菌落总数的测定

关于菌落总数的测定一、菌落总数食品检样经过处理，在一定条件下（如培养基、培养温度和培养时间等）培养后，所得每g（mL）检样中形成的微生物菌落总数。

第2页,共21页，2024年2月25日，星期天二、菌落总数测定的意义1、判定食品被细菌污染的程度及卫生质量。2、预测食品存用的期限长短。3、了解细菌在食品中的繁殖动态。第3页,共21页，2024年2月25日，星期天三、设备和材料

除微生物实验室常规灭菌及培养设备外，其他设备和材料如下：恒温培养箱：36℃±1℃，30℃±1℃。冰箱：2℃～5℃。恒温水浴箱：46℃±1℃。天平：感量为0.1g。均质器。振荡器。无菌吸管：1mL（具0.01mL刻度）、10mL（具0.1mL刻度）或微量移液器及吸头。无菌锥形瓶：容量250mL、500mL。无菌培养皿：直径90mm。pH计或pH比色管或精密pH试纸。放大镜或/和菌落计数器。第4页,共21页，2024年2月25日，星期天四、平板倾注法测定菌落总数检验步骤(程序)：检样→稀释处理→做平板→培养→菌落计数→报告结果第5页,共21页，2024年2月25日，星期天（一）、样品的稀释及做平板1、固体和半固体样品：称取25g样品置盛有225mL磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌均质杯内，8000r/min～10000r/min均质1min～2min，或放入盛有225mL稀释液的无菌均质袋中，用拍击式均质器拍打1min～2min，制成1:10的样品匀液。第6页,共21页，2024年2月25日，星期天2、液体样品：以无菌吸管吸取25mL样品置盛有225mL磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌锥形瓶（瓶内预置适当数量的无菌玻璃珠）中，充分混匀，制成1:10的样品匀液。（一）、样品的稀释及做平板第7页,共21页，2024年2月25日，星期天3、用1mL无菌吸管或微量移液器吸取1:10样品匀液1mL，沿管壁缓慢注于盛有9mL稀释液的无菌试管中（注意吸管或吸头尖端不要触及稀释液面），振摇试管或换用1支无菌吸管反复吹打使其混合均匀，制成1:100的样品匀液。4、上述操作程序，制备10倍系列稀释样品匀液。每递增稀释一次，换用1次1mL无菌吸管或吸头。（一）、样品的稀释及做平板（一）、样品的稀释及做平板第8页,共21页，2024年2月25日，星期天5、根据对样品污染状况的估计，选择2个～3个适宜稀释度的样品匀液（液体样品可包括原液），在进行10倍递增稀释时，吸取1mL样品匀液于无菌平皿内，每个稀释度做两个平皿。同时，分别吸取1mL空白稀释液加入两个无菌平皿内作空白对照。（一）、样品的稀释及做平板（一）、样品的稀释及做平板第9页,共21页，2024年2月25日，星期天6、及时将15mL～20mL冷却至46℃的平板计数琼脂培养基（可放置于46℃±1℃恒温水浴箱中保温）倾注平皿，并转动平皿使其混合均匀。（一）、样品的稀释及做平板（一）、样品的稀释及做平板第10页,共21页，2024年2月25日，星期天1ml1ml1ml1:101:10001:1001:100001ml1ml1ml1ml加入46℃营养琼脂12~15ml25g/ml样品生理盐水第11页,共21页，2024年2月25日，星期天

注意：检样从开始稀释到倾注最后一个平皿所用时间不宜超过20min，以防止细菌有所死亡或繁殖。

第12页,共21页，2024年2月25日，星期天（二）培养1、待琼脂凝固后，将平板翻转，36℃±1℃培养48h±2h。水产品30℃±1℃培养72h±3h。2、如果样品中可能含有在琼脂培养基表面弥漫生长的菌落时，可在凝固后的琼脂表面覆盖一薄层3、琼脂培养基（约4mL），凝固后翻转平板，按1、条件进行培养。第13页,共21页，2024年2月25日，星期天（三）计数和报告

到达规定培养时间，应立即计数。如果不能立即计数，应将平板放置于0－4℃，但不得超过24h。第14页,共21页，2024年2月25日，星期天1、菌落的选择（1）、单个菌做一个菌落计（2）、呈链状生长的菌落之间无任何明显界限，作为一个菌落计，如存在有几条不同来源的链，则每条链均应按一个菌落计算。（3）、如片状菌落不到平板一半，而另一半又分布均匀，则可以半个平板的菌落数乘2代表全平板的菌落数。第15页,共21页，2024年2月25日，星期天2、平板菌落计数的选择

（1）、选取菌落数在30～300之间的平板，若有二个稀释度均在30～300之间时，比值小于或等于2取平均数，比值大于2则其较小数字。第16页,共21页，2024年2月25日，星期天（2）、如均大于300，则取最高稀释度的平均菌落数乘以稀释倍数报告（3）、如均小于30，则以最低稀释度的平均菌落数乘稀释倍数报告（4）、如菌落数有的大于300，有的又小于30，不在30～300之间，以最接近300或30的平均菌落数乘以稀释倍数报告（5）、如所有稀释度均无菌落生长，则应按小于1乘以最低稀释倍数报告。

第17页,共21页，2024年2月25日，星期天3、菌落数的报告菌落数在1～100时，按实有数字报告，如大于100时，则报告前面两位有效数字，第三位数按四舍五入计算。固体检样以克（g)为单位报告，液体检样以毫升（ml）为单位报告，表面涂擦则以平方厘米（cm2）报告。

第18页,共21页，2024年2月25日，星期天(四)、检验注意事项1、对照平板出现几个菌落时，要追加对照平板；2、吸管进出瓶子或试管时，吸管口不得触及瓶口、管口的外围部分；3、吸管插入试样液内的深度不得小于2.5cm,调整时要使管尖与容器内壁紧贴;4、进行稀释时,吸管口不得与稀释液接触;第19页,共21页，2024年2月25日，星期天5、检样从开始稀