化妆品毒理学试验方法与要求（2021-广东省质量监督检测研究院-刘香梅）

化妆品毒理学试验

方法与要求刘香梅目录一、化妆品原料注册备案毒理学资料要求

二、化妆品产品注册备案毒理学检测项目及要求三、毒理学试验方法介绍

一、原料注册备案毒理学检测项目要求

2021年2月26号，国家药监局发布2021年第31号文《化妆品新原料注册备案资料管理规定》的公告，2021年5月1日实施。附件3第三条：毒理学安全性评价相关资料要求就毒理学资料分别提出了总体要求和毒理学检测项目的要求1、根据申报注册或进行备案化妆品新原料的具体情形，选择适当的毒理学试验项目，进行毒理学安全性评价，并提供相应的毒理学安全性评价资料。应当结合新原料开展的毒理学试验项目，在逐项对每个毒理学试验的方法、试验过程、毒理学终点等进行总结的基础上，对新原料的毒理学安全性评价进行综述，并得出安全性评价结果。2、化妆品新原料毒理学安全性评价资料可以是化妆品新原料注册人、备案人自行或委托开展的毒理学试验项目的试验报告、科学文献资料和国内外政府官方网站、国际组织网站发布的内容。总体要求一、原料注册备案毒理学检测项目要求

检测项目要求1.急性经口或急性经皮毒性试验；2.皮肤和眼刺激性/腐蚀性试验；3.皮肤变态反应试验；4.皮肤光毒性试验（原料具有紫外线吸收特性需做该项试验）；5.皮肤光变态反应试验（原料具有紫外线吸收特性需做该项试验）；6.致突变试验（至少应当包括一项基因突变试验和一项染色体畸变试验）；7.亚慢性经口或经皮毒性试验（如果该原料在化妆品中使用经口摄入可能性大时，应当提供亚慢性经口毒性试验）；8.致畸试验；9.慢性毒性/致癌性结合试验；10.吸入毒性试验（原料有可能吸入暴露时须做该项试验）；11.长期人体试用安全试验；12.根据原料的特性和用途，需提供其他项目的毒理学试验资料。(毒代和动力学试验、透皮试验、免疫毒性测试等)国内外首次防腐、防晒、染发、祛斑美白、防脱发、祛痘、抗皱等功效性原料（1-12）非功效性原料（1-7项）境外3年使用史防腐、防晒、染发、祛斑美白、防脱发、祛痘、抗皱等功效性原料（1-7）非功效性原料（1-6项）其他安全食用历史（2-5）大分子（2、4）一、原料注册备案毒理学检测项目要求

注意生物性原料寡肽、多肽、蛋白质1-12项需要增加皮肤吸收/透皮试验和免疫毒性试验纳米新原料皮肤吸收/透皮吸收试验1-12项吸入毒性试验二、化妆品注册备案毒理学检测项目及要求

检验依据：《化妆品安全技术规范》（2015年版），毒理学检测项目共有23个。2015年12月，国家食品药品监督管理总局关于发布化妆品安全技术规范（2015年版）的公告（2015年第268号）2016年11月，总局关于将化妆品用化学原料体外3T3中性红摄取光毒性试验方法纳入化妆品安全技术规范（2015年版）的通告（2016年第147号）2017年8月，总局关于将化妆品用化学原料离体皮肤腐蚀性大鼠经皮电阻和皮肤光变态反应2个试验方法纳入化妆品安全技术规范（2015年版）的通告（2017年第136号）2019年3月，关于将化妆品中游离甲醛的检测方法等9项检验方法纳入化妆品安全技术规范（2015年版）的通告（2019年第12号）二、化妆品注册备案毒理学检测项目及要求

二、化妆品注册备案毒理学检测项目及要求化妆品监督管理条例规定：化妆品分为特殊化妆品和普通化妆品。用于染发、烫发、祛斑美白、防晒、防脱发的化妆品以及宣称新功效的化妆品为特殊化妆品。特殊化妆品以外的化妆品为普通化妆品化妆品毒理学检测项目选择原则1、产品类别：普通/特殊

