园艺植物栽培课件组织培养技术

植物组织培养技术李学强主要参考资料《植物组织培养》吴殿星，胡繁荣．《植物组织培养》陈世昌．《植物细胞工程实验技术》孙敬三，朱至清．《植物组织培养教程》李浚明．《植物细胞工程实验技术》孙敬三，桂耀林．《植物组织培养手册》颜昌敬．《实用植物组织培养技术教程》曹孜义，刘国民《植物组织培养实用技术》朱建华，彭士勇

《植物细胞工程原理与技术》周维燕

《植物细胞组织培养》刘庆昌，吴国良1.植物组织培养的一般概念植物组织培养(planttissueculture)（广义的）：

在无菌条件下利用人工培养基对植物的器官、组织、细胞以及原生质体进行培养，使之产生再生的完整植株或其它具有经济价值的生物产品的技术。外植体(explant)：由活植物体上切取下来用以培养的那部分组织、器官等。根据外植体的种类不同组织培养可分为：

器官培养（organculture）：外植体为器官的全部或部分或器官原基

组织培养（tissueculture）(狭义的)：外植体为植物的各部分组织

细胞培养（cellculture）：外植体为单细胞或很小的细胞团

原生质体培养（protoplastculture）：外植体为除去细胞壁的原生质体

快速无性繁殖获得脱毒苗

保存种质资源

育种的手段

生产工业原料组培室的构成和一般技术2.1组培室的构成1.准备室需备有的设备有：鼓风干燥箱、落水架、工作台、水池、水桶、水盆、试管刷等，主要用于玻璃器皿、用具和培养材料清洗；还需要有高压水龙头用于冲洗。2.灭菌室需备有高压蒸汽灭菌装置、细菌过滤器、用于培养基及培养器械的灭菌。3.培养基配制室需备有冰箱、化学实验台、药品柜、器械柜、物品存放架以及各种玻璃器皿和用具，包括各种不同容积的容量瓶、烧杯、量筒、移液管、三角瓶、磨口瓶、广口瓶、各种类型培养瓶、玻璃棒、移液管架、试管刷、电炉、微波炉等。4.无菌操作室(接种室)

无菌操作室在工作方便的前提下，宜小不宜大，宜精细密闭，忌粗陋放散，是植物组织培养研究或生产工作中最关键的部分，关系到培养物的污染率，接种工作效率等重要指标。要求如下:(1)地面、天花板及四壁尽可能光洁、避免积染灰尘，易于采取各种清洁措施。(2)干爽、安静、清洁明亮，在适当的位置吊装紫外灯1-2盏，用以经常照射灭菌，使室内保持良好的无菌、低密度有菌状态。(3)最好安置一小型空调机，使室内温度保持在26℃左右，这样就可以在工作时或不工作时都把工作室的门窗紧闭，保持与外界相对隔绝的状态，尽量减少与外界的空气对流，减少尘埃与微生物侵入。(4)经常采用消毒措施，达到较高的无菌水平，以利完全操作提高工作的质量与效率。(5)无菌室外应留有缓冲间，进入无菌室前在此更衣换鞋洗手及处理外界采回准备消毒培养的材料等。无菌操作室应备有超净工作台或接种箱、固定式载物台、移动式载物台、广口瓶、酒精灯、纱布、器械支架、手术剪、解剖刀、解剖针、镊子等。5.培养室应尽量安排在楼层较高处，以利于采光，减少尘埃和杂菌污染的机会。此外应考虑清洁、干燥，培养室保温隔热。培养室中距离窗户较远处的培养架应适当安装人工辅助照明的日光灯。应设计能有效通风的窗户、定期或需要时加强通风散热，如在室内地板稍高处设置进风气窗，在气窗的对侧近天花板设置排风窗，也可安装小功率的排风扇。室内应备有制冷设备、加热设备、控光设备、固定式培养架、旋转式培养架、摇床等。6.鉴定室需备有高倍显微镜、倒置显微镜、相差显微镜、解剖镜、恒温箱、切片机、烤片台、恒温水浴、滴瓶、染色缸、载玻片、盖玻片等。7.驯化移植室应备有温室、弥雾装置、荫棚、移植床、钵、盆、塑料布、草炭、蛭石、粗沙等，用于试管小植株的锻炼和移植。2.2基本设备清洗设配：冷热水源、水槽、各种毛刷、塑料桶或盆、洗濯机、鼓风干燥箱、防尘厨培养容器：培养皿、三角瓶、广口瓶、试管,材质为玻璃或塑料空调25℃±2℃人工气候箱、培养箱培养架、光源（可控）试管架（铁丝制成）摇床（温光可控式摇床）多用途小车培养容器

