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第一章发酵工程1.3发酵工程及其应用发酵工程的基本环节发酵工程的应用0102本节聚焦基于发酵工程的基本环节和应用实例,阐明发酵工程的概念。根据发酵产品和利用微生物的不同,讨论发酵工程中的发酵条件及控制方法。(测定微生物数量的常用方法有哪些?从社会中来
青霉素是世界上第一个应用于临床的抗生素。早期科学家只能从青霉菌中提取少量,价格贵如金。随着高产菌种的选育、发酵技术的发展等,青霉素步入了产业化生产的道路。如今,1瓶规格160万单位的青霉素注射剂的价格只要1元左右。
在工业上,青霉素究竟是怎样生产的呢?选育菌种扩大培养配制培养基灭菌接种发酵罐内发酵
分离、提纯产物获得产品01发酵工程的基本环节对发酵原理的认识微生物纯培养技术建立密闭式发酵罐成功设计严格控制环境条件(温度、pH、溶解氧、压强、营养物、泡沫等)大规模生产发酵产品现代化工程技术微生物的特定功能发酵工程:是指采用现代工程技术手段,利用微生物的某些特定功能,为人类生产有用的产品,或直接把微生物应用于工业生产过程的一种新技术。
接种选育菌种制备培养基扩大培养灭菌发酵罐内发酵分离、提纯产物获得产品在青霉素生产过程中如果有杂菌污染,某些杂菌会分泌青霉素酶,将青霉素分解掉。生产柠檬酸生产啤酒生产青霉素生产味精黑曲霉啤酒酵母黄青霉谷氨酸棒状杆菌在菌种确定之后,要选择原料制备培养基。在生产实践中,培养基的配方要经过反复试验才能确定。性状优良的菌种可以从自然界中筛选出来,也可以通过诱变育种或基因工程育种获得。工业发酵罐的体积一般为几十到几百立方米,接入的菌种总体积需要几立方米到几十立方米。所以,在发酵之前还需要对菌种进行扩大培养发酵工程中所用的菌种大多数是单一菌种,一旦有杂菌污染,可能导致产量大大下降。因此,培养基和发酵设备都必须经过严格的灭菌。现代发酵工程使用的大型发酵罐均有计算机控制系统,能对发酵过程中的温度、pH、溶解氧、罐压、通气量、搅拌、泡沫和营养等进行监测和控制;还可以进行反馈控制,使发酵全过程处于最佳状态。电动机排气管pH计冷却水排出口冷却夹层发酵液搅拌叶轮生物传感器装置空气入口放料管阀门培养物或营养物质的加入口观察孔取样管温度传感器和控制装置冷却水进入口
这是发酵工程的中心环节。在发酵过程中,要随时检测培养液中微生物的数量、产物的浓度等,以了解发酵进程。还要及时添加必需的营养组分,要严格控制温度、pH和溶解氧等发酵条件。
环境条件不仅会影响微生物的生长繁殖,而且会影响微生物代谢物的形成。发酵工程的基本环节实例——谷氨酸发酵:在中性和弱碱性条件下会积累谷氨酸;在酸性条件下则容易生成谷氨酰胺和N-乙酰谷胺酰胺;培养物或营养物质的加入口观察孔取样管温度传感器及控制装置冷却水进入口阀门空气入口放料管生物传感器装置搅拌叶轮发酵液冷却夹层冷却水排出口pH计排气管电动机抽取样本进行检测调节罐温调节罐压控制溶解氧含量不断搅拌的目的:①使菌种与发酵液混合均匀,提高原料利用率;②加快O2的溶解以及散热。控制培养物以一定速度进入、流出发酵罐,实现连续培养发酵罐内发酵接种选育菌种制备培养基扩大培养灭菌发酵罐内发酵分离、提纯产物获得产品发酵工程的基本环节如果发酵产品是微生物细胞本身,可在发酵结束之后,采用过滤、沉淀等方法将菌体分离和干燥,即可得到产品。如果产品是代谢物,可根据产物的性质采取适当的提取、分离和纯化措施来获得产品。01发酵工程的基本环节1.微生物菌种资源丰富,选择发酵工程用的菌种时,需要考虑哪些因素?①在低成本的培养基上能迅速生长繁殖;②生产所需代谢物的产量高;③发酵条件易控制;④菌种不易变异,退化等。2.怎样对发酵条件进行调控以满足微生物的生长需要?