2、使用部位：唇部/眼睛/皮肤

3、实际使用情况:驻留/淋洗化妆品注册和备案检验工作规范（2019年第72号）附1化妆品注册和备案检验项目要求表1-3.二、化妆品注册备案毒理学检测项目及要求化妆品注册和备案检验工作规范（2019年第72号）附1化妆品注册和备案检验项目要求表1-4.二、化妆品注册备案毒理学检测项目及要求三、毒理学试验方法介绍1皮肤刺激性/腐蚀性试验2急性眼刺激性/腐蚀性试验3皮肤变态反应试验4皮肤光毒性试验5细菌回复突变试验6体外哺乳动物细胞染色体畸变试验7体外哺乳动物细胞基因突变试验皮肤刺激性/腐蚀性试验1范围：本规范规定了动物皮肤刺激性或腐蚀性试验的基本原则、要求和方法。本规范适用于化妆品原料及其产品安全性毒理学检测。2试验目的：确定和评价化妆品原料及其产品对哺乳动物皮肤局部是否有刺激作用或腐蚀作用及其程度。3定义3.1皮肤刺激性dermalirritation皮肤涂敷受试物后局部产生的可逆性炎性变化。3.2皮肤腐蚀性dermalcorrosion皮肤涂敷受试物后局部引起的不可逆性组织损伤。皮肤刺激性/腐蚀性试验4试验的基本原则将受试物一次或多次涂敷于受试动物的皮肤上，在规定的时间间隔内，观察动物皮肤局部刺激作用的程度并进行评分。采用自身对照，以评价受试物对皮肤的刺激作用。急性皮肤刺激性试验观察期限应足以评价该作用的可逆性或不可逆性。伦理学终点：动物如果在试验的任何阶段出现严重抑郁、痛苦的表现，则应当给予人道地处死。依据试验情况对受试物进行适当评价。皮肤刺激性/腐蚀性试验5试验方法5.1受试物液体受试物一般不需稀释，可直接使用原液。若受试物为固体，应将其研磨成细粉状，并用水或其他无刺激性溶剂充分湿润，以保证受试物与皮肤有良好的接触。使用其他溶剂，应考虑到该溶剂对受试物皮肤刺激性的影响。需稀释后使用的产品，先进行产品原型的皮肤刺激性腐蚀性试验，如果试验结果显示中度以上的刺激性，可按使用浓度为受试物再进行皮肤刺激性腐蚀性试验。受试物为强酸或强碱（pH值≤2或≥11.5），可以不再进行皮肤刺激试验。此外，若已知受试物有很强的经皮吸收毒性，经皮LD50