材料：聚丙烯(PP)、聚碳酸脂(PC)无菌培养容器封口膜培养架枪镊直镊手术刀柄手术刀片手术剪接种工具灭菌器

手提式灭菌锅立式灭菌锅卧式圆形压力蒸气灭菌器单人单面超净台双人水平净化工作台生化培养箱光照培养箱真空干燥箱干热灭菌器洗瓶机：采用清水里外冲冼，可洗广口瓶、三角瓶。超声波清洗器

针头过滤器（用于组培中不耐高温激素的过滤除菌）磁力搅拌器移液器架

移液器4910(整支可消毒系列)

2.3一般技术2.3.1玻璃器皿和塑料器皿的清洗新玻璃器皿因有游离碱性物质，使用前先用1%稀盐酸浸泡一夜，然后用肥皂水洗净，清水冲洗，最后用蒸馏水冲洗一次，干后备用。被污染的旧器皿灭菌洗涤，方法同新器皿，但浸泡时间可短。烘干75℃左右，口向下。贮存防尘厨洗液（重铬酸钾和浓硫酸混合液）浸泡2.3.2灭菌培养基污染来源：培养容器、培养基本身、外植体、接种室的环境、操作器械、培养室的环境。(1)环境灭菌表2-1培养基蒸汽灭菌所需的最少时间容积（ml）在121℃下所需的最少灭菌时间（min）1~20015200~1000301000~200040（2）培养基灭菌培养基装瓶封口灭菌灭菌条件：一般条件1.06kg／cm2121℃消毒15～40min

特殊条件：温度100℃注意：冷却时要缓慢降温。与热易分解的物质如某些生长调节剂（如GA3、IAA、ABA、玉米素）、尿素、某些维生素等不能进行高压灭菌。上述物质可通过滤膜进行灭菌，之后较如高压灭菌后的培养基中（培养基温度40℃）。滤膜孔径≤0.45μm(3)玻璃器皿、塑料器皿和器械灭菌高压蒸汽灭菌同培养基灭菌；塑料器皿因材料而定，聚丙烯、聚甲基戊烯、同质异晶聚合物可以在121℃反复进行高压蒸汽灭菌；聚碳酸酯类每次灭菌时间不超过20min。干热灭菌：玻璃器皿160-180℃3h；灼烧灭菌：95％酒精（4）植物材料灭菌植物材料各部分的表面都可能携带污染微生物，必须进行表面灭菌。内部感染真菌或细菌的植物材料一般弃之不用。可用各种消毒剂进行植物组织消毒，常用消毒剂如表2-2所示。表2-2一些表面消毒剂的消毒效果消毒剂使用浓度消毒时间（min）消毒效果次氯酸钙5％～10％5~30很好次氯酸钠2％5~30很好过氧化氢10％～12％5~15好溴水1％～2％2~10很好硝酸银1％5~30好氯化汞0.1％～1％2~10满意抗生素4～50mg／g30~60相当好注意：表面消毒剂对植物组织也是有毒的，必须正确选择消毒剂的浓度和处理时间，以尽量减少组织的死亡。可同时用两种或多种消毒剂，如常用酒精和升汞同时处理。消毒剂里也可加几滴表面活化剂如Triton-X、Tween-80等，以提高杀毒效果。如果外植体表面污染严重，需用流水冲洗1h或更长时间，或先进行室内培养以得到污染轻的外植体。外植体消毒的一般步骤流水冲洗30～60min70%酒精30～60s植物组织＋消毒液（带盖的玻璃瓶或其它容器）＋(活化剂)