要对温度、pH、溶解氧等发酵条件进行严格控制,使其最适合微生物的生长繁殖,同时及时添加必要的营养组分。思考讨论④实例——谷氨酸发酵:在中性和弱碱性条件下会积累谷氨酸;在酸性条件下则容易生成谷氨酰胺和N-乙酰谷胺酰胺;01发酵工程的基本环节思考讨论3.在产物分离和提纯方面,发酵工程与传统发酵技术相比有哪些改进之处?发酵工程中使用的分离和提纯产物的方法较多。在产物的初分离阶段,常采用沉淀、萃取、膜分离、吸附或离子交换等方法;在进一步纯化阶段,会采用液相层析法、结晶法等方法。发酵工程产物无论是代谢物还是菌体本身,都需要进行质量检查,合格后才能成为正式产品。传统发酵技术获得的产物一般不是单一的组分,而是成分复杂的混合物,很多时候不会再对产物进行分离和提纯处理,或者仅采用简单的沉淀、过滤等方法来分离提纯产物。4.在进行发酵生产时,排出的气体和废弃培养液等能直接排放到外界环境中吗?为什么?不能。因为在进行发酵生产时,微生物及其代谢物中都可能含有危害环境的物质。为了减少或避免污染物的产生和排放,实现清洁生产,应该对排出的气体和废弃培养液进行二次清洁或灭菌处理。发酵工程原理概念基本环节实质产物发酵原理和工程学原理通过微生物的大量繁殖获得所需产品代谢物或微生物细胞本身小结02发酵工程的应用(1)生产条件温和。(2)原料来源丰富且价格低廉。(3)产物专一(4)废弃物对环境的污染小且容易处理。优点应用发酵工程在食品工业、医药工业、农牧业等许多领域得到了广泛的应用,形成了规模庞大的发酵工业。02发酵工程的应用食品工业(1)生产传统的发酵产品:(2)生产食品添加剂(3)生产酶制剂如酱油各种酒类等如食品酸度调节剂——柠檬酸,增味剂——谷氨酸钠等。如淀粉酶、果胶酶等。食品工业是微生物最早开发和应用的领域02发酵工程的应用食品工业(1)生产传统的发酵产品:利用霉菌发酵生产酱油、利用酿酒酵母发酵生产各种酒类:大豆中蛋白质小分子肽和氨基酸酱油黑曲霉淋洗、调制各种谷物、水果酿酒酵母各种酒类(主要原料)02发酵工程的应用食品工业(2)生产食品添加剂添加剂类型举例酸度调节剂L-苹果酸、柠檬酸、乳酸增味剂5'-肌苷酸二钠、谷氨酸钠着色剂β-胡萝卜素、红曲黄色素增稠剂黄原胶、β-环状糊精、结冷胶防腐剂乳酸链球菌素、溶菌酶增加食品的营养;改善食品的口味、色泽和品质;延长食品的保存。食品添加剂的作用①利用黑曲霉发酵生产柠檬酸;柠檬酸是一种食品酸度调节剂②利用谷氨酸棒状杆菌发酵生产谷氨酸,经处理制成味精。02发酵工程的应用食品工业(3)生产酶制剂α-淀粉酶、β-淀粉酶、果胶酶脂肪酶、氨基肽酶种类作用可以用于食品直接生产;改进生产工艺;简化生产过程;改善产品的品质;延长食品储存期;提高产品产量。02发酵工程的应用食品工业思考·讨论啤酒的工业化生产流程发芽焙烤碾磨糖化蒸煮发酵消毒终止我国是世界上啤酒的生产和消费大国。啤酒是以大麦为主要原料经酵母菌发酵制成的。工业流程发芽12焙烤大麦种子发芽,释放
。淀粉酶加热
,
但
。3碾磨糖化罐4糖化杀死种子胚不使淀粉酶失活将干燥的麦芽碾磨成麦芽粉。淀粉水解形成糖浆。蒸煮5糖浆啤酒花产生风味组分,终止酶的进一步作用,并对糖浆灭菌。冷却6发酵过滤7消毒装瓶装罐储存罐8终止
将糖转化为
和CO2酵母菌酒精杀死啤酒中的大多数微生物,延长它的保存期。过滤、调节、分装啤酒进行出售。啤酒的发酵过程分:为_______和_______两个阶段;主发酵阶段完成______________________________________;后发酵的条件__________________________________________;主发酵后发酵酵母菌的繁殖、大部分糖的分解和代谢物的生成低温、密闭的环境下储存一段时间思考·讨论啤酒的工业化生产流程不适合饮用才能形成澄清、成熟的啤酒产生风味组分,终止酶的作用对糖浆灭菌加啤酒花主发酵发芽焙烤碾磨糖化蒸煮发酵消毒终止后发酵冷却过滤接种加热杀死种子胚但不使淀粉酶失活
