药物的含量测定的方法与验证

关于药物的含量测定的方法与验证基本要求

一、掌握测定药物含量的容量、光谱和色谱分析法，滴定度与含量计算，色谱系统适用性试验的内容、要求及相关计算。药物分析方法验证与内容。二、熟悉定量分析样品的前处理方法。

第2页,共30页，2024年2月25日，星期天第一节定量分析方法的分类和特点测定药物的含量是评价药品质量优劣的重要手段，其测定方法多种多样，而容量分析法、光谱法和色谱法是中国药典收载最多的方法。一般而言：化学原料药的含量测定，首选容量分析法

药物制剂的含量测定，多采用色谱分析法药物制剂的定量检查，选用光谱分析法第3页,共30页，2024年2月25日，星期天1.1特点：根据滴定液的浓度和等当点（滴定误差）时消耗的滴定液体积，计算被测药物的含量。容量分析通常用于测定高含量或中含量组分，即被测组分的含量在1％以上，容量分析法比较准确，一般情况下相对误差可达0.2％以下。容量分析法操作简便、快速、比较准确，所用仪器普通易得，在药品检验工作中具有很大的实用价值。

第一节定量分析方法的分类和特点一、

容量分析法第4页,共30页，2024年2月25日，星期天

1.2计算1.滴定度：指每1ml药典规定摩尔浓度的滴定液所相当的被测药物的质量。2.滴定度（T）的计算：在容量分析中，被测药物（B）与滴定液（T1）之间都按一定的摩尔比进行反应的，反应可表示为：aT1+bB→产物

ab

T(mg/mL)=m×b/a×M

实际滴定度T’＝T×FF=实际摩尔浓度/药典规定的摩尔浓度第5页,共30页，2024年2月25日，星期天3.含量的计算：在测定药物含量时，常用直接滴定法和回滴定法（剩余滴定法）。（1）直接滴定法：W——供试品的称取量；mg；V——消耗的滴定液体积，ml；T——药典规定的滴定度，

mg/ml；F——校正因数

含量(％)＝V×T’/W

×100%

＝V×T×F/W×100%第6页,共30页，2024年2月25日，星期天（2）间接滴定法：包括生成物滴定法和剩余量滴定法。1）生成物滴定法：

指被测药物D与化合物A作用，定量生成化合物B，再用滴定液T滴定化合物B。计算公式同直接法。滴定度计算时考虑D/B,B/T之间的关系P146示例4-3第7页,共30页，2024年2月25日，星期天2）剩余量滴定法（回滴定法）加入定量过量的滴定液T1，使其与被测药物定量反应，待反应完全后，再用滴定液T2回滴反应中剩余的滴定液T1。

t11T1+bD→产物1+剩余T1（D与T1反应）

t2T2+t12T1→产物2

（T2回滴T1）①

不做空白试验时百分含量计算方法计算公式1：含量(％)＝（VT1×FT1–VT2×FT2)×T1/W

×100%

注意：T1与T2的浓度是相当的第8页,共30页，2024年2月25日，星期天②做空白试验时百分含量计算方法含量(％)＝（VT20–VT2S)×FT2×T1/W

×100%

W——供试品的称取量mgVT20

——空白实验时消耗滴定液T2的体积mL

VT2S——样品测定时消耗滴定液T2的体积mL

FT2——滴定液T2的浓度校正因数

T1——药典规定的滴定液T1滴定度，mg/mL第9页,共30页，2024年2月25日，星期天

二、光谱分析法

（一）紫外-可见分光光度法（200nm～760nm)

①灵敏度高，可达10-4g/ml～10-7g/ml

1.特点②准确度高，RSD（%）为2%～5%

③仪器价格低廉，操作简单，易普及

④应用广泛。许多化合物都可采用

2.朗伯-比耳定律

A=ECL吸收系数(E)用摩尔吸收系数(ε)或百分吸收系数(E1%1cm)两种方式表示。两者关系为：E1%1cm＝ε×100/ME1%1cm：指在一定波长下，溶液浓度(C)为1％(W/V)，L＝1cm时的吸收度。第10页,共30页，2024年2月25日，星期天3.仪器校正和检定（1）波长：