摇动2～3次蒸馏水冲2～3次放入消过毒的培养皿中（5）接种区消毒超净工作台原理：电风扇粗过滤器细过滤器（高效过滤器）滤掉0.3μm的颗粒超净空气吹过台面，风速27±3m／min，这个速度足以阻止工作区被坐在工作台前面的所污染，所有的污染物都会被这种超净气流吹跑，但这种气流不妨碍在台面上使用酒精灯。只要超净工作台不停的运转，台面上即可保持一个无菌的环境。

初次使用应在开动20分钟后再开始操作，以后开动10分钟即可。每次操作前，必须把所需材料全部拿进。台面上的东西不能阻挡气流。3培养基

培养基是植物组织培养的重要条件。

在离体培养条件下，不同种植物的组织对营养有不同的要求，甚至同一种植物不同部位的组织对营养的要求也不相同，只有满足了它们各自的特殊要求，它们才能很好地生长。

因此，没有一种培养基能够适合一切类型的植物组织或器官，在建立一项新的培养系统时，首先必须找到一合适的培养基，培养才有可能成功。3.1.1根据对培养基组成物质的化学成分是否完全了解来区分3.1培养基的种类

可以将培养基分为天然培养基、合成培养基和半合成培养基。

天然培养基是指利用来自于各种动、植物或微生物的原料配制而成的培养基，不能确切知道它的化学成分，稳定性常受原材料等因素的影响。１）天然培养基

合成培养基是一类化学成分和数量完全知道的培养基，它是用已知化学成分的化学药品配制而成。这类培养基化学成分精确、重复性强。

２）合成培养基

在合成培养基中，加入某种或几种天然成分；或者在天然培养基中，加入一种或几种已知成分的化学药品即成半合成培养基。３）半合成培养基

可以分为固体培养基、液体培养基和半固体培养基。3.1.2根据培养基的物理状态来区分１）液体培养基

所配制的培养基是液态的，其中的成分基本上溶于水，没有明显的固形物，液体培养基营养成分分布均匀。

在液体培养基中加入适量的凝固剂即成固体培养基。常用作凝固剂的物质有琼脂、明胶、硅胶等，以琼脂最为常用。２）固体培养基

如果把少量的凝固剂加入到液体培养基中，就制成了半固体培养基。以琼脂为例，它的用量在0.2～1%之间。３）半固体培养基3.1.3根据成分是否完全来分1）基础培养基只含有大量元素、微量元素和有机营养物的培养基称为基础培养基。2）完全培养基除基础培养基成分之外，还包含不同的植物生长调节物质以及有机添加物，称为完全培养基。3.2培养基成分3.2.1.无机营养物无机营养物主要由大量元素和微量元素两部分组成。大量元素:氮、磷、硫、钾、钙、钠、镁、氯等

氮源通常有硝态氮或铵态氮，但在培养基中用硝态氮的较多，也有将硝态氮和铵态氮混合使用的。

磷和硫则常用磷酸盐和硫酸盐来提供。

钾是培养基中主要的阳离子，在近代的培养基中，其数量有逐渐提高的趋势。

而钙、钠、镁的需要则较少。培养基所需的钠和氯化物，由钙盐、磷酸盐或微量营养物提供。

微量元素包括碘、锰、锌、钼、铜、钴和铁。

培养基中的铁离子，大多以螯合铁的形式存在，即FeSO4与Na2—EDTA（螯合剂）的混合，或NaFe—EDTA。3.2.2.有机营养成分

植物组织培养中的培养物不同于完整的植株，没有系统的物质合成等自养功能。为了使离体的培养物能正常生长发育和分化，培养基中除需添加无机盐外，还需添加碳源、维生素、氨基酸等有机成分。(1)碳源