啤酒的工业化生产流程(视频)
1.与传统的手工发酵相比,啤酒发酵生产过程中,哪些工程手段使啤酒的产量和质量明显提高?菌种的选育、对原材料的处理、发酵过程的控制、产品的消毒等,都有助于提高啤酒的产量和品质。02发酵工程的应用食品工业思考·讨论啤酒的工业化生产流程讨论
2.现在市面上流行一种“精酿”啤酒,它的制作工艺与普通啤酒有所不同,如一般不添加食品添加剂、不进行过滤和消毒处理等。有人认为饮用“精酿”啤酒比饮用“工业”啤酒更健康,你怎么看待这个问题?“精酿”啤酒是小规模酿造产品,发酵时间长、产量低和价格高,却依然有着市场需求,我们如何辩证地看待大规模生产与小规模制作?应该辩证地看待这一产品。一方面,这类产品具有多样化的特点,能够满足一些人对独特口感的需求,或者满足一些人的时尚追求。另一方面,这类产品是手工作坊式生产的,存在啤酒品质不稳定、价格昂贵的问题。类别“精酿”啤酒“工业”啤酒原料是否添加食品添加剂麦芽汁浓度发酵时间特点只使用麦芽、啤酒花、酵母菌和水麦芽、啤酒花、酵母菌、水、大米、玉米、淀粉等不添加添加
较高,口味浓郁较低,口味清淡长,可达2个月短,通常7天左右产量低、价格高产量高、价格低02发酵工程的应用02发酵工程的应用医药工业(1)发酵工程可以生产抗生素、多种氨基酸、激素和免疫调节剂等。
通过诱变的青霉菌发酵生产青霉素,青霉素的发现和产业化生产推动了发酵工程在医药领域的应用和发展。(2)基因工程、蛋白质工程与发酵工程相结合动植物的基因微生物直接改造微生物转入微生物病原体的抗原基因转入发酵工程药物药物疫苗
例:生产生长激素释放抑制激素。治疗肢端肥大症例:生产紫杉醇、青蒿素前体等化合物。例:生产乙肝疫苗的方法。02发酵工程的应用农牧业(1)生产微生物肥料①微生物肥料的种类:②微生物肥料的作用:
生物肥料利用了微生物在代谢过程中产生的有机酸、生物活性物质等来增进土壤肥力,改良土壤结构,促进植株生长;
有的微生物肥料可以抑制土壤中病原微生物的生长,从而减少病害的发生.根瘤菌肥、固氮菌肥。02发酵工程的应用农牧业(2)生产微生物农药①作用机理:利用微生物或其代谢物来防治病虫害②实例:③防治类型:生物防治微生物或代谢产物防治病虫害种类苏云金杆菌80多种农林害虫白僵菌玉米螟、松毛虫一种放线菌产生的抗生素(井冈霉素)水稻枯纹病02发酵工程的应用农牧业(3)生产微生物饲料①原理:微生物含有丰富的蛋白质,且繁殖速度快②实例1——单细胞蛋白以淀粉或纤维素的水解液、制糖工业的废液等为原料,通过发酵获得了大量的微生物菌体,即单细胞蛋白;应用:生产过程:食品添加剂、微生物饲料;成分:不仅含有丰富的蛋白质,还含有糖类、脂质和维生素等物质。③实例2——乳酸菌单细胞蛋白在青贮饲料中添加乳酸菌,可以提高饲料的品质,使饲料保鲜,动物食用后还能提高免疫力还需要铁、锌等微量元素02发酵工程的应用其他方面②对极端微生物(生活在高温、高压、高盐和低温等环境)的利用①解决资源短缺与环境污染问题利用纤维废料发酵生产酒精、乙烯等能源物质利用嗜热菌、嗜盐菌生产洗涤剂,嗜低温菌有助于提高热敏性产品的产量