小于200mg/kg体重或在急性经皮毒性试验中受试物剂量为2000mg/kg体重仍未出现皮肤刺激性作用，也无需进行急性皮肤刺激性试验。皮肤刺激性/腐蚀性试验5.2实验动物和饲养环境多种哺乳动物均可被选为实验动物，首选白色家兔。应使用成年、健康、皮肤无损伤的动物，雌性和雄性均可，但雌性动物应是未孕和未曾产仔的。实验动物至少要用4只，如要澄清某些可疑的反应则需增加实验动物数。实验动物应单笼饲养，试验前动物要在实验动物房环境中至少适应3d时间。实验动物及实验动物房应符合GB14925-2010实验动物环境与设施。选用标准配合饲料，饮水不限制皮肤刺激性/腐蚀性试验5.3试验步骤5.3.1试验前约24h，将动物背部脊柱两侧毛剪掉，去毛范围左、右各3cm×3cm。将受试物一次(或多次)涂敷于受试动物的皮肤上，每次0.5mL（g）。在规定的时间间隔内，观察动物皮肤局部刺激反应（红斑和水肿）的程度并进行评分。按每天每只动物的积分均值判断受试物的刺激强度。5.3.2急性皮肤刺激性试验：采用封闭试验，敷用时间为2-4h。试验结束后用温水或无刺激性溶剂清除残留受试物。皮肤刺激性/腐蚀性试验5.3.3多次皮肤刺激性试验步骤5.3.1开放式涂抹每天一次，连续14天，每次约0.5mL(g)。5.3.2从第二天开始，每次涂抹前应剪毛，用水或无刺激性溶剂清除残留受试物。一小时后观察结果，按表1评分，对照区和试验区同样处理。5.4试验评分5.4.1急性皮肤刺激性试验：于清除受试物后的1、24、48和72h观察涂抹部位皮肤反应，按表1进行皮肤反应评分，以受试动物积分的平均值进行综合评价，根据24、48和72h各观察时点最高积分均值，判定皮肤刺激强度。观察时间的确定应足以观察到可逆或不可逆刺激作用的全过程，一般不超过14d。皮肤刺激性/腐蚀性试验5.4.1多次皮肤刺激性试验：多次皮肤刺激试验：开放式涂抹每天一次，连续14天，每天观察，评分。按下列公式计算每天每只动物平均积分，判断皮肤刺激强度。皮肤刺激性/腐蚀性试验皮肤刺激性/腐蚀性试验注意：需稀释使用的产品，先进行产品原型的皮肤刺激性/腐蚀性试验，如果试验结果显示中度以上刺激性，可按使用浓度为受试物再进行皮肤刺激性/腐蚀性试验，评价产品对皮肤的刺激强度。急性皮肤刺激性试验，非即洗类产品（如香水）封闭4小时；即洗类产品（如沐浴液洗发液等）封闭2小时，如果72小时皮肤刺激反应积分未降至0分，应延长观察时间至皮肤刺激反应完全恢复，最长至14天尚未恢复，则判定受试物对皮肤有腐蚀性。皮肤刺激性/腐蚀性试验结果判定标准其他化妆品，皮肤刺激强度为轻刺激性或轻刺激性以下（积分均值<2.0），可予以通过。儿童产品和宣称无刺激性的产品，皮肤刺激强度为无刺激性（积分均值<0.5），可予以通过。急性眼刺激性/腐蚀性试验1范围本规范规定了动物急性眼刺激性或腐蚀性试验的基本原则、要求和方法。本规范适用于化妆品原料及其产品安全性毒理学检测。2试验目的确定和评价化妆品原料及其产品对哺乳动物的眼睛是否有刺激作用或腐蚀作用及其程度。3定义3.1眼睛刺激性eyeirritation眼球表面接触受试物后所产生的可逆性炎性变化。3.2眼睛腐蚀性eyecorrosion眼球表面接触受试物后引起的不可逆性组织损伤。急性眼刺激性/腐蚀性试验4试验的基本原则受试物以一次剂量滴入每只实验动物的一侧眼睛结膜囊内，以未作处理的另一侧眼睛作为自身对照。在规定的时间间隔内，观察对动物眼睛的刺激和腐蚀作用程度并评分，以此评价受试物对眼睛的刺激作用。观察期限应能足以评价刺激效应的可逆性或不可逆性。伦理学终点：动物如果在试验的任何阶段出现严重抑郁、痛苦的表现，应当给予人道地处死，依据试验情况对受试物进行适当评价。动物出现角膜穿孔、角膜溃疡、角膜4分超过48h、缺乏光反射超过72h、结膜溃疡、坏疽、腐烂等情况，通常为不可逆损伤的症状，也应当给予人道地处死。急性眼刺激性/腐蚀性试验5试验方法5.1受试物液体受试物直接使用原液，染毒量为0.1mL。若受试物为固体或颗粒状，应将其研磨成细粉状，染毒量应为体积0.1mL或重量不大于100mg（染毒量应进行记录）。受试物为强酸或强碱（pH值≤2或≥11.5），或已证实对皮肤有腐蚀性或强刺激性时，可以不再进行眼刺激性试验。气溶胶产品需喷至容器中，收集其液体再使用。5.2实验动物和饲养环境至少3只家兔。试验前动物要在实验动物房环境中至少适应3d时间。在试验开始前的24h内要对试验动物的两只眼睛进行检查（包括使用荧光素钠检查）。