一般来说，蔗糖是最好的碳源，它具有热易变的性质，经高压灭菌后，大部分可分解为D-葡萄糖、D-果糖，仅剩下部分的蔗糖，这更有利于吸收和利用。此外，也可以直接利用果糖、葡萄糖、麦芽糖、纤维二糖等。碳源物质包括糖类、醇类和有机酸，以糖类物质最为重要。

不同糖类对培养材料生长的影响不同，一般来说，以蔗糖作碳源时，离体培养的双子叶植物的根生长得更好。而以右旋糖（葡萄糖）作碳源时，单子叶植物的根生长得较好。根据培养目的的不同，蔗糖使用浓度一般在2％-5％。

碳源除了在培养基中提供培养物所需的碳骨架和能源外，还可在一定程度上调节培养基的渗透压，一般在-1.5～4.1MPa。(2）维生素

主要有维生素B1（盐酸硫胺素）、维生素B6（盐酸毗哆醇）、维生素B5（烟酸）、维生素C（抗坏血酸），有时还需添加维生素H（生物素）、维生素M（叶酸，有时也写作维生素Bc)、维生素B2（核黄素）等。

维生素B1对愈伤组织的产生和生活力有重要作用，维生素B6能促进根的生长，维生素B5与植物代谢和胚的发育有一定关系。

维生素用量一般为0.1～1.Oｍg/L、维生素C用量一般为1～100mg/L。培养基中高浓度维生素C的使用并不一定是植物生长需要，而是作为抗氧化剂以防止组织褐变。

又叫环己六醇，在糖类的相互转化中起重要作用，也是细胞壁的构建成分。肌醇参与碳水化合物、磷脂代谢及离子平衡等生理活动，具有促进活性物质发挥作用的效果，在培养基中加入1.0mg/L的肌醇就足以影响维生素B1的效应。适当使用肌醇，能促进愈伤组织的生长以及胚状体和芽的形成，对组织和细胞的繁殖、分化及细胞壁的形成也有作用。使用浓度一般为50一l00mg/L。(3)肌醇

氨基酸是蛋白质的组成部分，也是一种很好的有机氮源，可直接被植物细胞吸收利用。植物组织培养中最常用的氨基酸是甘氨酸，其它如精氨酸、谷氮酸、谷氨酰胺、天冬氨酸、天冬酰胺、丙氨酸等也常用。有时也应用水解乳蛋白（LH)或水解酪蛋白（CH),它们是牛乳经酶法处理等加工的水解产物，是含有20种左右氨基酸的混合物，用量在10～1000mg/L之间。(4)氨基酸(5)天然复合物

为了促进某些愈伤组织和器官的生长，在培养基中还常加人某种化学成分不明的天然营养混合物，如水解酪蛋白（CH)、水解乳蛋白（LH)、椰乳（CM)、玉米胚乳、麦芽浸出物（ME）和酵母浸出物(YE）等。其大多成分比较复杂，含氨基酸、激素、酶等一些复杂化合物，对细胞和组织的增殖与分化有明显的促进作用，但对器官的分化作用不明显。由于其对一些难培养的植物材料有特殊作用，所以在一些试验中经常应用。①椰乳是椰子的液体胚乳，它是使用最多、效果较好的一种天然复合物，一般使用浓度在l0％--20％。在愈伤组织和细胞培养中椰乳具有促进外植体生长的作用，在马铃薯茎尖和草每微茎尖培养中椰乳具有明显促进茎尖生长的作用。未经加热灭菌的椰乳对促进外植体的生长作用比加热灭菌的椰乳更为明显。②香蕉汁用量为150～200g／L，对pH值的缓冲作用大。主要在兰花的组织培养中应用，对外植体的分化有明显促进作用。③马铃薯汁马铃薯去掉皮后加水煮30min，再经过滤，取其滤液使用，用量为150～200g／L。对pH缓冲作用也大，多用于壮苗的培养。④水解酪蛋白为蛋白质的水解物，主要成分为氨基酸，常用浓度为100-200mg/L。水解酪黄白在酸或酶的作用下易分解，使用时应注意。⑤其它酵母提取液，主要成分为氨基酸和维生素类；麦芽提取液、苹果和番茄的果汁、黄瓜的果实、未熟玉米的胚乳等，近年来，也有利用樱桃汁，甚至人参、西洋参粉和蜂王浆等天然物质的报道。3.2.3生长调节物质常用的生长调节物质大致包括以下三类：1)植物生长素类细胞分裂素3)赤霉素

