细菌计数板（薄、浅）探究·实践——土壤中分解尿素的细菌的分离与计数提出问题土壤中含有能分解尿素的细菌，我们如何分离它们？每克土壤样品究竟含有多少这样的细菌？基础知识只有能合成脲酶的微生物才能分解尿素。利用以尿素为唯一氮源的选择培养基，可以从土壤中分离出分解尿素的细菌。组分含量KH2PO41.4gNa2HPO42.1gMgSO4·7H2O0.2g葡萄糖10.0g尿素1.0g琼脂15.0gH2O定容至1000mL土壤取样梯度稀释培养基配制与灭菌接种培养与观察细菌适宜在酸碱度接近中性的潮湿土壤中生长，绝大多数分布在距地表3～8cm的土壤层。因此，取样时，一般要铲去表层土。你打算在什么样的土壤中取样？用无菌水稀释测定土壤中细菌数量，一般需要1×104、1×105和1×106倍稀释进行平板培养。第一次实验适当放宽，以保证能选取菌落数为30～300之间的平板。配制尿素为唯一氮源的选择培养基培养基、培养皿及相关工具灭菌30～37℃培养1～2d每隔24h菌落计数一次，选择菌落数目稳定时的记录结果观察记录菌落特征（如形状、大小和颜色等）涂布平板接种。设置对照。防止培养时间不足导致的菌落遗漏。设计实验探究·实践——土壤中分解尿素的细菌的分离与计数问题：培养基上长出的菌落中的细菌都可以分解尿素吗？探究·实践——土壤中分解尿素的细菌的分离与计数若取土样5g，稀释1×105倍，取0.1mL稀释液涂布在三个平板上，培养后三个平板上的菌落数依次为46、47、54。求每克土样中有多少细菌。解：三个平板上的菌落数平均值=（46＋47＋54）个/3=49个；接种用稀释液的种群密度=49个÷0.1mL=490个/mL；因为已经高倍稀释，所以稀释液1mL≈1g，因此稀释液中种群密度可记作490个/g；未稀释前菌液的种群密度=490个/g×105=4.9×107个/gCVm×—接种用稀释液的种群密度到社会中去活菌计数广泛应用于食品卫生、水源污染度的检验和土壤含菌量的测定等方面。如果你感兴趣，可以从下列项目中选做一个，并走访相关部门或企业，了解它们是如何进行检测的。1．空气中微生物总数的检测2．水中细菌总数的检测3．牛奶中细菌的分离与计数4．土壤中真菌（或放线菌）的分