有眼睛刺激症状、角膜缺陷和结膜损伤的动物不能用于试验。急性眼刺激性/腐蚀性试验不冲洗试验：将受试物0.1mL（100mg）滴入（或涂入）结膜囊中，使上、下眼睑被动闭合1秒，24小时之内不冲洗眼睛。30秒冲洗试验：滴入受试物后，眼闭合1秒，至第30秒时，用足量、流速较快的水流冲洗眼睛30秒。4秒冲洗试验：滴入受试物后，眼闭合1秒，至第4秒时，用足量、流速较快的水流冲洗眼睛30秒。急性眼刺激性/腐蚀性试验临床检查和评分在滴入受试物后1、24、48、72h以及第4d和第7d对动物眼睛进行检查。如果72h未出现刺激反应，即可终止试验。如果发现累及角膜或有其它眼刺激作用，7d内不恢复者，为确定该损害的可逆性或不可逆性需延长观察时间，一般不超过21d，并提供第7d、14d、21d的观察报告。除了对角膜、虹膜、结膜进行观察外，其它损害效应均应当记录并报告。急性眼刺激性/腐蚀性试验正常结膜充血和水肿结膜充血和水肿角膜损伤急性眼刺激性/腐蚀性试验结果评价：以给受试物后动物角膜、虹膜或结膜各自在24、48、或72h观察时点的刺激反应的最高积分均值和恢复时间评价。急性眼刺激性/腐蚀性试验注意易触及眼睛的非即洗类产品（如眼霜，眼影、面膜），做不冲洗试验，试验结果显示受试物有刺激性，需另选用3只家兔进行30秒冲洗试验，评价受试物对眼刺激反应分级。即洗类产品（如洗面奶、沐浴液、洗发液）只做30s冲洗试验。染发剂类产品只做4s冲洗试验。急性眼刺激性/腐蚀性试验判定标准宣称无刺激性、“无泪配方”产品，需为无刺激性予以通过。儿童产品，为无刺激或微刺激性予以通过。其他化妆品，眼刺激反应分级为轻刺激性或轻刺激性以下，可予以通过皮肤变态反应试验1范围本规范规定了动物皮肤变态反应试验的基本原则、要求和方法。本规范适用于化妆品原料及其产品安全性毒理学检测。2试验目的确定重复接触化妆品及其原料对哺乳动物是否可引起变态反应及其程度。3定义3.1皮肤变态反应（过敏性接触性皮炎）skinsensitization，allergiccontactdermatitis是皮肤对一种物质产生的免疫源性皮肤反应。在人类这种反应可能以瘙痒、红斑、丘疹、水疱、融合水疱为特征。动物的反应不同，可能只见到皮肤红斑和水肿。3.2诱导接触inductionexposure指机体通过接触受试物而诱导出过敏状态的试验性暴露。3.3诱导阶段inductionperiod指机体通过接触受试物而诱导出过敏状态所需的时间，一般至少一周。3.4激发接触challengeexposure机体接受诱导暴露后，再次接触受试物的试验性暴露，以确定皮肤是否会出现过敏反应。4试验的基本原则实验动物通过多次皮肤涂抹（诱导接触）或皮内注射受试物10d—14d（诱导阶段）后，给予激发剂量的受试物，观察实验动物并与对照动物比较对激发接触受试物的皮肤反应强度。4.1实验动物和饲养环境一般选用健康、成年雄性或雌性豚鼠，雌性动物应选用未孕或未曾产仔的。实验动物及实验动物房应符合国家相应规定。选用标准配合饲料，饮水不限制，需注意补充适量Vc。4.4试验方法可靠性的检查（阳性质控）半年开展一次。试验初期，或使用新的动物品系时，需重新开展。局部封闭涂皮法至少有30%动物出现皮肤过敏反应；皮内注射法至少有60%动物出现皮肤过敏反应。二硝基氯代苯、肉桂醛、对氨基苯酸乙酯等。局部封闭涂皮试验（BuehlerTest,BT）动物数：试验组至少20只，对照组至少10只。剂量水平：诱导接触受试物浓度为能引起皮肤轻度刺激反应的最高浓度，激发接触受试物浓度为不能引起皮肤刺激反应的最高浓度。试验浓度水平可以通过少量动物（2—3只）的预试验获得。水溶性受试物可用水或用无刺激性表面活性剂作为赋形剂，其他受试物可用80%乙醇或丙酮等作赋形剂，并设溶剂对照。试验步骤：诱导接触：将受试物约0.2mL（g）涂在实验动物去毛区皮肤上，胶布封闭固定6h。第7d和第14d以同样方法重复一次。激发接触：末次诱导后14—28d，将约0.2mL的受试物涂于豚鼠背部另一侧去毛区封闭固定6h。激发接触后24h和48h观察皮肤反应。当受试物组动物出现皮肤反应积分≥2时，判为该动物出现皮肤变态反应阳性，按致敏强度分级表判定受试物致敏强度。如激发接触所得结果仍不能确定，应于第一次激发后一周，给予第二次激发结果判定致敏强度为弱致敏性和弱致敏性以下（未见皮肤变态反应）的产品，可予以通过。皮肤光毒性试验1范围：本规范规定了皮肤光毒性试验的基本原则，要求和方法。