如吲哚乙酸（IAA）、萘乙酸（NAA）、2，4-二氯苯氧乙酸（2，4-D）、吲哚-3-丁酸（IBA）、萘氧乙酸（NOA）、对氯苯氧乙酸（p-CPA）、三氯苯氧乙酸（2，4，5-T）。

1)植物生长素类IBA、NAA广泛用于生根，并与细胞分裂素互作促进茎芽的增值。2，4-D、2，4，5-T用于愈伤组织的诱导和生长。

生长素一般溶于95％酒精或0.1mol／L的NaOH中，后者的溶解效果更好。细胞分裂素

苄氨基嘌呤（BAP）、苄基腺嘌呤（6-BA）、异戊烯氨基嘌呤（2-ip）、玉米素（Zt）、激动素（Kt）等。

作用是促进细胞分裂、愈伤组织分化不定芽、枝条的增殖。

细胞分裂素一般溶于0.5或1mol／L的HCl或稀薄的NaOH中。3)赤霉素组织培养中使用的赤霉素只有一种，即GA3。与生长素与细胞分裂素相比，赤霉素不常使用。

作用促进矮小植株茎节伸长、刺激不定胚正常发育成小植株。

赤霉素易溶于冷水，最多每升水可溶解1000mg。但GA3溶于水后不稳定，容易分解，最好以95％的酒精配成母液保存在冰箱中，一般不用，但可促进个别物种的愈伤组织的生长。4）脱落酸3.2.4其它成分1）活性炭作用因物种而不同。兰花、胡萝卜、长春藤、和番茄刺激培养物的生长和分化，因吸附抑制物质或使培养基变暗。烟草、大豆、山茶花抑制生长，因吸附植物激素。活性炭用量一般为0.5％～3％。注意：高压灭菌之前加入活性炭会降低培养基的pH值，使琼脂不易凝固。2）硝酸银

作用是促进愈伤组织器官发生或体细胞胚胎发生；对克服试管苗玻璃化及早衰和落叶等也有明显效果。抑制乙烯活性，原理是竞争性的结合于细胞膜上的乙烯受体蛋白，不能减少乙烯的积累。使用浓度一般为1～10mg／L，过滤灭菌。注意：不能把培养物长期存在含AgNO3的培养基上，否则，会导致再生植株畸形。作用是防止外植体内生菌造成的污染。青霉素、链霉素、土霉素、四环素、氯霉素、利福平、卡那霉素、庆大霉素等。用量一般为5～20mg／L注意：选择抗生素要有针对性；联合用药；抗生素有抑制生长发育的作用；降低植株的抗病性。3）抗生素3.2.5琼脂及其它固化剂琼脂

40℃凝固，一般使用浓度0.7％～1％。注意：不可用于营养需要研究，因其含有Ca、Mg和微量元素。Gelrite100℃左右融化，30～45℃凝固，pH值4和7之间凝胶强度变化不大。琼脂糖凝固温度比琼脂低，多用于原生质体培养。3.2.6pH不同外植体要求pH值不同。一般在灭菌之前将pH值调到5.0～6.0之间。pH≥6，培养基会变硬；pH≤5，琼脂不能很好的凝固。培养基成分的浓度表示一般以质量表示（mg／L）国际植物生理协会建议使用摩尔（mole）值:大量元素、有机物质浓度用mmol／L.微量元素、激素、维生素等用μmol／L3.3培养基选择