发酵工程正渗透到几乎所有的工农业领域,在助力解决粮食、环境、健康和能源等方面的重大问题上,作出了越来越大的贡献。截止2015年,我国生物发酵生产年总值近2900亿元,产品总量位居世界第一。我国是名副其实的发酵大国。食品工业医药工业生产传统发酵食品农牧业其他方面生产食品添加剂发酵工程应用生产酶制剂采用基因工程的方法,将植物或动物的基因转移到微生物中,获得具有某种药物生产能力的微生物直接对菌种进行改造,再通过发酵技术大量生产所需要的产品生产微生物肥料生产微生物农药生产微生物饲料解决资源短缺与环境污染问题将极端微生物应用于生产实践小结1.与传统发酵技术相比,发酵工程的产品种类更加丰富,产量和质量明显提高。判断下列相关表述是否正确。(1)发酵工程与传统发酵技术最大的区别就是前者可以利用微生物来进行发酵()(2)发酵工程的产品主要包括微生物的代谢物、酶及菌体本身。()(3)在发酵工程的发酵环节中,发酵条件变化不仅会影响微生物的生长繁殖,也会影响微生物的代谢途径。()(4)通过发酵工程可以从微生物细胞中提取单细胞蛋白。()×√×√练习与应用(2)在发酵过程中,总有头孢霉素产生。人们通过对青霉素生产菌代谢途径的研究发现,在青霉素与头孢霉素的合成过程中,它们有一个共同的前体,这个前体经过两种不同酶的作用分别合成两个产物。如何改造青霉素生产菌使其只生产青霉素,或者只生产头孢霉素呢?
可以对两种酶的基因进行改造或敲除其中一种酶的基因,从而使青霉素生产菌只生产一种产物。1.在青霉素的发酵生产过程中,人们遇到了两个问题。请你运用所学知识或查阅资料,并发挥想象力,提出解决这些问题的思路。(1)青霉素发酵是高耗氧过程,如何能够保证在发酵过程中给微生物持续高效地供氧呢?(提示:血红蛋口具有携带O2的能力)
可以用基因工程的方法,将血红蛋白基因转入青霉素生产菌来提高菌体对氧的吸收和利用率。2.通过微生物发酵,可以将粮食(如玉米、小麦等)及各种植物纤维加工成燃料乙醇;将燃料乙醇和普通汽油按一定比例混配,就形成了目前在我国多地广泛使用的乙醇汽油。乙醇汽油的环保性令人称道。调査显示,使用乙醇汽油与使用普通汽油相比,排放到空气中的NO2、CO等均有不同程度下降。有人认为燃料乙醇“可再生”;但也有人认为,生产燃料乙醇需要消耗大量粮食,会增加粮食短缺的风险。请你尝试通过查阅资料,评估这一风险,并说明在生产时应如何规避这一风险。
在生产燃料乙醇时,为了规避这一风险,应该使用陈化粮食(如陈化的稻谷等)或者非粮食生物材料(如秸秆等)。使用陈化粮食来生产燃料乙醇,还有利于防止问题粮食流入市场。3.发酵工程广泛应用于农牧业、食品工业、医药工业等工业生产。下列关于发酵工程的叙述错误的是()A.发酵工程的形成离不开微生物纯培养技术的建立及发酵罐等设备的成功设计B.筛选出高产柠檬酸的黑曲霉菌种后可直接接种到发酵罐中进行发酵生产C.若培养基或发酵设备灭菌不彻底,则可能造成青霉素发酵的产量降低D.发酵工程生产的单细胞蛋白含有糖类、脂质等多种化合物,可作为家畜的优质饲料B核心归纳生产传统发酵食品生产食品添加剂发酵工程的基本环节生产酶制剂采用基因工程的方法直接对菌种进行改造生产微生物肥料生产微生物农药生产微生物饲料解决资源短缺与环境污染问题将极端微生物应用于生产实践发酵工程的应用食品工业医药工业农牧业其他方面接种灭菌发酵罐内发酵分离提纯产物获得产品选育菌种扩大培养配制培养基核心归纳1.优良的菌种不仅具有健壮,不易退化,其发酵产品的产量高、质量稳定等优点,它往往还会赋予发酵产品独特的风味,因此菌种选育环节很大程度上决定了生产发酵产品的成败。2.菌种选育:自然界筛选、诱变育种、基因工程育种3.发酵罐内发酵是发酵工程的中心环节。4.发酵工程的产品:微生物细胞本身或微生物的代谢物。5.发酵实质:通过微生物的大量繁殖获得所需产品。6.发酵工程的优点(1)生产条件温和。(2)原料来源丰富且价格低廉。