本规范适用于化妆品原料及其产品安全性毒理学检测2试验目的：评价化妆品原料及其产品引起皮肤光毒性的可能性。3定义光毒性phototoxicity皮肤一次接触化学物质后，继而暴露于紫外线照射下所引发的一种皮肤毒性反应，或者全身应用化学物质后，暴露于紫外线照射下发生的类似反应。4基本原则将一定量受试物涂抹在动物背部去毛的皮肤上，经一定时间间隔后暴露于UVA光线下，观察受试动物皮肤反应并确定该受试物有否光毒性。皮肤光毒性试验受试物液体受试物直接使用原液。若受试物为固体，应将其研磨成细粉状并用水或其他溶剂充分湿润，在使用溶剂时，应考虑到溶剂对受试动物皮肤刺激性的影响。对于产品而言，一般使用原型，所用受试物浓度不能引起皮肤刺激反应(可通过预试验确定)。阳性对照物选用8—甲氧基补骨脂。实验动物和饲养条件白色家兔或白化豚鼠，选用6只动物进行正式试验。检疫期3d—5d。实验动物及实验动物房应符合国家相应规定。选用标准配合饲料，饮水不限制，需注意补充适量Vc。设备皮肤光毒检测仪（光源320nm—400nm）如含有UVB，其剂量不得超过0.1J/cm2。皮肤光毒性试验试验步骤按照《化妆品安全技术规范》（2015年版）结果评价单纯涂受试物而未经照射区域未出现皮肤反应，而涂受试物后经照射的区域出现皮肤反应分值之和为2或2以上的动物数为1只或1只以上时，判为受试物具有光毒性。结果判定具有光毒性的产品，不予通过。细菌回复突变试验1范围：本规范确定了细菌回复突变试验的基本原则、要求和方法。本规范适用于化妆品原料及其产品的基因突变检测。2定义细菌回复突变试验bacterialreversemutationassay利用一组组氨酸或者色氨酸缺陷型试验菌株测定引起细菌碱基置换或移码突变的化学物质所诱发的氨基酸缺陷型→原养型回复突变的试验方法。