培养基有许多种类，根据不同的植物和培养部位及不同的培养目的需选用不同的培养基

培养基的产生最早是Sacks(1680)和Knop(1681)，他们对绿色植物的成分进行了分析研究，根据植物从土中主要是吸收无机盐营养，设计出了由无机盐组成的Sacks和Knop溶液，至今仍在作为基本的无机盐培养基得到广泛应用。以后根据不同目的进行改良产生了多种培养基，White培养基在40年代用得较多，现在还常用。而到60和70年代则大多采用MS等高浓度培养基，可以保证培养材料对营养的需要，并能生长快、分化快，且由于浓度高，在配制、消毒过程中某些成分有些出入，也不致影响培养基的离子平衡。

培养基的名称，多数以发明人的名字来命名，如White培养基，Murashige和Skoog培养基（简称MS培养基），也有对某些成分进行改良称作改良培养基。

目前国际上流行的培养基有几十种，常用的培养基及特点如下：

（1）MS培养基

它是1962年由Murashige和Skoog为培养烟草细胞而设计的。特点是无机盐和离子浓度较高，为较稳定的平衡溶液。其养分的数量和比例较合适，可满足植物的营养和生理需要。它的硝酸盐含量较其他培养基为高，广泛地用于植物的器官、花药、细胞和原生质体培养，效果良好。有些培养基是由它演变而来的。大量元素含量微量元素含量铁盐含量有机物含量其他含量KNO31900H3BO36.2FeSO47H2O27.8肌醇100蔗糖30000NH4NO31650MnSO44H2O22.3Na2EDTA2H2O37.3烟酸0.5琼脂8000MgSO47H2O370ZnSO47H2O8.6盐酸硫胺素0.5

KH2PO4170Na2MoO42H2O0.25盐酸吡哆醇0.5CaCl22H2O440CuSO45H2O0.025甘氨酸2CoCl26H2O0.025KI0.83单位：mg/L(2)改良怀特培养基

是1943年由White为培养番茄根尖而设计的。1963年又作了改良，称作White改良培养基，提高了MgSO4的浓度和增加了硼素。其特点是无机机盐数量较低，适于生根培养。大量元素含量微量元素含量铁盐含量有机物含量其他含量KNO380H3BO31.5Fe2(SO4)32.5肌醇100蔗糖30000Ca(NO3)24H2O300MnSO44H2O7.0烟酸0.3琼脂8000MgSO47H2O720ZnSO47H2O3.0盐酸硫胺素0.1

NaH2PO44H2O16.5MoO30.0001盐酸吡哆辛0.1KCl65CuSO45H2O0.001甘氨酸3Na2SO4200(3)N6

是1974年朱至清等为水稻等禾谷类作物花药培养而设计的。其特点是成分较简单，KNO3和（NH4)2SO4含量高。在国内已广泛应用于小麦、水稻及其他植物的花药培养和其他组织培养。大量元素含量微量元素含量铁盐含量有机物含量其他含量KNO32830H3BO31.6FeSO47H2O27.8烟酸0.5蔗糖30000(NH4)2SO4463MnSO44H2O4.4Na2EDTA2H2O37.3盐酸硫胺素1琼脂8000MgSO47H2O185ZnSO47H2O1.5盐酸吡哆醇0.5KH2PO4400KI0.8甘氨酸2CaCl22H2O166

（3）B5培养基

是1968年由Gamborg等为培养大豆根细胞而设计的。其主要特点是含有较低的铵，这可能对不少培养物的生长有抑制作用。从实践得知有些植物在B5培养基上生长更适宜，如双子叶植物特别是木本植物。组成成分数量(mg/l）组成成分数量(mg/l)KNO32500FeSO4·7H2O27.8CaCl2·2H2O150CuSO4·5H2O0.025MgSO4·7H2O250蔗糖40(NH4)2SO4