波长校正用汞灯中较强谱线237.38,253.65,275.28,296.73,313.16,334.15,365.02,404.66,425.83,546.07nm与576.96nm或用仪器中氘灯的486.02nm与656.10nm进行校正。（2）吸收度的检定：用K2CrO7(60mg)+0.005mol/LH2SO4液定容至1000ml

波长(nm)235(最小)257(最大)313(最小)350(最大)

E1%1cm124.5144.048.62106.6

第11页,共30页，2024年2月25日，星期天（3）杂散光检查：

试剂浓度(g/ml)测定波长透光率(%)

NaI1.00220nm＜0.8NaNO25.00340nm＜0.8（4)对溶剂的要求:220～240nm241～250nm251～300nm300nm以上溶剂+吸收池A＜0.41＜0.20＜0.10＜0.05第12页,共30页，2024年2月25日，星期天(5)测定法要求供试品溶液的A应在0.3～0.7【对照品比较法】用相同溶剂分别配制供试品溶液和对照品溶液，对照品溶液中所含被测物的量应为供试品液中被测物规定量的100％±10％，在规定波长下测定两溶液吸收度后，按下式计算供试品溶液中被测物的浓度：

Cx=(Ax/Ar)Cr

原料药百分含量%=Cx×D/W×100%W——供试品的称取量；mg；Cx——供试品溶液的浓度，mg/ml；D——稀释体积

第13页,共30页，2024年2月25日，星期天【对照品比较法】固体制剂含量相当于标示量的百分数：

标示量（%）=Cx×D/W×W平均/B×100%W——供试品的称取量；mg；Cx——供试品溶液的浓度，mg/ml；D——稀释体积

W平均——单位制剂的平均重量（或装量）B——制剂的标示量第14页,共30页，2024年2月25日，星期天(5)测定法要求供试品溶液的A应在0.3～0.7【吸收系数法】配制供试品溶液，在规定波长处测定其吸收度（A），再将供试品在规定条件下的吸收系数计算含量

Cx=Ax/100E1%1cm

原料药百分含量%=Cx×D/W×100%W——供试品的称取量；mg；Cx——供试品溶液的浓度，mg/ml；D——稀释体积

第15页,共30页，2024年2月25日，星期天【对照品比较法】固体制剂含量相当于标示量的百分数：

注射液标示量（%）=Cx×D/V×V平均/B×1000×100%Cx——供试品溶液的浓度，mg/mL；D——稀释体积

V

——供试品取样量；mLV平均——注射液规格（mL/支）B——标示量（mg/支）第16页,共30页，2024年2月25日，星期天

（二）荧光分光光度法特点灵敏度高，可达10-10g/ml～10-12g/ml在低浓度进行测定，防止F与C不成正比及自熄灭作用

用基准物溶液校正仪器灵敏度，防止样品液荧光衰减灵敏度高，但干扰因素多。

制备荧光衍生物，可提高其灵敏度和选择性。用样品量少，操作简单，方法快速，应用范围较广。

第17页,共30页，2024年2月25日，星期天2.荧光分析仪有二个单色光器—激发单色光器与发射单色光器；且激发光源、样品池和检测器成直角。含量测定常用的方法对照品比较法:Ci=(Ri-Rib)/(Rr-Rrb)×Cr

Ch.P收载地高辛片、利血平片、洋地黄毒苷片。

标示量（%）=Cx×D/W×W平均/B×100%第18页,共30页，2024年2月25日，星期天

三、色谱分析法

按分离原理分为：吸附；分配；离子交换；排阻色谱方法分类按分离方法分为：PC；TLC；柱色谱；GC；HPLC。（一）HPLC法1.对HPLC仪器一般要求色谱柱、流动相按品种项下要求。色谱柱的理论板数：n=5.54(tR/Wh/2)22.系统性试验