S9经多氯联苯(PCB混合物)或苯巴比妥钠和β-萘黄酮结合诱导的大鼠制备肝匀浆，在9000g下离心10min后的肝匀浆上清液。细菌回复突变试验3原理鼠伤寒沙门氏组氨酸营养缺陷型菌株不能合成组氨酸，故在缺乏组氨酸的培养基上，仅少数自发回复突变的细菌生长；大肠杆菌色氨酸营养缺陷型菌株不能合成色氨酸，故在缺乏色氨酸的培养基上，仅少数自发回复突变的细菌生长。假如有致突变物存在，则营养缺陷型的细菌回复突变成原养型，因而能生长形成菌落，据此判断受试物是否为致突变物。某些致突变物需要代谢活化后才能引起回复突变，故需加入经诱导剂诱导的大鼠肝制备的S9混合液。左:溶剂对照；右:阳性物对照细菌回复突变试验试验条件试验菌株采用以下菌株作为标准组合：鼠伤寒沙门氏菌TA1535；鼠伤寒沙门氏菌TA97或TA97a或TA1537；鼠伤寒沙门氏菌TA98；鼠伤寒沙门氏菌TA100；鼠伤寒沙门氏菌TA102或大肠杆菌WP2uvrA或大肠杆菌WP2uvrA（pKM101）；细菌回复突变试验菌株组氨酸缺陷色氨酸缺陷脂多糖屏障缺损氨苄青霉素抗性切除修复缺损四环素抗性自发回变菌落参考数*Ames实验室Zeiger实验室TA97+/+++-90~180*75~200*TA97a+/+++-90~180*75~200*TA98+/+++-30~5020~50TA100+/+++-100~20075~200TA102+/++-+240~320*100~400*TA1535+/+-+-10~355~20TA1537+/+-+-3~155~20WP2uvrA/+/-+-/5~20WP2uvrA（pKM101）/+/++-/100~200注“+”表示需要组氨酸“+”表示需要色氨酸“+”表示具有rfa突变“+”表示具有R因子“+”表示对于鼠伤寒沙门氏菌具有△uvrB突变，对于大肠杆菌，具有△uvrA突变“+”表示具有pAQ1质粒*在体外代谢活化条件下自发回变菌落数略增。对于各菌的自发回变范围，各个实验室在参考其他实验室数据的基础上应建立自己的历史对照数据库，形成适合本实验室条件的适用范围。同时，实验室背景数据应当与文献报道相符。菌株鉴定：新获得的或长期保存的菌种，在试验前必须进行菌株的生物特性鉴定。菌株鉴定的判断标准，如表所示。表1试验菌株鉴定的判断标准细菌回复突变试验剂量设计决定受试物最高剂量的标准是对细菌的毒性及其溶解度。自发回变数的减少，背景菌变得清晰或被处理的培养物细菌存活数减少，都是毒性的标志。对原料而言，一般最高剂量组可为5mg/皿或5µl/皿。对产品而言，有杀菌作用的受试物，最高剂量可为最低抑菌浓度，无杀菌作用的受试物，最高剂量可为原液。受试物至少应设四个剂量组。每个剂量均做三个平行平板。细菌回复突变试验菌株准备细菌回复突变试验细菌回复突变试验数据处理和结果判定如果受试物TA1535、TA1537、WP2uvrA的回变菌落数是溶剂对照回变菌落数的三倍或三倍以上，受试物TA97、TA97a、TA98、TA100、TA102、WP2uvrA（pKM101）的回变菌落数是溶剂对照回变菌落数的二倍或二倍以上，并出现以下情形之一，则该受试物判定为致突变阳性，（1）呈剂量-反应关系（2）任何一个剂量条件下，出现阳性反应并有可重复性受试物经上述五个试验菌株测定后，只要有一个试验菌株，无论在加S9或未加S9条件下为阳性，均可报告该受试物细菌回复突变试验为致突变阳性。如果受试物经五个试验菌株检测后，无论加S9和未加S9均为阴性，则可报告该受试物为致突变阴性。体外哺乳动物细胞染色体畸变试验1范围：本规范规定了体外哺乳动物细胞染色体畸变试验的基本原则、要求和方法。本规范适用于检测化妆品原料及其产品的致突变性。2试验目的：本试验是用于检测培养的哺乳动物细胞染色体畸变，以评价受试物致突变的可能性3定义结构畸变structuralaberration在细胞分裂的中期相阶段，用显微镜检出的染色体结构改变，表现为缺失、断片、互换等。结构畸变可分为以下两类。染色体型畸变chromosome-typeaberration染色体结构损伤，表现为在两个染色单体相同位点均出现断裂或断裂重组的改变。染色单体型畸变chromatid-typeaberration染色体结构损伤，表现为染色单体断裂或染色单体断裂重组的损伤。有丝分裂指数mitoticindex中期相细胞数与所观察的细胞总数之比值；是一项反映细胞增殖程度的指标。体外哺乳动物细胞染色体畸变试验4试验基本原则在加入和不加入代谢活化系统的条件下，使培养的哺乳动物细胞暴露于受试物中。用中期分裂相阻断剂（如秋水仙素或秋水仙胺）处理，使细胞停止在中期分裂相，随后收获细胞，制片，染色，分析染色体畸变。大部分的致突变剂导致染色单体型畸变，偶有染色体型畸变发生。虽然多倍体的增加可能预示着有染色体数目畸变的可能，但本方法并不适合用于测定染色体的数目畸变。体外哺乳动物细胞染色体畸变试验阳性对照可根据受试物的性质和结构选择适宜的阳性对照物，阳性对照物应是已知的断裂剂，能引起可检出的、并可重复的阳性结果。当外源性活化系统不存在时，可使用丝裂霉素C(MMC)、甲磺酸甲酯(MMS)）、甲磺酸乙酯(EMS)等；当外源性活化系统存在时，可使用环磷酰胺、苯并（a）芘等。阴性对照物：阴性对照，即仅含和受试物组相同的溶剂，不含受试物，其他处理和受试物组完全相同。此外，如未能证实所选溶剂不具有致突变性，溶剂对照与本实验室空白对照背景资料有明显差异，还应设空白对照体外哺乳动物细胞染色体畸变试验细胞株中国地鼠肺（CHL）细胞株或者中国地鼠卵巢细胞株（CHO）受试物浓度设置（1）最高浓度的选择：决定最高浓度的因素是细胞毒性、受试物在试验系统中的溶解度以及pH或渗克分子浓度(osmolality)的改变。（2）细胞毒性的确定：应使用指示细胞完整性和生长情况的指标，在活化系统存在或不存在的两种条件下确定