(3)产物专一(4)废弃物对环境的污染小且容易处理。7.微生物农药的作用:生物防治的重要手段8.微生物饲料实例:单细胞蛋白(微生物菌体)(注意:单细胞蛋白不是蛋白质,而是通过发酵获得的大量的微生物菌体,即微生物菌体本身)核心归纳9.在我们的日常生活中,利用发酵工程生产的食品以及与食品有关的产品比比皆是,主要包括以下三个方面。第一,生产传统的发酵产品。第二,生产各种各样的食品添加剂。第三,生产酶制剂。(P24)10.例如,以大豆为主要原料,利用产生蛋白酶的霉菌(如黑曲霉),将原料中的蛋白质水解成小分子的肽和氨基酸,然后经淋洗、调制成的酱油产品;以谷物或水果等为原料,利用酿酒酵母发酵生产的各种酒类。(P24)11.柠檬酸是一种广泛应用的食品酸度调节剂,它可以通过黑曲霉的发酵制得;由谷氨酸棒状杆菌发酵可以得到谷氨酸,谷氨酸经过一系列处理就能制成味精。(P25)12.啤酒的工业化生产流程:分为主发酵和后发酵(酵母菌的繁殖、大部分糖的分解和代谢物的生成都在主发酵阶段完成,后发酵需要在低温、密闭的环境中进行。)第一章发酵工程复习与提高1.某化工厂为了处理排出污水中的一种有害的、难以降解的有机化合物A,其研究团队用化合物A、磷酸盐、镁盐和微量元素等配制了培养基,成功地筛选出能高效降解化合物A的细菌(目的菌)。实验的主要步骤如下图所示,请分析冋答问题。(1)在培养基中加入化合物A的目的是
,这种培养基属于
培养基。(2)培养若干天后,应选择培养瓶中化合物A含量
的培养液,接入新的培养液中连续培养,使目的菌的数量
。(3)若要研究目的菌的生长规律,可挑取单个菌落进行液体培养,再采用
方法进行计数。请你预测目的菌的种群数量会发生怎样的变化。(4)将目的菌用于环境保护实践时,还有哪些问题需要解决?(5)有人提出,可以通过改造细菌的基因来获得能够降解化合物A的细菌,请分析这种方法是否可行。筛选出可以降解化合物A的微生物选择显著降低扩增细菌计数板计数
目的菌能否在自然环境中大量生长繁殖;是否会产生对环境有害的代谢物;降解化合物A后是否会产生二次污染等问题。可行。这是后面将要学习的基因工程的基本思路。S形增长
不同意。只检测一个冰激凌数据太少,不能排除偶然因素的影响。②有没有必要对冰激凌原液进行梯度稀释?为什么?【提示:我国卫生部门规定了饮用水标准,1mL自来水检出的菌落总数不可以超过100个(37℃培养48h),不得检出总大肠杆菌群】
没有必要。
根据国家的标准,自来水中的大肠杆菌数目应该是非常少的。即使冰激凌中大肠杆菌数目超标了,也不可能很离谱,如果进行梯度稀释,最后培养出来的菌落数可能不在计数要求的范围内,从而导致结果误差大。2.③他们认为,在用该方法统计菌落数目时不需要设计对照组,所以只准备培养18个平板。你认为在这项检测中是否需要对照组?为什么?(2)下图所示为4种菌落分布图,一般不能由涂布平板法得到的是
。
需要。一组为阴性对照组,不进行涂布或者用无菌水涂布平板,说明培养基是否被污染;另一组为阳性对照组,涂布大肠杆菌。说明该培养基能否培养出大肠杆菌。B2.(3)在完善实验设计思路后,三位同学进行了实验。培养结果显示,除了深紫色菌落,还有其他菌落存在,这说明了什么?如果以菌落数代表样品中的大肠杆菌数量,则统计结果比实际值是偏大还是偏小?为什么?(4)如果实验结果显示,检测的冰激凌中大肠杆菌含量超标了。接下来他们应该做什么?
说明冰激凌中不仅有大肠杆菌,还有其他细菌或真菌等。统计结果比实际值偏少。因为有些菌落可能会重叠,统计时容易将其误认为是一个菌落,
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