分离度：R=2（tR1–tR2)/(W1+W2);要大于1.5

拖尾因子：T=W0.05h/2d1

应在0.9～1.05

第19页,共30页，2024年2月25日，星期天内标法加校正因子测定供试品中主成分含量3.测定方法

标准曲线法

外标法测定供试品中主成分含量外标一点法

应用示例：RP-HPLC法测定盐酸黄酮哌酯片含量，用标准曲线法如头孢拉丁；头孢羟氨苄；头孢唑啉钠用外标一点法第20页,共30页，2024年2月25日，星期天（1）内标法加校正因子测定供试品中主成分含量内标法：将一个已知重量，样品中不含有的纯物质，加至待测样品溶液中，以此纯物质的量为标竿，对比测定待测i组分的含量的方法谓内标法。优点：定量结果与进样量无关（不超载条件下）。对内标物的要求：1、内标物是原样品中不含有的组分。2、内标物的保留时间应与待测成分相近，分离度R≥1.5。3、内标物必须是纯度合乎要求的纯物质。第21页,共30页，2024年2月25日，星期天

精密称（量）取药物对照品和内标物质，分别配成溶液，精密量取各溶液，配成校正因子（f）测定用的含内标的对照品溶液。取一定量注入仪器，记录色谱图。测量对照品和内标物质的峰面积（或峰高），按下式计算校正因子：校正因子（f）＝（As/Cs）内标/（Ai/Ci）对照第22页,共30页，2024年2月25日，星期天

再精密称取供试品，配成溶液，精密量取供试品溶液和上述内标溶液，同法配成供含测的含内标的供试品溶液，取一定量注入仪器，记录色谱图，测量供试品中待测成分和内标物质的峰面积或峰高（A或h），按下式计算含量：

f＝（A’s/C’s）内标/（A’i/C’i）供含量（C’i）供＝f•（A’i）供/（A’s/C’s）内标

第23页,共30页，2024年2月25日，星期天

（2）外标法测定供试品中主成分含量：外标法是以供试品的对照品或标准品作对照物质，相比较以求得供试品的含量。外标法可分为标准曲线法和外标一点法。1）标准曲线法：配制一系列已知浓度的对照品或标准品溶液，在同一操作条件下，按同量注入色谱仪，测其峰面积（峰高），作出峰面积（或峰高）与浓度的标准曲线。然后在相同条件下，注入同量供试品溶液，获得待测组分的峰面积（或峰高），根据标准曲线或其回归方程，计算供试品中待测组分的浓度。第24页,共30页，2024年2月25日，星期天

A＝aC+br＝0.9999

线性范围g•ml-1～g•ml-1

若待测组分的峰面积为Ax，则由上述线性方程可计算出对应的待测组分浓度Cx。应用示例自阅第25页,共30页，2024年2月25日，星期天2）外标一点法精密称（量）取对照品和供试品，分别配制成对照品溶液（C对）和供试品溶液（C供），分别精密量取一定量，注入仪器，记录色谱图，测量对照品的峰面积（A对）和供试品待测成分的峰面积（A供）（或峰高），按下式计算含量：

C供＝（C对/A对）A供外标法简便，但要求进样量准确及操作条件稳定。内标法优点：在进样量不超限范围内，定量结果与进样量无关，但样品配制麻烦，内标物有时不易寻找是其缺点。

第26页,共30页，2024年2月25日，星期天

（二）GC法1.对GC仪器一般要求

载气为氮气；色谱柱为填充或毛细管柱色谱柱的理论板数：n=5.54(tR/Wh/2)22.系统性试验

分离度：R=2（tR1–tR2)/(W1+W2);要大于1.5

拖尾因子：T=W0.05h/2d1

应在0.9～1.05

第27页,