134pH5.5KI0.75肌醇100H3BO4

3.0烟酸1.0MnSO4·4H2O10盐酸吡哆醇1.0ZnSO4·7H2O2.0激动素0.1Na2MoO4·2H2O0.252,4－D0.1－1.0CoCl2·6H2O0.025盐酸硫铵10Na2-EDTA37.3（5）KM-8p培养基

它是1974年为原生质体培养而设计的。其特点是有机成分较复杂，它包括了所有的单糖和维生素，广泛用于原生质融合的培养。

植物名外植体诱导培养继代培养生根培养草莓匍匐茎1/2MS+BA0.21/2MS+BA0.51/2MS吊钟海堂叶片MS+BA1.0+NAA0.2MS+BA1.0+NAA0.1MS+NAA0.2海石竹叶片MS+BA1.0+NAA0.2MS+BA1.0+NAA0.1MS+NAA0.2马铃薯苗尖MS+BA1.0+IAA0.01MS+BA1.0+IAA0.01MS+BA1.0+IAA0.01分生组织MS+NAA0.07+GA0.004MS+NAA0.07+GA0.004MS+NAA0.07+GA0.004大蒜顶端分生组织MS/MS+NAA1.0芽顶端B5+2ip0.5+NAA0.1B5+2ip0.5+NAA0.1B5+2ip0.01+NAA0.2洋葱鲜茎B5+2,4-D1B5+2ip1/花椰菜分生组织LS+IAA8.0+KIN2.56LS+IAA8.0+KIN2.56LS+IAA8.0+KIN0.02油菜下胚轴、茎段B5+BA1.5~2.0+IBA0.2+GA0.5B5+BA1.5~2.0+IBA0.2+GA0.51/2B5+NAA0.05+IAA0.1西瓜苗端LS+KIN1.0+IAA0.05LS+KIN2.0+IAA0.05LS+IAA2.0葡萄茎尖MS+NAA0.1MS+NAA0.1/麝香石竹茎段MS+BA1.0+IAA0.01MS+BA1.0+IAA0.01MS+IAA0.1唐昌蒲腋芽MS+KIN2.0+NAA0.1MS+KIN2.0+NAA0.1MS+NAA0.5+AC0.3月季萌枝MS+BA0.5+NAA0.1MS+BA0.5+NAA0.1MS+BA0.5+NAA0.1非洲菊茎尖MS+KT1+IAA2MS+KT10+IAA0.5MS+IAA10MS+BA2+NAA0.2~0.5MS+BA2+NAA0.2~0.5MS+White+IBA1康乃馨茎尖MS+KT0.5+NAA0.1MS+KT2+NAA0.02/MS+KT2+NAA0.2MS+KT0.5+NAA0.02/仙客来球茎White+KT2.5//满天星茎尖MS(或White)+BA1+NAA0.05MS(或White)+BA1+NAA0.05/香雪球茎MS+IAA2+2,4-D5MS+BA1+IAA0.02~0.2/变叶木茎段MS+BA1.5+NAA0.15MS+BA2.5+NAA或IAA0.1MS+NAA0.5风信子鲜茎、花序MS+NAA0.5~10+2,4-D0.2~1//矢车菊茎Bonner+2,4-D0.7//大丽菊侧芽MS+BA1+NAA1MS+BA1+NAA1MS+NAA0.5~1

3.4培养基的配制培养基含有几十种营养成分，为了避免每次配制培养基都要对这几十种成分进行称量，可将培养基中的各种成分，按原量的10~20倍或100~200倍分别称量，配成浓缩液，这种浓缩液叫做培养基母液。3.4.1母液的配制与保存

其中大量元素倍数略低，一般为10－20倍，微量元素和有机成分等一般为100－200倍。

如制备MS培养基母液所需的各类物质的量见下表，以供参考。母液Ⅰ

mg／LNH4NO3

33

000KNO3

38

000CaCl2·2H2O

8

800MgSO4·7H2O

7

400KH2PO4

3

400母液ⅡKI